抗CD70抗体药物结合物制造技术

本发明专利技术涉及包含至少一个非天然编码氨基酸的抗CD70抗体和抗体药物结合物。本文披露具有一或多个非天然编码氨基酸的αCD70抗体并且还披露抗体药物结合物，其中本发明专利技术的αCD70抗体结合到一或多种毒素。还披露使用所述非天然氨基酸抗体药物结合物的方法，包括治疗、诊断和其它生物技术用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD70抗体药物结合物
本专利技术涉及包含至少一个非天然编码氨基酸的抗CD70抗体和抗体药物结合物。本文披露具有一或多个非天然编码氨基酸的αCD70抗体并且披露还披露抗体药物结合物，其中本专利技术的αCD70抗体结合到一或多种毒素。还披露披露使用所述非天然氨基酸抗体药物结合物的方法，包括治疗、诊断和其它生物技术用途。
技术介绍
CD70是由多种正常和恶性细胞类型表达的细胞膜结合和分泌分子的肿瘤坏死因子(TNF)家族的成员。CD70的一级氨基酸(AA)序列预测跨膜II型蛋白质，其羧基末端暴露于细胞外部并且其氨基末端发现于质膜的胞质侧(鲍曼(Bowman)等人，1994，免疫学杂志(JImmunol)152:1756-61；古德温(Goodwin)等人，1993，细胞(Cell)73:447-56)。人类CD70由20AA细胞质域、18AA跨膜域以及具有两个潜在N连接糖基化位点的155AA胞质外域构成(鲍曼等人，前述；古德温等人，前述)。放射性同位素标记的表达CD70的细胞由抗CD70抗体造成的特异性免疫沉淀产生29和50kDa的多肽(古德温等人，前述；新镇(Hintzen)等人，1994，免疫学杂志152:1762-73)。基于其与TNF-α和TNF-β的同源性，尤其在结构链C、D、H以及I中，预测CD70具有三聚结构(佩奇(Petsch)等人，1995，分子免疫学(MolImmunol)32:761-72)。初始免疫组织学研究披露表明，CD70在扁桃体、皮肤以及肠中的生发中心B细胞和罕见T细胞上表达(新镇等人，1994，国际免疫学(IntImmunol)6:477-80)。随后，CD70据报导在最近经抗原活化的T和B淋巴细胞的细胞表面上表达，并且其表达在去除抗原刺激之后衰退(伦斯(Lens)等人，1996，欧洲免疫学杂志(EurJImmunol)26:2964-71；伦斯等人，1997，免疫学(Immunology)90:38-45)。在淋巴系统内，自然杀伤细胞(奥雷甘(Orengo)等人，1997，临床与实验免疫学(ClinExpImmunol)107:608-13)和鼠成熟外周树突状细胞(秋叶(Akiba)等人，2000，实验医学杂志(JExpMed)191:375-80)也表达CD70。在非淋巴谱系中，已经在胸腺髓上皮细胞上检测到CD70(新镇等人，1994，前述；飞岛(Hishima)等人，2000，美国外科病理学杂志(AmJSurgPathol)24:742-46)。除在正常细胞上的表达以外，已在包括淋巴瘤、癌瘤和神经起源的肿瘤的不同类型的癌症中报导CD70表达。在恶性B细胞中，已报导71％的弥漫性大B细胞淋巴瘤、33％的滤泡中心淋巴瘤、25％的套细胞淋巴瘤和50％的B-CLL表达CD70(伦斯(Lens)等人，1999，英国血液学杂志(BrJHaematol)106:491-503)。CD70连同其它淋巴活化标记物频繁表达于霍奇金氏病(Hodgkin'sdisease)的恶性霍奇金和里德-斯腾伯格细胞(Reed-Sternbergcell)上(格鲁斯(Gruss)和卡丁(Kadin)，1996，百立乐临床血液学(BailieresClinHaematol)9:417-46)。一个报导表明在88％(8例中的7例)的胸腺癌和20％(5例中的1例)的非典型胸腺瘤上的CD70表达(肥岛(Hishima)等人，2000，前述)。已检测到CD70的第二类型的癌为鼻咽癌。一个研究报导在80％(20例中的16例)的从未分化鼻咽癌获得的快速冷冻肿瘤活检体上存在CD70(阿加桑耶卢(Agathanggelou)等人，1995，美国病理学杂志(AmJPath)147:1152-60)。也已在脑肿瘤细胞，尤其是神经胶瘤细胞系、固体人类神经胶质瘤和脊膜瘤上检测到CD70(赫德-法因特(Held-Feindt)和门特雷(Mentlein)，2002，国际癌症杂志(IntJCancer)98:352-56；威斯克吕森(Wischlusen)等人，2002，癌症研究(CanRes)62:2592-99)。已提出转化包括埃-巴二氏病毒(Epstein-Barrvirus)(EBV)和人类T白血病病毒-1(HTLV-1)的病毒可以在通常不表达CD70的细胞(如上皮细胞)上诱发CD70(阿加桑耶卢等人，前述；施泰因(Stein)等人，1989，牛津大学出版社，第446页)。因此，在恶性B细胞上的CD70表达可以是致癌转化的反映(伦斯等人，1999，前述)。另外，由于在抗原相遇之后在B细胞上诱发CD70表达(毛瑞尔(Maurer)等人，1990，欧洲免疫学杂志(EurJImmunol)20:2679-84；伦斯等人，1996，前述)，CD70的稳定表达可以反映长期的抗原刺激。基于进行中的体细胞超突变，已假设此出现于滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(follicularnon-Hodgkin'slymphomas)中(巴勒(Bahler)等人，1992，美国国家科学院院刊(ProcNatlAcadSciUSA)89:6770-74；巴勒等人，1992，癌症研究52:增刊5547S-51S)。CD70的受体为CD27，约55kDa的糖基化I型跨膜蛋白(古德温等人，1993，细胞(Cell)73:447-56；新镇等人，1994，前述)。CD70有时被称为CD27L。以细胞表面上的同型二聚体形式存在的CD27(格拉文施泰因(Gravestein)等人，1993，欧洲免疫学杂志23:943-50)为如通过细胞外域中的约40个氨基酸的富含半胱氨酸的重复序列定义的TNF受体总科的成员(史密斯(Smith)等人，1990，科学(Science)248:1019-23；洛克斯利(Locksley)等人，2001，细胞104:487-501)。CD27通常通过胸腺细胞、NK、T和B细胞来表达(新镇等人，1994，今日免疫学(ImmunolToday)15:307-11；伦斯等人，1998，免疫学研讨文辑(SeminImmunol)10:491-99)。在静止性T细胞上，CD27构成性地表达，但抗原触发进一步上调CD27表达(德容(deJong)等人，1991，免疫学杂志146:2488-94；新镇等人，1993，免疫学杂志151:2426-35)。另外，仅通过其T细胞抗原受体复合物或与辅助分子CD28组合触发T细胞从活化T细胞释放可溶CD27(新镇等人，1991，免疫学杂志147:29-35)。未处理B细胞并不表达CD27，但在B细胞的抗原触发之后诱发其表达，且相比于CD70仍持续(雅克S(JacquotS)等人，1997免疫学杂志159:2652-57；小畑T(KobataT)等人，1995，美国国家科学院院刊92:11249-53)。与CD27和CD70在正常B系细胞中受限的表达形成显著对比，CD27和CD70二者在许多B细胞非霍奇金氏淋巴瘤和白血病中频繁地共表达。这可能潜在地导致呈自分泌环形式的这些细胞上的功能性CD27-CD70相互作用，导致CD27信号传导本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种化合物，其包含式(VIII)或(IX)：其中：A是任选的，且当存在时为低碳亚烷基、经取代低碳亚烷基、低碳亚环烷基、经取代低碳亚环烷基、低碳亚烯基、经取代低碳亚烯基、亚炔基、低碳亚杂烷基、经取代亚杂烷基、低碳亚杂环烷基、经取代低碳亚杂环烷基、亚芳基、经取代亚芳基、亚杂芳基、经取代亚杂芳基、亚烷芳基、经取代亚烷芳基、亚芳烷基或经取代亚芳烷基；B为任选的，且当存在时为选自由以下组成的群组的连接子：低碳亚烷基、经取代低碳亚烷基、低碳亚烯基、经取代低碳亚烯基、低碳杂亚烷基、经取代低碳杂亚烷基、‑O‑、‑O‑(亚烷基或经取代亚烷基)‑、‑S‑、‑S‑(亚烷基或经取代亚烷基)‑、‑S(O)k‑(其中k为1、2或3)、‑S(O)k(亚烷基或经取代亚烷基)‑、‑C(O)‑、‑C(O)‑(亚烷基或经取代亚烷基)‑、‑C(S)‑、‑C(S)‑(亚烷基或经取代亚烷基)‑、‑N(R′)‑、‑NR′‑(亚烷基或经取代亚烷基)‑、‑C(O)N(R′)‑、‑CON(R′)‑(亚烷基或经取代亚烷基)‑、‑CSN(R′)‑、‑CSN(R′)‑(亚烷基或经取代亚烷基)‑、‑N(R′)CO‑(亚烷基或经取代亚烷基)‑、‑N(R′)C(O)O‑、‑S(O)kN(R′)‑、‑N(R′)C(O)N(R′)‑、‑N(R′)C(S)N(R′)‑、‑N(R′)S(O)kN(R′)‑、‑N(R′)‑N＝、‑C(R′)＝N‑、‑C(R′)＝N‑N(R′)‑、‑C(R′)＝N‑N＝、‑C(R′)2‑N＝N‑以及‑C(R′)2‑N(R′)‑N(R′)‑，其中每个R′独立地为H、烷基或经取代烷基；R为H、烷基、经取代烷基、环烷基或经取代环烷基；R1为H、氨基保护基、树脂、至少一个氨基酸、多肽或多核苷酸；R2为OH、酯保护基、树脂、至少一个氨基酸、多肽或多核苷酸；R3和R4各自独立地为H、卤素、低碳烷基或经取代低碳烷基，或R3与R4或两个R3基团任选地形成环烷基或杂环烷基；Z具有以下结构：R5为H、COR8、C1‑C6烷基或噻唑；R8为OH；R6为OH或H；Ar为苯基或吡啶；R7为C1‑C6烷基或氢；L为选自由以下组成的群组的连接子：‑亚烷基‑、‑亚烷基‑C(O)‑、‑(亚烷基‑O)n‑亚烷基‑、‑(亚烷基‑O)n‑亚烷基‑C(O)‑、‑(亚烷基‑O)n‑(CH2)n′‑NHC(O)‑(CH2)n″‑C(Me)2‑S‑S‑(CH2)n″′‑NHC(O)‑(亚烷基‑O)n″″‑亚烷基‑、‑(亚烷基‑O)n‑亚烷基‑W‑、‑亚烷基‑C(O)‑W‑、‑(亚烷基‑O)n‑亚烷基‑U‑亚烷基‑C(O)‑和‑(亚烷基‑O)n‑亚烷基‑U‑亚烷基‑；W具有以下结构：U具有以下结构：每个n、n′、n″、n″′和n″″独立地为大于或等于1的整数；或其活性代谢物或药学上可接受的前药或溶剂合物。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.06.19 US 61/661,7821.一种化合物，其包含式(VIII)或(IX)，其中所述化合物为与抗CD70抗体结合的海兔毒素；所述抗CD70抗体包括一非天然编码氨基酸，且所述海兔毒素是经由所述非天然编码氨基酸而与所述抗CD70抗体结合；所述式(VIII)或(IX)为：



其中：
A是任选的，且当存在时为低碳亚烷基、经取代低碳亚烷基、低碳亚环烷基、经取代低碳亚环烷基、低碳亚烯基、经取代低碳亚烯基、亚炔基、低碳亚杂烷基、经取代亚杂烷基、低碳亚杂环烷基、经取代低碳亚杂环烷基、亚芳基、经取代亚芳基、亚杂芳基、经取代亚杂芳基、亚烷芳基、经取代亚烷芳基、亚芳烷基或经取代亚芳烷基；
B为任选的，且当存在时为选自由以下组成的群组的连接子：低碳亚烷基、经取代低碳亚烷基、低碳亚烯基、经取代低碳亚烯基、低碳杂亚烷基、经取代低碳杂亚烷基、-O-、-O-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-S-、-S-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-S(O)k-(其中k为1、2或3)、-S(O)k(亚烷基或经取代亚烷基)-、-C(O)-、-C(O)-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-C(S)-、-C(S)-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-N(R')-、-NR'-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-C(O)N(R')-、-CON(R')-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-CSN(R')-、-CSN(R')-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-N(R')CO-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-N(R')C(O)O-、-S(O)kN(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(S)N(R')-、-N(R')S(O)kN(R')-、-N(R')-N＝、-C(R')＝N-、-C(R')＝N-N(R')-、-C(R')＝N-N＝、-C(R')2-N＝N-以及-C(R')2-N(R')-N(R')-，其中每个R'独立地为H、烷基或经取代烷基；
R为H、烷基、经取代烷基、环烷基或经取代环烷基；
R1为H、氨基保护基、树脂、至少一个氨基酸、多肽或多核苷酸；
R2为OH、酯保护基、树脂、至少一个氨基酸、多肽或多核苷酸；
R1和R2中至少一者为抗CD70抗体；
R3和R4各自独立地为H、卤素、低碳烷基或经取代低碳烷基，或R3与R4或两个R3基团任选地形成环烷基或杂环烷基；
Z具有以下结构：



R5为H、COR8、C1-C6烷基或噻唑；
R8为OH；
R6为OH或H；
Ar为苯基或吡啶；
R7为C1-C6烷基或氢；
L为选自由以下组成的群组的连接子：-亚烷基-、-亚烷基-C(O)-、-(亚烷基-O)n-亚烷基-、-(亚烷基-O)n-亚烷基-C(O)-、-(亚烷基-O)n-(CH2)n'-NHC(O)-(CH2)n”-C(Me)2-S-S-(CH2)n”'-NHC(O)-(亚烷基-O)n””-亚烷基-、-(亚烷基-O)n-亚烷基-W-、-亚烷基-C(O)-W-、-(亚烷基-O)n-亚烷基-U-亚烷基-C(O)-和-(亚烷基-O)n-亚烷基-U-亚烷基-；
W具有以下结构：



U具有以下结构：

和
每个n、n'、n”、n”'和n””独立地为大于或等于1的整数；
前述低碳是指八个或以下的碳原子；
前述经取代是以独立选自于下列取代基中的一或多者进行取代：卤基；C1-C10烷基；C2-C10烯基；C2-C10炔基；C1-C10烷氧基；C5-C12芳烷基；C3-C12环烷基；C4-C12环烯基；苯基；经取代苯基；甲苯甲酰基；二甲苯基；联苯基；C2-C12烷氧基烷基；C5-C12烷氧基芳基；C5-C12芳氧基烷基；C7-C12氧基芳基；C1-C6烷基亚磺酰基；C1-C10烷基磺酰基；-(CH2)m-O-(C1-C10烷基)，其中m为1到8；芳基；经取代芳基；氟-(C1-C10烷基)；硝基烷基；-NO2；-CN；-NR”C(O)-(C1-C10烷基)；-C(O)-(C1-C10烷基)；C2-C10烧硫基烷基；-C(O)C-(C1-C10烷基)；-OH；-SO2；＝S；-COOH；-NR”2；羰基；-C(O)-(C1-C10烷基)-CF3；-C(O)-CF3；-C(O)NR”2；-(C1-C10芳基)-S-(C6-C10芳基)；-C(O)-(C6-C10芳基)；-(CH2)m-O-(CH2)m-O-(C1-C10烷基)，其中每个m为1到8；-C(O)NR”2；-C(S)NR”2；-SO2NR”2；-NR”C(O)NR”2；-NR”C(S)NR”2；前述每个R”基团为H、C1-C10烷基或经取代C1-C10烷基、芳基或经取代芳基或C1-C10芳烷基；
前述芳基含有5到20个环原子；
前述经取代芳基是指经下列一或多者所取代的芳基：-OR、＝O、＝NR”’、＝N-OR”’、-NR”’2、-SR”’、-卤素、-SiR”’3、-OC(O)R”’、-C(O)R”’、-CO2R”’、-CONR”’2、-OC(O)NR”’2、-NR”’C(O)R”’、-NR”’C(O)NR”’2、-NR”’(O)2R”’、-NR”’-C(NR”’2)＝NR”’、-S(O)R”’、-S(O)2R”’、-S(O)2NR”’2、-NR”’SO2R”’、-CN、-NO2、-R”’、-N3、-CH(Ph)2、氟(C1-C4)烷氧基以及氟(C1-C4)烷基，其中前述每个R”’基团为氢、经取代或未经取代杂烷基、芳基或经1至3卤素取代的芳基。


2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述抗CD70抗体包含一或多个非天然编码氨基酸。


3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述抗CD70抗体包含至少一个且不超过十个非天然编码氨基酸。


4.一种化合物，或其盐，其包含式(X)、(XI)、(XII)或(XIII)，其中所述化合物为与抗CD70抗体结合的海兔毒素；所述抗CD70抗体包括一非天然编码氨基酸，且所述海兔毒素是经由所述非天然编码氨基酸而与所述抗CD70抗体结合；所述式(X)、(XI)、(XII)或(XIII)为：






其中：
A为任选的，且当存在时为低碳亚烷基、经取代低碳亚烷基、低碳亚环烷基、经取代低碳亚环烷基、低碳亚烯基、经取代低碳亚烯基、亚炔基、低碳亚杂烷基、经取代亚杂烷基、低碳亚杂环烷基、经取代低碳亚杂环烷基、亚芳基、经取代亚芳基、亚杂芳基、经取代亚杂芳基、亚烷芳基、经取代亚烷芳基、亚芳烷基或经取代亚芳烷基；
B为任选的，且当存在时为选自由以下组成的群组的连接子：低碳亚烷基、经取代低碳亚烷基、低碳亚烯基、经取代低碳亚烯基、低碳杂亚烷基、经取代低碳杂亚烷基、-O-、-O-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-S-、-S-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-S(O)k-(其中k为1、2或3)、-S(O)k(亚烷基或经取代亚烷基)-、-C(O)-、-C(O)-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-C(S)-、-C(S)-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-N(R')-、-NR'-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-C(O)N(R')-、-CON(R')-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-CSN(R')-、-CSN(R')-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-N(R')CO-(亚烷基或经取代亚烷基)-、-N(R')C(O)O-、-S(O)kN(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(S)N(R')-、-N(R')S(O)kN(R')-、-N(R')-N＝、-C(R')＝N-、-C(R')＝N-N(R')-、-C(R')＝N-N＝、-C(R')2-N＝N-以及-C(R')2-N(R')-N(R')-，其中每个R'独立地为H、烷基或经取代烷基；
R为H、烷基、经取代烷基、环烷基或经取代环烷基；
R1为H、氨基保护基、树脂、至少一个氨基酸、多肽或多核苷酸；
R2为OH、酯保护基、树脂、至少一个氨基酸、多肽或多核苷酸；
R1和R2中至少一者为抗CD70抗体；
R3和R4各自独立地为H、卤素、低碳烷基或经取代低碳烷基，或R3与R4或两个R3基团任选地形成环烷基或杂环烷基；
Z具有以下结构：



R5为H、CO2H、C1-C6烷基或噻唑；
R6为OH或H；
Ar为苯基或吡啶；
R7为C1-C6烷基或氢；
L1、L2、L3和L4各自为独立地选自由以下组成的群组的连接子：一键、-亚烷基-、-(亚烷基-O)n-亚烷基-J-、-亚烷基'-J-(亚烷基-O)n-亚烷基-、-J-(亚烷基-O)n-亚烷基-、-(亚烷基-O)n-亚烷基-J-(亚烷基-O)n'-亚烷基-J'-、-(亚烷基-O)n-亚烷基-J-亚烷基'-、-W-、-亚烷基-W-、亚烷基'-J-(亚烷基-NMe)n-亚烷基-W-、-J-(亚烷基-NMe)n-亚烷基-W-、-J-亚烷基-NMe-亚烷基'-NMe-亚烷基”-W-和-亚烷基-J-亚烷基'-NMe-亚烷基”-NMe-亚烷基”'-W-；
W具有以下结构：



每个J和J'独立地具有以下结构：

和
每个n和n'独立地为大于或等于1的整数；
低碳是指八个或以下的碳原子；
前述经取代是以独立选自于下列取代基中的一或多者进行取代：卤基；C1-C10烷基；C2-C10烯基；C2-C10炔基；C1-C10烷氧基；C5-C12芳烷基；C3-C12环烷基；C4-C12环烯基；苯基；经取代苯基；甲苯甲酰基；二甲苯基；联苯基；C2-C12烷氧基烷基；C5-C12烷氧基芳基；C5-C12芳氧基烷基；C7-C12氧基芳基；C1-C6烷基亚磺酰基；C1-C10烷基磺酰基；-(CH2)m-O-(C1-C10烷基)，其中m为1到8；芳基；经取代芳基；氟-(C1-C10烷基)；硝基烷基；-NO2；-CN；-NR”C(O)-(C1-C10烷基)；-C(O)-(C1-C10烷基)；C2-C10烧硫基烷基；-C(O)C-(C1-C10烷基)；-OH；-SO2；＝S；-COOH；-NR”2；羰基；-C(O)-(C1-C10烷基)-CF3；-C(O)-CF3；-C(O)NR”2；-(C1-C10芳基)-S-(C6-C10芳基)；-C(O)-(C6-C10芳基)；-(CH2)m-O-(CH2)m-O-(C1-C10烷基)，其中每个m为1到8；-C(O)NR”2；-C(S)NR”2；-SO2NR”2；-NR”C(O)NR”2；-NR”C(S)NR”2；前述每个R”基团为H、C1-C10烷基或经取代C1-C10烷基、芳基或经取代芳基或C1-C10芳烷基；
前述芳基含有5到20个环原子；
前述经取代芳基是指经下列一或多者所取代的芳基：-OR、＝O、＝NR”’、＝N-OR”’、-NR”’2、-SR”’、-卤素、-SiR”’3、-OC(O)R”’、-C(O)R”’、-CO2R”’、-CONR”’2、-OC(O)NR”’2、-NR”’C(O)R”’、-NR”’C(O)NR”’2、-NR”’(O)2R”’、-NR”’-C(NR”’2)＝NR”’、-S(O)R”’、-S(O)2R”’、-S(O)2NR”’2、-NR”’SO2R”’、-CN、-NO2、-R”’、-N3、-CH(Ph)2、氟(C1-C4)烷氧基以及氟(C1-C4)烷基，其中前述每个R”’基团为氢、经取代或未经取代杂烷基、芳基或经1至3卤素取代的芳基。


5.根据权利要求1或4所述的化合物，其中所述抗CD70抗体包含序列SEQIDNO：1至18中的至少一者。


6.根据权利要求5所述的化合物，其中所述抗CD70抗体包含序列SEQIDNO：1至18...

【专利技术属性】
技术研发人员：理查·S·巴奈特，尼克·克鲁德森，孙英，珊卓·比洛克，提莫西·布斯，措特涅·亚瓦希什维利，达米安·布列松，纱伊拉加·旭瑞贾许，雅玛·希威特，杰森·K·平克斯塔夫，
申请(专利权)人：AMBRX公司，
类型：发明
国别省市：美国;US