一种抗糖尿病的单克隆抗体制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体的说是一种抗糖尿病的单克隆抗体，其特征在于具体的生产工艺是：（１）Ｔ淋巴细胞尼龙毛分离法，取小鼠ＢａＬｂ／Ｃ外周血，用尼龙毛柱Ｌ型来分离Ｔ淋巴细胞，将粘附于尼龙毛上的Ｔ淋巴细胞洗到培养基中，离心，用ＲＰＭＩ－１６４０培养液洗涤，然后再离心收集分离后的Ｔ淋巴细胞；本发明专利技术与现有技术相比，工艺流程简单，具有与Ｔ淋巴细胞表面抗原蛋白高特异性，高亲合力结合并具有生物活性能阻断Ｔ细胞对胰腺中β细胞损害的单克隆抗体。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种抗糖尿病的单克隆抗体，其特征在于具体的生产工艺是：（１）Ｔ淋巴细胞尼龙毛分离法，取小鼠ＢａＬｂ／Ｃ外周血，用尼龙毛柱Ｌ型来分离Ｔ淋巴细胞，将粘附于尼龙毛上的Ｔ淋巴细胞洗到培养基中，离心，用ＲＰＭＩ－１６４０培养液洗涤，然后再离心收集分离后的Ｔ淋巴细胞；（２）动物免疫，第一次免疫，Ｔ淋巴细胞悬液１Ｘ１０↑［７］／０．３ｍｌ，大鼠腹腔内直接注射，第二次免疫，两周后，Ｔ淋巴细胞悬液１Ｘ１０↑［７］／０．３ｍｌ，腹腔内再注射。二周后采血测其效价，检测免疫效果。取脾脏收集Ｂ细胞，（３）细胞融合，将免疫后的Ｂ细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，在ＨＡＴ培养液中培养，筛选，（４）克隆杂交瘤细胞，用有限稀释法来分离第一次筛选后的杂交瘤细胞，然后将细胞放置９６孔板培养皿中培养一周，中间换一次培养液。二周后，再用有限稀释法来分离９６孔板培养皿中的杂交瘤细胞；（５）克隆单杂交瘤细胞，将上述第四步分离得到的杂交瘤细胞分别放置０．３％琼脂ＲＰＭＩ－１６４０（含有１０％胎牛血清）培养四周，然后分别挑出细胞集落进一步培养，几周后能得到大量的杂交瘤细胞；（６）抗体的测定，将大量的杂交瘤细胞放置无血清的培养液中培养，每三天收集一次培养液，离心后保留上清液（含有单克隆抗体），杂交瘤细胞再进一步培养。用５升的上清液纯化抗体；（７）抗体的应用，两种单克隆抗体各１００微克混合在一起，ＮＯＤ小鼠腹腔内注射，一周后再腹腔内注射一次，然后观察血糖和胰岛素的变化。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：上海新号源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]