本发明专利技术涉及新颖乙型肝炎病毒(HBV)和/或丁型肝炎病毒(HDV)受体及其用于开发易受HBV和/或HDV感染且可用于免疫学研究和/或用于筛选药物、进入后限制因子和宿主依赖因子的细胞、细胞系和非人动物的用途。其进一步涉及所述受体用于鉴定可用于治疗HBV和/或HDV感染的化合物的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】HBV和/或HDV易感细胞、细胞系和非人动物的开发 本专利技术涉及新颖乙型肝炎病毒（HBV)和/或丁型肝炎病毒（HDV)受体及其用于开 发易受HBV和/或HDV感染且可用于免疫学研宄和/或用于筛选药物、进入后限制因子和 宿主依赖因子的细胞、细胞系和非人动物的用途。其进一步涉及所述受体用于鉴定可用于 治疗HBV和/或HDV感染的化合物的用途。 人乙型肝炎病毒（HBV)引起急性和慢性肝脏感染。3. 5亿人持续感染（Cornberg 等人，fesiroefliero/ iT/eio/ 2010，56 (4)，451-465)。慢性乙型肝炎仍将是一 个主要的全球健康问题，尽管有疫苗可用。治疗（IFNa和五种核苷类似物）是有限的，且 主要是非治愈性的。 HBV是嗜肝DNA病毒科的成员。嗜肝DNA病毒是最小的包膜DNA病毒，其经由pgRNA 中间体的逆转录复制。在装配过程中，核衣壳获取称为大（L)、中（M)和小（S)的三种病毒 包膜蛋白。它们被编码在一个开放阅读框中，并且共享对于膜锚定所需的S结构域。除了 S-结构域以外，M含有55个氨基酸的N端亲水性延伸（preS2)，而L进一步延伸107、117 或118个氨基酸（基因型依赖性），被称为preSl (Urban, /7Witfre KiroJr. 2008，3(3)， 253-264)。丁型肝炎病毒（HDV)是利用HBV包膜蛋白用于进入肝细胞的卫星拟病毒。已知 L的肉豆蔻酰化的preSl-结构域在HBV和HDV感染性中发挥关键作用。 嗜肝DNA病毒显示显著的物种特异性。小鼠和大鼠对于HBV是抗感染的事实 已归因于缺乏一种或多种进入因子或存在进入后限制因子（post-entry restriction factor)。由于将质粒编码的HBV-基因组递送至非易感物种的肝细胞促进病毒体分泌，所 以假设宿主约束条件与早期感染事件相关。HBV的另一个特点是在体内选择性感染肝细胞 的效力。物种特异性和非凡的肝脏向性与HBV感染的早期步骤（例如，特异性受体识别） 相关的假说是有吸引力的。 目前，只有原代人（PHH)、原代缅甸树_ (tupeia belangeri) (PTH)肝细胞和分化 的H印aRG细胞支持完整的HBV复制周期。后者是DMSO处理后能够分化成PHH样细胞的肝 祖细胞系。原代小鼠（PMH)和原代大鼠肝细胞（PRH)对于HBV是抗感染的。因此，小鼠和 大鼠既不支持从头HBV感染，也不支持病毒传播。（具有免疫能力的）小动物模型的缺乏 是HBV研宄的一个主要障碍，所述HBV研宄要求阐明潜在的分子限制因子。其导致开发替 代系统，如具有超长（over-length) HBV基因组的整合物的HBV转基因小鼠，或免疫缺陷的 PHH移植的uPA/Scid小鼠。 本专利技术人先前已经鉴定了 HBV L-蛋白衍生的脂肽，其阻断HBV和HDV感染PHH 和 H印aRG 细胞（Gripon 等人，/Kiro/ 2005，79(3)，1613-1622; Schulze 等人，/ Kiro/ 2010，84(4)，1989-2000; TO 2009/092611 Al)。它们代表了 HBV 的 preSl-结构 域的N-端47个氨基酸（HBVpreS/2-48_)，并且包括天然存在的肉豆蔻酸修饰。由于细胞 与^3\^^3/2-48_预孵育阻断感染，因此它们据推测针对受体（address a receptor)，然 而，所述受体是迄今未知的。 因此，本专利技术的一个目标是鉴定负责这些HBV L-蛋白衍生脂肽的结合的受体。 本专利技术的一个进一步目标是开发通过表达所述受体易受HBV和/或HDV感染的细 胞和细胞系。 本专利技术的又一个进一步目标是提供易受HBV和/或HDV感染的非人转基因动物。 此类转基因细胞、细胞系和动物然后可用于免疫学研宄和/或用于筛选药物、进 入后限制因子和宿主依赖因子（host dependency factor)。此外，新鉴定的受体可用于鉴 定可用于治疗HBV和/或HDV感染的进一步化合物。 本专利技术的目标通过乙型肝炎病毒（HBV)或丁型肝炎病毒（HDV)受体解决，所述乙 型肝炎病毒（HBV)或丁型肝炎病毒（HDV)受体具有 (a) SEQ ID NO: 1代表的氨基酸序列，或 (b) 包含以下的氨基酸序列， SEQ ID NO:2或与SEQ ID NO:2至少90%、优选至少91%、更优选至少92%相同的氨 基酸序列，和 具有通式Pro-Tyr-X-Gly-Ile 的氨基酸序列，其中X选自Lys、Arg和 Val0 本专利技术的目标还通过乙型肝炎病毒（HBV)或丁型肝炎病毒（HDV)受体解决，所述 乙型肝炎病毒（HBV)或丁型肝炎病毒（HDV)受体具有 (a) SEQ ID NO: 1代表的氨基酸序列，或 (b) 包含以下的氨基酸序列， SEQ ID NO:2或与SEQ ID NO:2至少90%、优选至少91%、更优选至少92%相同的氨 基酸序列，和 在对应于SEQ ID NO: 1的氨基酸158的位置具有Gly或在对应于SEQ ID NO: 1的氨基 酸158和159的位置具有序列Gly-IIe。 SEQ ID N0:1是人牛磺胆酸钠协同转运多肽NTCP/SLC10A1。 在本专利技术的优选实施方案中，"SEQ ID NO: 1代表的氨基酸序列"是指与SEQ ID NO :1至少90%、优选至少91%、更优选至少92%、更优选至少95%或99%相同或与SEQ ID NO: 1相同的氨基酸序列。 所述氨基酸序列（b)优选包含两个区域或结构域： (1) 包含人NTCP的氨基酸265至291 (或具有至少90、91或92%同一性的序列）的区 域或结构域 QL：：HT i LNvAfr VIG?Lr'f r'rLLYH , 其中X选自K、R和V。 在一个实施方案中，所述氨基酸序列（b)的区域或结构域（2)包含（至少） -Gly，其在对应于SEQ ID NO: 1的氨基酸158的位置， 诸如在具有通式PYXGI 的氨基酸序列中； 或 -包含或具有在对应于SEQ ID NO: 1的氨基酸158和159的位置的序列Gly-Ile， 诸如在具有通式PYXGI 的氨基酸序列中。 在一个实施方案中，所述氨基酸序列（b)不包含多于450个氨基酸，优选不多于 400个氨基酸。 在一个实施方案中，所述氨基酸序列（b)进一步包含氨基酸序列 Gly-Mei-Ilc-IIe-Ilc-l.w-Lcu [SIiQ II) NO: 1。 在该实施方案中，所述氨基酸序列（b)包含三个区域或结构域： (1) 包含人NTCP的氨基酸265至291 (或具有至少90、91或92%同一性的序列）的区 域或结构域 Cl'心 S T 了 I ,N YA F P P F'V 1： G F: L FFF PI ,I { SEQ JD NO； 2]； (2) 包含具有以下通式的氨基酸序列的区域或结构域 PrXGl fSEQiDNO: 11], 其中X选自K、R和V。 (3)包含以下氨基酸序列的区域或结构域 G^TIILL 。 本专利技术的目标还通过如上定义的具有选自SEQ ID NO: 1和SEQ ID N0:3至8本文档来自技高网...
【技术保护点】
乙型肝炎病毒(HBV)或丁型肝炎病毒(HDV)受体，其具有(a) SEQ ID NO:1代表的氨基酸序列，其是与SEQ ID NO:1至少90％相同的氨基酸序列，或(b) 包含以下的氨基酸序列 SEQ ID NO:2或与SEQ ID NO:2至少90％相同的氨基酸序列，和 具有通式Pro‑Tyr‑X‑Gly‑Ile的氨基酸序列，其中X选自Lys、Arg和Val。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：S厄班，倪翼，
申请(专利权)人：海德堡吕布莱希特卡尔斯大学，
类型：发明
国别省市：德国;DE
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