本发明专利技术提供一种抗人RANKL人源化抗体及其药物组合物和用途，人源化抗体的重链可变区选自SEQ ID NO:6、23、25、27或29所示的氨基酸序列，轻链可变区选自SEQ ID NO:14、31、33、35、37或39所示的氨基酸序列，优选地，重链可变区选自SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列，轻链可变区选自SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列。该抗体可用于制备治疗骨损失疾病的药物。
【技术实现步骤摘要】
一种抗人RANKL人源化抗体及其药物组合物和用途本申请要求2014年12月28日提交的PCT/CN2014/095236的优先权。
技术介绍
人体骨骼是动态的不断变化的组织，破骨细胞吸收骨质后，成骨细胞形成骨质，完成一个正常的骨重塑循环。成年人骨重塑率在每年2-10％。正常情况下骨吸收与骨形成(骨代谢)保持动态平衡，破骨细胞与成骨细胞之间的平衡打破后会造成骨质过多(骨质硬化)或骨质过少(骨质疏松)。破骨细胞的分化信号是由成骨/间充质干细胞传递的。各种刺激骨吸收的因子将诱导破骨细胞形成的信号传递给成骨/间充质干细胞，诱导其膜上表达破骨细胞分化因子-1(Osteoclastdifferentiationfactor,ODF-1)，又称细胞核因子-κB受体活化因子配基(ReceptoractivatorofnuclearfactorκBligand,RANKL)。RANKL可与破骨前体细胞膜上的破骨细胞分化和活化受体(Osteoclastdifferentiationandactivationreceptor,ODAR),又称细胞核因子-κB受体活化因子(ReceptoractivatorofnuclearfactorκB,RANK)直接结合，将信号传入破骨前体细胞，引起级联反应，刺激破骨细胞形成、分化和成熟。在骨代谢过程中，OPG/RANKL/RANK系统是发挥重要调节作用的关键信号通路，已有文献报道发现一些全身性代谢疾病如骨质疏松、类风湿性疾病、肿瘤以及骨折愈合等疾病都存在骨改建活性的增强,与RANK/RANKL/OPG系统有密切关系。许多疾病通过增加破骨细胞的数量和(或)增强破骨细胞的活性而引起骨量减少，如绝经后和老年性骨质疏松症、恶性肿瘤并发体液性高钙血症、肿瘤转移、Paget‘s骨病、类风湿性关节炎、甲状旁腺功能亢进、假体周边骨自溶症等。绝经后雌激素水平下降，IL21、IL26、TNF-α的基因表达增加，促进破骨细胞的增殖、分化、融合，抑制其凋亡，使骨吸收增加，骨代谢偶联失衡，从而导致了骨质疏松。骨质疏松疾病的治疗主要从两方面着手：(一)促进成骨细胞的骨形成作用；(二)抑制破骨细胞的骨吸收作用。阻断RANKL/RANK信号传递能抑制破骨细胞形成和活性，阻断骨吸收，从而治疗骨质疏松症，已证实是一条可行的途径。美国Amgen公司出品的Prolia为通过免疫人IgG转基因小鼠Xeno鼠源获得的全人源抗人RANKL(人源RANKL，或hRANKL)单抗隆抗体，能阻断RANKL/RANK信号传递，有效抑制破骨细胞形成和活性，阻断骨吸收和骨质破坏。2010年被USFDA批准治疗妇女绝经后骨质疏松。欧洲还批准了用于前列腺癌相关的骨丢失。Prolia抗体的临床有效性使得RANKL作为单克隆抗体药物治疗一系列由于破骨细胞活动增强导致的骨丢失的骨代谢疾病的靶点得到最终验证。单克隆抗体类药物具有特异性强，副作用小，疗效显著等优点，已经成为对抗肿瘤，传染病，自身免疫病等病患的重要工具。目前细胞融合与杂交瘤技术，仍然是最为可靠的制备单克隆抗体的方法，常用来免疫的动物有小鼠，大鼠，羊，兔子及其他动物，其中最常用的是鼠类包括大鼠与小鼠。利用该方法得到的单克隆抗体是动物源的，开发动物源单克隆抗体成为抗体类药物应用于人体，必须要进行人源化改造，以减少异源抗体所引起的人抗动物抗体反应(人源Anti-AnimalAntibodies,HAAA)，同时也可以更加有效的激活人体免疫系统，降低抗体类药物的清除速度，并延长半衰期。抗体互补决定区(ComplementaryDeterminingRegions,CDRs)是在抗体框架区(FrameworkRegions,FRs)的支持下与抗原分子上的表位氨基酸相互作用的区域。CDR区与抗原表位精密的分子对接是抗体亲和力与特异性的分子基础，而天然的亲本抗体的CDRs区构象代表了最高的亲和力与最好的抗原结合特异性。理论上FRs区氨基酸的改变，会引起CDRs区构象上发生变化使亲和力下降。有研究证明，在FRs区的所有氨基酸中，大多数的氨基酸的人源化替换对CDRs区构象只产生轻微的影响，不会对抗体亲和力产生严重影响，但也存在着少数几个关键氨基酸，一旦这些关键氨基酸被替换成人的相应氨基酸后，会引起CDRs区构象上很大的改变，进而引起抗体亲和力的严重下降。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供抗人RANKL抗体、其人源化抗体以及它们的药物组合物，用途。第一方面，本专利技术提供抗人RANKL抗体，其可特异性结合如SEQIDNO:1所述的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗人RANKL抗体，包括重链和轻链，其中:a)重链包括SEQIDNO:2-9的氨基酸序列中之一所示的可变区；并且b)轻链包括SEQIDNO:10-17的氨基酸序列中之一所示的可变区；并且所述抗体与RANKL结合，阻断RANK与RANKL相互作用。在一些实施方案中，所述抗人RANKL抗体为单链抗体或人源化抗体，或通过杂交瘤技术获得的鼠源单克隆抗体。本专利技术还涉及编码抗人RANKL抗体分子的核酸以及含有所述核酸的宿主细胞。本专利技术还涉及制备或生成本文所述抗人RANKL抗体分子、核酸、宿主细胞、产物及组合物的方法。第二方面，本专利技术提供抗人RANKL抗体的人源化抗体，所述人源化抗体可特异性地与人RANKL结合，并且所述人源化抗体的重链可变区选自SEQIDNO:6、23、25、27或29所示的氨基酸序列，轻链可变区选自SEQIDNO:14、31、33、35、37或39所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗人RANKL人源化抗体的重链可变区选自SEQIDNO:29所示的氨基酸序列，轻链可变区选自SEQIDNO:31、33、35、37或39所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗人RANKL人源化抗体的重链可变区选自SEQIDNO:23、25、27或29所示的氨基酸序列，所述轻链可变区选自SEQIDNO:31所示的氨基酸序列。在一个优选实施方案中，抗人RANKL人源化抗体的重链可变区选自SEQIDNO:29所示的氨基酸序列，轻链可变区选自SEQIDNO:31所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述人源化抗体的重链恒定区来自人IgG2，轻链恒定区来自人Kappa；或所述人源化抗体的重链恒定区选自SEQIDNO:41所示的氨基酸序列，轻链恒定区选自SEQIDNO:43所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述人源化抗体为选自scFv、(scFv)2、Fab、Fab’或F(ab’)2的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述人源化抗体的完整重链选自SEQIDNO:46-50中之一所示的氨基酸序列，和/或完整轻链选自SEQIDNO:51-56中之一所示的氨基酸序列。第三方面，本专利技术提供一种药物组合物，其活性成分为所述抗人RANKL抗体或所述人源化抗体。第四方面，本专利技术提供所述抗人RANKL抗体或所述人源化抗体在制备治疗骨损失疾病药物中用途。第五方面，本专利技术提一种改善患有骨损失疾病的患者的状况或治疗患有骨损失疾病的患者的方法，所述方法包括给所述予患者治疗有效量的所述抗人RANKL抗体或所述人源化抗体或给予所述患者所述药物组合物。自然人RANKL蛋白在体内存在三种形式，全长的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗人RANKL人源化抗体，其中所述人源化抗体可特异性地与人RANKL结合，并且所述人源化抗体的重链可变区选自SEQ ID NO:6、23、25、27或29所示的氨基酸序列，轻链可变区选自SEQ ID NO:14、31、33、35、37或39所示的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
2014.12.28 CN PCT/CN2014/0952361.一种抗人RANKL人源化抗体，其中所述人源化抗体可特异性地与人RANKL结合，并且所述人源化抗体的重链可变区选自SEQIDNO:29所示的氨基酸序列，轻链可变区选自SEQIDNO:31所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗人RANKL人源化抗体，其中所述人源化抗体为选自scFv、(scFv)2、Fab、Fab’或F(ab’)2的抗原结合片段。3.根据权利要求1所述的抗人RANKL人源化抗体，其中所述重链恒定区来自人IgG2，所述轻链恒定区来自人Kappa；或所述人源化抗体的重链恒定区选自SEQID...
【专利技术属性】
技术研发人员：周清，李玲云，
申请(专利权)人：嘉和生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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