本发明专利技术公开了用于检测rs1800497的引物组合物、检测试剂盒及检测方法，其中，将特异性引物设计在B1c的5’端，同时，又在其5’端的第三位人为引进一个突变，进一步加强了引物的特异性，有效防止了假阳性的产生；利用前述特异性引物组合物制作而成的检测试剂盒，价格低廉，操作简便，结果准确，适合临床大范围普及推广；基于前述检测试剂盒和Allele-Specific LAMP技术的检测rs1800497的方法，操作简便，只需一步加样，两小时内就可给出检测结果，并且仅需普通的水浴锅就可以开展检测，又极大的节约了成本，非常值得推广。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及引物组合物、检测试剂盒及检测方法，具体设及用于检测rsl800497 的A等位基因和G等位基因的引物组合物、基于前述两种引物组合物的检测试剂盒W及基 于前述检测试剂盒的检测方法，属于生物
技术介绍
多己胺值opamine，DA)，是在人体大脑内含量最为丰富的儿茶酪胺类神经递质，可 调控人体中枢神经系统中多种重要的神经内分泌功能，并且与多种神经精神类疾病（如精 神分裂、帕金森病等）的发生密切相关。因此，近年来关于多己胺的分泌调控及其受体编码 基因的研究，一直是神经科学领域研究的焦点。DA在进行神经内分泌功能调控作用时，主要通过其相应的膜受体来发挥功能。研 究者们已成功分离出五种多己胺受体（DA2R),根据受体的生物化学和药理学性质，可分为 D1和D2两类受体。其中，D1类受体包括D1和D5两种类型，而D2类受体包括D2、D3和D4 Ξ种受体。目前，多己胺受体基因多态性与神经性精神病的相关性研究工作的重点主要集中 在D2受体上，D2受体由位于11号染色体llq23. 2的多己胺受体D2 (dopamine rec巧tor D2, D畑2)基因D畑2编码，与D畑2基因相邻的错蛋白重复和激酶域1 (ankyrin repeat and kinase domain containing Ι,ΑΝΚΚΙ)基因近来同样受到了临床研究者们的关注。ANKKl 基因与DRD2基因存在片段重叠和共享单倍型区域，其8号外显子上存在1个单核巧酸多态 性位点（SNP)rsl800497(c. 2317G〉A，Glu71：3Lys)，又称D畑2TaqlA多态性。有证据显示，携 带该SNP位点的等位基因可使大脑纹状体内的DRD2密度下降，携带DRD化S1800497A等位 基因的患者在应用第二代抗精神病药治疗期间静坐不能不良反应的发生率显著高于该位 点GG基因型患者。所WCFDA发布的《药物代谢酶和药物作用祀点基因检测技术指南（试 行）》指出，"携带rsl800497A等位基因的患者应用第二代抗精神病药时静坐不能不良反应 的发生风险增加，应注意。" 目前，研究者们测定类多己胺D2受体的基因型时，采用的方法主要是PCR-RFLP 法、测序法运两种。然而，运两种方法操作繁琐，需要反复开管操作，容易造成交叉污染，并 且测序法需要依赖非常昂贵的进口设备及试剂，更加难W大规模推广。所W，开发一种价格 低廉，并且操作简便，适合临床大范围普及推广的DBD2等位基因的基因检测试剂盒，对于 神经精神类疾病患者临床药物检测方面的工作来讲，具有非常大的价值。环介导的等溫扩增（Loop-mediatedIsothermalAmplification,LAMP)是日本 科学家于2000年提出的一种核酸恒溫扩增技术，其主要特点是针对祀基因的6个区域设计 4条特异引物，在链置换DNA聚合酶度StDNApolymerase)的作用下进行恒溫扩增，仅需 15-90分钟即可产生109-1〇1°数量级的产物。反应结束后通过肉眼直接观察体系状态的改 变来判定待测样本的基因型，无需开管，因此大大简化了操作步骤，同时又可W有效避免样 本交叉污染，而且，仅需普通水浴锅即可开展检测，又节约了大量的检测成本。 LAMP相对于其他W PCR为基础的检测手段而言，具有W下优越性： (1)灵敏度高：LAMP扩增模板可低至6个拷贝，比传统PCR法高出1000倍，具有与 实时化qman PCR同样的灵敏度； (2)特异性好：LAMP反应需要针对待扩增模板6个区域设计4条引物，只有运4条 引物都能完全与模板配对才能引发后续的扩增； (3)操作简便、成本低廉：LAMP只需配置好反应体系并置于等溫条件的水浴锅或 者其他恒溫设备即可，无需任何昂贵的设备仪器，大大降低检测成本； (4)结果易于判定：LAMP反应的结果检测甚至无需电泳，只需通过肉眼直接观察 扩增管的浊度或者反应体系的颜色变化来判定结果即可。 因此，LAMP是一种非常值得推广的检测手段。[001引本专利技术在LAMP的基础上，采用等位基因特异性环介导等溫扩增(Allele-Specific LAMP)技术，在特异性要求最为严格的Flc或者Blc的5'端（参照图 1)，针对rsl800497的A等位基因和G等位基因设计特异引物W及检测用的组合物及方法， 用于指导第二代抗精神病药的个体化用药。
技术实现思路
本专利技术的目的在于：提供一种用于检测rsl800497的A等位基因和G等位基因 的引物组合物，并提供一种基于前述两种引物组合物的用于检测rsl800497的检测试剂 盒，同时在LAMP的基础上提供一种基于该检测试剂盒和等位基因特异性环介导等溫扩增 (Allele-Specific LAMP)技术的用于检测rsl800497的方法，用于指导第二代抗精神病药 的个体化用药。 为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案： 一种用于检测rsl800497的A等位基因的引物组合物，其特征在于，该引物组合物 由4条引物组成，前述4条引物的序列分别为： F3A GCTTAGAACCACCCAGAGTG B3A TGTCCACGCCCGCAA FIPA ACTGGCCCTCCGCAGCCACTGACGGCTCCTTGCC ΒΙΡΑ TGCCCAGCACTTTGAGGATGGCTGGGCTGGACACCCG,[002。其中，ΒΙΡΑ是检测A等位基因的特异引物。 一种用于检测rsl800497的G等位基因的引物组合物，其特征在于，该引物组合物 由4条引物组成，前述4条引物的序列分别为： F3G TGCCCTGCTTTCGGCT B3G GTCCACGCCCGCAACFIPG GCGCCCAGCTGGACGTCGCGGAGGGCCAGTTGC BIPG CGGCCAGCACTTTGAGGATGGCTGGGCTGGACACCCG, 其中，BIPG是检测G等位基因的特异性引物。 一种用于检测rsl800497的检测试剂盒，其特征在于，该检测试剂盒由反应体系A 和反应体系G组成， 前述反应体系A的组分及含量为： 4条引物的序列分别为：F3AGCTTAGAACCACCCAGAGTGB3ATGTCCACGCCCGCAAFIPAACTGGCCCTCCGCAGCCACTGACGGCTCCTTGCCΒΙΡΑTGCCCAGCACTTTGAGGATGGCTGGGCTGGACACCCG； 前述反应体系G的组分及含量为：[003引4条引物的序列分别为：F3GTGCCCTGCTTTCGGCTB3GGTCCACGCCCGCAACFIPGGCGCCCAGCTGGACGTCGCGGAGGGCCAGTTGCBIPGCGGCCAGCACTTTGAGGATGGCTGGGCTGGACACCCG。 一种用于检测rsl800497的方法，其特征在于，该检测方法基于前述的检测试剂 盒，包括W下步骤： -、抽取静脉血W邸TA抗凝管保存，每管取200ul血液，用DNA提取试剂盒提取全 基因组DNA作为检测的模板，W超纯水代替模板做阴性对照； 二、将模板或超纯水分别加入到反应体系A和反应体系G中，于60°C下反应 80min，之后升溫至80°C灭活20min，观察体系本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测rs1800497的A等位基因的引物组合物，其特征在于，该引物组合物由4条引物组成，所述4条引物的序列分别为：F3A GCTTAGAACCACCCAGAGTGB3A TGTCCACGCCCGCAAFIPA ACTGGCCCTCCGCAGCCACTGACGGCTCCTTGCCBIPA TGCCCAGCACTTTGAGGATGGCTGGGCTGGACACCCG，其中，BIPA是检测A等位基因的特异引物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张井存，汪大为，
申请(专利权)人：北京晋祺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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