抗体药物缀合物制造技术

本发明专利技术涉及抗cKIT抗体、抗体片段、抗体药物缀合物和它们治疗癌症的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体药物缀合物专利
本公开涉及抗cKIT抗体、抗体片段、抗体药物缀合物和它们治疗癌症的用途。专利技术背景cKIT是一种结合配体干细胞因子(SCF)的单次跨膜受体酪氨酸激酶。SCF诱导cKIT的同型二聚化，所述同型二聚化激活其酪氨酸激酶活性并通过PI3-AKT途径和MAPK途径发送信号(Kindblom等人,AmJ.Path.1998152(5):1259)。作为猫逆转录病毒表达的截短形式，起初将cKIT作为一种癌基因发现(Besmer等人,JVirol.1986；60(1):194–203)。克隆相应的人基因显示cKIT是III型受体酪氨酸激酶的成员，其中认为FLT3、CSF-1受体和PDGF受体属于本家族成员。为cKIT的突变体的小鼠已经显示，造血细胞、生殖细胞、肥大细胞和黑素细胞的发育需要cKIT。在人类中，cKIT功能丧失可能导致耳聋和皮肤和毛发的去色素沉着。已经在多种癌症中描述了cKIT的众多获得功能的突变。这类癌症包括胃肠道间质肿瘤(GIST)、急性髓样白血病(AML)、小细胞肺癌(SCLC)、肥大细胞白血病(MCL)和胰腺癌(Hirota等人,Science1998(279):577；Esposito等人,Lab.Invets.200282(11):1481)。因为cKIT是癌基因的这些初步提示，产生了一种抗体，所述抗体将cKIT鉴定为急性髓性白血病的标志物(Gadd等人,Leuk.Res.1985(9):1329)。通过使用来自人类患者的白血病母细胞和结合型cKIT，产生这种鼠单克隆抗体，称作YB5.B8，所述结合型cKIT在急性髓性白血病细胞的表面上大量表达，但是未检测到正常血液或骨髓细胞上的cKIT(Gadd等人，上文)。产生了阻断SCF与cKIT结合并且因此阻断cKIT信号传导的第二种cKIT抗体(SR-1)(Broudy等人,Blood199279(2):338)。SR-1抗体的生物学效果是抑制BFU-E和CFU-GM生长，并且基于这种证据，建议使用它在造血或肿瘤细胞生长方面进一步研究(Broudy等人，上文)。在其他的癌症研究中，研究者发现用伊马替尼(cKIT的小分子抑制剂)治疗将显著减少GIST细胞系增殖。但是，伊马替尼处理的细胞随时间推移而变得耐药，原因在于cKIT中的二次突变(Edris等人,Proc.Nat.Acad.Sci.USA,提早在线版2013)。然而，如果将GIST细胞用SR-1抗体作为第二治疗药处理，则存在细胞增殖的显著减少及细胞表面上cKIT表达的下降(Edris等人，上文)。因此，裸露的SR-1抗体有效解决了人GIST系中的伊马替尼耐药性问题，提示伊马替尼/抗cKIT抗体组合可能是有用的。抗体药物缀合物抗体药物缀合物(“ADCs”)已经用于治疗癌症中细胞毒性药物的局部递送(参见例如，Lambert,Curr.OpinionInPharmacology5:543-549,2005)。ADC允许定向递送药物部分，其中可以实现最大效力，同时毒性最小。由于更多的ADC显示有前景的临床结果，因此开发新治疗药用于癌疗法的需求增加。专利技术简述本公开是涉及通式Ab-(L-(D)m)n的抗体药物缀合物或其可药用盐；其中Ab是与人cKIT的表位特异性结合的抗体或其抗原结合片段；L是接头；D是药物部分；m是从1至8的整数；并且n是从1至10的整数。抗体药物缀合物，其中所述n是0或1。抗体药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合cKIT的胞外结构域(SEQIDNO.160)。抗体药物缀合物，其中所述抗体或抗原结合片段在结构域1-3处(SEQIDNO.155)与人cKIT的表位特异性结合。抗体药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段在SEQIDNO.161和SEQIDNO.162处特异性结合人cKIT。抗体药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段在SEQIDNO.163和SEQIDNO.164处特异性结合人cKIT。抗体药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：(i)重链可变区，所述重链可变区包含(a)SEQIDNO:76的HCDR1(CDR-互补决定区)、(b)SEQIDNO:77的HCDR2、(c)SEQIDNO:78的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQIDNO:85的LCDR1、(e)SEQIDNO:86的LCDR2和(f)SEQIDNO:87的LCDR3；(ii)重链可变区，所述重链可变区包含(a)SEQIDNO:22的HCDR1、(b)SEQIDNO:23的HCDR2、(c)SEQIDNO:24的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQIDNO:31的LCDR1、(e)SEQIDNO:32的LCDR2和(f)SEQIDNO:33的LCDR3；(iii)重链可变区，所述重链可变区包含(a)SEQIDNO:130的HCDR1、(b)SEQIDNO:131的HCDR2、(c)SEQIDNO:132的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQIDNO:139的LCDR1、(e)SEQIDNO:140的LCDR2和(f)SEQIDNO:141的LCDR3；(iv)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQIDNO:58的HCDR1、(b)SEQIDNO:59的HCDR2、(c)SEQIDNO:60的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQIDNO:67的LCDR1、(e)SEQIDNO:68的LCDR2和(f)SEQIDNO:69的LCDR3；(v)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQIDNO:40的HCDR1、(b)SEQIDNO:41的HCDR2、(c)SEQIDNO:42的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQIDNO:49的LCDR1、(e)SEQIDNO:50的LCDR2和(f)SEQIDNO:51的LCDR3；(vi)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQIDNO:94的HCDR1、(b)SEQIDNO:95的HCDR2、(c)SEQIDNO:96的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQIDNO:103的LCDR1、(e)SEQIDNO:104的LCDR2和(f)SEQIDNO:105的LCDR3；(vii)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQIDNO:112的HCDR1、(b)SEQIDNO:113的HCDR2、(c)SEQIDNO:114的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQIDNO:121的LCDR1、(e)SEQIDNO:122的LCDR2和(f)SEQIDNO:123的LCDR3；或(viii)重链可变区，所述重链可变区包含：(a)SEQIDNO:3的HCDR1、(b)SEQIDNO:4的HCDR2、(c)SEQIDNO:5的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQIDNO:12的LCDR1、(e)SEQIDNO:13的LCDR2和(f)SEQIDNO:14的LCDR3。抗体药物缀合物，其中CDR内部的至少一个氨基酸由表1的另一种抗cKIT抗体的相应CDR本文档来自技高网...

【技术保护点】
下式的抗体药物缀合物Ab‑(L‑(D)m)n或其可药用盐；其中Ab是与人cKIT的表位特异性结合的抗体或其抗原结合片段；L是接头；D是药物部分；m是从1至8的整数；并且n是从1至10的整数。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.15 US 61/793,6411.下式的抗体药物缀合物Ab-(L-(D)m)n或其可药用盐；其中Ab是与人cKIT在如SEQIDNO.155所示的结构域1-3处的表位特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含(i)重链可变区，所述重链可变区包含(a)SEQIDNO:76的HCDR1、(b)SEQIDNO:77的HCDR2、(c)SEQIDNO:78的HCDR3；和轻链可变区，所述轻链可变区包含：(d)SEQIDNO:85的LCDR1、(e)SEQIDNO:86的LCDR2和(f)SEQIDNO:87的LCDR3；L是接头；D是药物部分；m是从1至8的整数；并且n是从1至10的整数，其中所述抗原结合片段选自scFv、Fab、F(ab')和F(ab)2。2.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中所述n是3或4。3.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体或其抗原结合片段在SEQIDNO.161和SEQIDNO.162处特异性结合人cKIT。4.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体是单克隆抗体。5.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体是嵌合抗体。6.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体是人源化抗体。7.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体是人工程化抗体。8.根据权利要求1所述的抗体药物缀合物，其中所述抗体是人抗体。9.根据权利要求1-8中任一项所述的抗体药物缀合物，其中所述接头(L)选自可切割接头、不可切割接头、亲水接头、预先带电荷的接头和基于二羧酸的接头。10.根据权利要求9所述的抗体药物缀合物，其中所述接头衍生自选自以下的交联试剂：N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基二硫代)戊酸酯(SPP)、N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯(SPDB)、N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基二硫代)2-磺基-丁酸酯(磺基-SPDB)、N-琥珀酰亚胺基碘乙酸酯(SIA)、N-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(SIAB)、马来酰亚胺PEGNHS、N-琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺甲基)环己烷羧酸酯(SMCC)、N-磺基琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺甲基)环己烷羧酸酯(磺基-SMCC)或2,5-二氧杂吡咯烷-1-基17-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5,8,11,14-四氧代-4,7,10,13-四氮杂十七碳-1-酸酯(CX1-1)。11.根据权利要求10所述的抗体药物缀合物，其中所述接头衍生自交联试剂N-琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺甲基)环己烷羧酸酯(SMCC)。12.根据权利要求1-8中任一项所述的抗体药物缀合物，其中所述药物部分(D)选自V-ATP酶抑制剂、促凋亡剂、Bcl2抑制剂、MCL1抑制剂、HSP90抑制剂、IAP抑制剂、mTOR抑制剂、微管稳定剂、微管去稳定化剂、澳瑞司他汀、多拉...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·阿布拉姆斯，S·科恩，C·P·方东，T·胡贝尔，K·米勒，S·H·施莱尔，K·U·蒂索达格特，C·芬纳，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH