一种重组抗OPGL单克隆抗体制造技术

本发明专利技术涉及基因工程产品领域，更具体地，本发明专利技术公开了一种重组抗OPGL单克隆抗体及其用途；所述抗体包括如SEQ ID NO:7所示的重链可变区的第62、105位位点上的氨基酸被取代和/或如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区的第92位位点上的氨基酸被取代。本发明专利技术的重组抗OPGL抗体比现有的αOPGL-1单抗表现出更强的亲和力，可用于制备治疗骨质稀少疾病、患者中的伴随骨损失的炎症状况、患者中的伴随骨损失的自身免疫疾病的药物。

Recombinant anti OPGL monoclonal antibody

The present invention relates to the field of genetic engineering products, more specifically, the invention discloses a recombinant anti OPGL monoclonal antibody and its application; the antibodies including amino acid heavy chain variable region such as SEQ ID NO:7 shown in the sixty-second, 105th sites to be replaced and / or SEQ ID NO:8 shown the light chain variable region ninety-second site was replaced. The invention of the recombinant anti OPGL antibody than alpha OPGL-1 monoclonal antibody showed a stronger affinity of existing drugs, can be used for the treatment of bone loss in patients with osteopenia in inflammatory diseases, and in patients with bone loss in autoimmune diseases.

【技术实现步骤摘要】
一种重组抗OPGL单克隆抗体
本专利技术涉及生物医药
，更具体的，本专利技术涉及一种重组抗骨保护素配体(OPGL)单克隆抗体。
技术介绍
骨组织提供对身体的支持，并且包括矿物质(包括钙和磷)，胶原蛋白和非胶原蛋白基质，和细胞。活组织在称为沉积的骨形成和称为再吸收的骨分解之间表现出动态平衡。在骨，骨细胞，成骨细胞和破骨细胞中发现的三种类型的细胞都涉及这种平衡。成骨细胞促进骨组织的形成，而破骨细胞与再吸收相关。与骨形成相比，骨基质和矿物质的再吸收或溶解是一个快速而有效的过程，并且能从骨释放大量矿物质。破骨细胞参与骨骼组织正常重塑的调节和激素诱导的再吸收。例如，反应于胞外液中钙离子降低的浓度的甲状旁腺激素的分泌刺激再吸收。相反，再吸收的抑制作用是降钙素的功能。另外，维生素D的代谢物改变骨对甲状旁腺激素和降钙素的反应。骨保护素配体(OPGL)是细胞因子TNF家族的一员，通过与NF-κB(RANK，也称作破骨细胞分化和激活受体，或ODAR)的受体激活剂结合而促进破骨细胞的形成。另一方面，骨保护素(OPG)，通过隔离OPGL并且阻止OPGL与ODAR缔合而抑制破骨细胞的形成。因此，与ODAR缔合的OPGL的量与骨沉积和再吸收之间的平衡相关。骨骼成熟之后，骨骼中骨的量反映骨形成和骨再吸收的平衡(或失衡)。在骨成熟之后第四个十年之前骨质达到高峰。在第四和第五个十年之间，平衡转移并且骨再吸收占优势。骨量随着年龄不可避免的减少在女性要比男性开始得早，并且某些女性在绝经期之后显著加快(主要是高加索人和亚洲人血统的那些)。骨质稀少是与一般骨质低于正常水平的任何降低相关的状况。这样的状况可以由骨合成速度减慢或者骨破坏速度加快或者这两者而发生的一种状况。骨质稀少的一个常见形式是原发性骨质疏松，也称作绝经后和老年骨质疏松。这种骨质疏松形式是随着年龄骨普遍损失的结果，并且经常是伴随骨形成正常速度的骨再吸收加速的结果。在美国，很多白人女性发生有症状的骨质疏松症。骨质疏松和45岁和更年老妇女髋部，股骨，颈和转子间骨折的发生率之间存在直接关系。老年男性在50和70岁之间可能发生有症状的骨质疏松。在某些情况下，骨质疏松可能由OPGL提高的水平或活性而产生。因此，能调节破骨细胞生成中OPGL的活性的分子是有用的。已经鉴定出几种因子，它们对绝经后和老年骨质疏松有作用。它们包括伴随老化和归于钙和其他矿物质降低的肠吸收的不适当钙消耗的激素水平的改变。一些治疗包括激素治疗法或为了延迟该过程的饮食补充。最近，抗吸收剂例如双磷酸盐和选择性雌激素受体修饰剂(SERMs)用于防止和治疗减少的骨量。因此，将那些治疗与能调节OPGL活性的分子结合在治疗某些骨质稀少疾病中是有用的。
技术实现思路
本专利技术的申请人经过大量的研究实验，构建了一种具有高亲和力的重组抗OPGL单克隆抗体，其比现有的抗OPGL抗体具有更高的亲和力，能够更加有效的识别OPGL抗原。具体地，本专利技术公开了：1.一种重组抗OPGL单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包括如SEQIDNO:7所示的重链可变区的第62、105位位点上的氨基酸被取代，和/或如SEQIDNO:8所示的轻链可变区的第92位位点上的氨基酸被取代。2.根据1所述的重组抗OPGL单克隆抗体，其特征在于，所述位点上的氨基酸是被谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、丝氨酸或苏氨酸取代。3.根据2所述的重组抗OPGL单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:11-16或SEQIDNO:19任一所示，和/或轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:17或SEQIDNO:18所示。4.根据3所述的重组抗OPGL单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:11-16或SEQIDNO:19任一所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:8；或所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:17或SEQIDNO:18所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；或所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:19所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示；或所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:19所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:17所示。5.根据4所述的重组抗OPGL单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:19所示，和轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:17所示。6.根据1-5任一所述的重组抗OPGL单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示。7.一种制剂，含有上述1-6任一所述的重组抗OPGL单克隆抗体和可药用的载体。8.根据1-6任一所述的重组抗OPGL单克隆抗体或7所述制剂在制备治疗骨质稀少疾病的药物中的用途。9.根据1-6任一所述的重组抗OPGL单克隆抗体或7所述制剂在制备治疗患者中的伴随骨损失的炎症状况的药物中的用途。10.根据1-6任一所述的重组抗OPGL单克隆抗体或7所述制剂在制备治疗患者中的伴随骨损失的自身免疫疾病的药物中的用途。更具体地，本专利技术的申请人首先根据中国专利CN02816680.9公开的抗OPGL单抗资料及序列，构建了抗OPGL抗体αOPGL-1的轻、重链可变区，然后通过表达、纯化，最终获得抗OPGL抗体αOPGL-1。根据图1所示的氨基酸突变位点，采用overlapPCR的方式对序列突变的方法对抗体进行构建，其构建、表达、纯化的方法与未突变的αOPGL-1相同。所述突变包括αOPGL-1重链可变区和/或轻链可变区的下述任何一个或多个氨基酸位点上的氨基酸取代，所述位点为重链可变区第62、105位，轻链可变区第92位氨基酸的位置，取代氨基酸为谷氨酸(E)、赖氨酸(K)、精氨酸(R)、丝氨酸(S)或苏氨酸(T)。对于本专利技术，任何合适的表达载体都可以使用，这些载体可以为pcDNA3.1(+)，pDR1，pDHFF等真核表达载体。本专利技术的申请人对上述αOPGL-1的突变抗体进行了亲和力检测。实验结果表明，申请人构建的αOPGL-1突变抗体的亲和力比现有的抗OPGL单抗有了很大的提高，其中重链可变区第62位苏氨酸或丝氨酸取代的突变抗体(H62DT或H62DS)，亲和力提高了2倍以上；重链可变区第105位精氨酸、丝氨酸或谷氨酸取代的突变抗体(H105IR、H105IS或H105IE)，亲和力提高4倍以上；针对上述重链可变区和轻链可变区的突变点进行两点或三点的组合突变，亲和力提高了10倍以上，其中H62DT、H105IR和L92YK三点突变，其亲和力提高13倍以上。本专利技术提供含有治疗有效量的αOPGL-1突变抗体和治疗有效量的至少一种另外的治疗剂，和药学可接受稀释剂，载体，增溶剂，乳化剂，防腐剂和/或佐剂的药物组合物。在一些实施方案中，所述至少一种另外的治疗剂选自：骨形态发生因子，转化生长因子-β(TGF-β)，白介素-1(IL-1)抑制剂，包括但不限于IL-1ra及其衍生物和KineretTM；TNFα抑制剂，包括但不限于可溶性TNFα受体，EnbrelTM，抗-TNFα抗体，Remicade本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组抗OPGL单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包括如SEQ ID NO:7所示的重链可变区的第62、105位位点上的氨基酸被取代，和/或如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区的第92位位点上的氨基酸被取代。

【技术特征摘要】
1.一种重组抗OPGL单克隆抗体，其特征在于，所述抗体包括如SEQIDNO:7所示的重链可变区的第62、105位位点上的氨基酸被取代，和/或如SEQIDNO:8所示的轻链可变区的第92位位点上的氨基酸被取代。2.根据权利要求1所述的重组抗OPGL单克隆抗体，其特征在于，所述位点上的氨基酸是被谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、丝氨酸或苏氨酸取代。3.根据权利要求2所述的重组抗OPGL单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:11-16或SEQIDNO:19任一所示，和/或轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:17或SEQIDNO:18所示。4.根据权利要求3所述的重组抗OPGL单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:11-16或SEQIDNO:19任一所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示；或所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:17或SEQIDNO:18所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；或所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:19所示，轻链可...

【专利技术属性】
技术研发人员：李彩辉，黎健荣，路玲玉，朱云霞，顾云凯，
申请(专利权)人：上海抗体药物国家工程研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31