PKM2调节剂和HMGB1的组合制剂制造技术

本发明专利技术涉及包含以下项的组合制剂：(i)丙酮酸激酶M2(PKM2)活性调节剂和(ii)提供高速泳动族盒1(HMGB1)多肽或其衍生物的试剂。本发明专利技术还涉及用作药物和用于治疗不适当细胞增殖优选用于治疗癌症的上述组合制剂。此外，本发明专利技术涉及用于确定患有不适当细胞增殖的受试者是否适合进行包括给予PKM2活性调节剂作为唯一PKM2抑制剂治疗的方法以及与其相关的治疗方法。

Combination of PKM2 regulator and HMGB1

The present invention relates to a combined preparation comprising the following items: (I) a pyruvate kinase M2 (PKM2) active regulator and (II) providing a reagent for a high speed swimming race box 1 (HMGB1) polypeptide or its derivative. The invention also relates to the above combination preparation used as a medicine and for the treatment of inappropriate cell proliferation and preferably for the treatment of cancer. In addition, the present invention relates to whether a subject to determine the proliferation of an inappropriate cell is suitable for a method including the treatment of a PKM2 active regulator as the only PKM2 inhibitor and its related treatment.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】PKM2调节剂和HMGB1的组合制剂本专利技术涉及包含以下项的组合制剂：(i)丙酮酸激酶M2(PKM2)活性调节剂和(ii)提供高速泳动族盒1(HMGB1)多肽或其衍生物的试剂。本专利技术还涉及用作药物和用于治疗不适当细胞增殖优选用于治疗癌症的上述组合制剂。此外，本专利技术涉及一种方法，用于确定患有不适当细胞增殖的受试者是否适合进行包括给予PKM2活性调节剂作为唯一PKM2抑制剂的治疗以及是否适合于涉及其的治疗方法。高速泳动族盒1(HighMobilityGroupBox1，HMGB1)蛋白属于高速泳动族(HMG)核蛋白家族，因其成员在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中异常高速泳动率而被命名。这些蛋白质是染色质相关的仅次于组蛋白的最丰富蛋白质之一，并且它们在真核细胞的细胞核中发挥结构作用，因为它们弯曲、扭曲或以其他方式修饰DNA的构象，从而也改变了转录因子与DNA的结合。HMG蛋白已经涉及各种失调的发生，如几种良性肿瘤和自身免疫性疾病。此外，大量HMGB1的释放，特别是从NK细胞释放，对于树突细胞活化(Saidietal.(2008)，PloSone3，e3601)和趋化性(Yangetal.(2007)，Journalofleukocytebiology81，59-66)是关键的。另外，HMGB1表现出惊人的抗微生物活性，导致快速杀死细菌(Zetterstrometal.，(2002)，Pediatricresearch52，148-154)。内源性HMGB1也错综复杂地参与细胞和器官的能量代谢。由于围产期低血糖，敲除HMGB1的小鼠不能利用肝细胞中的糖原贮存池并死亡。葡萄糖暂时挽救这些动物，但由于内脏器官、肌肉和脂肪组织的严重萎缩，小鼠几天后死亡(Calogeroetal.(1999)，Naturegenetics22，276-280)。小鼠肌肉组织与HMGB1的离体温育导致肌纤维的快速耗竭，并且在患有多肌炎的患者的肌浆中发现HMGB1浓度升高(Grundtmanetal.(2010)，TheFASEBjournal24，570-578)。总之，HMGB1的缺乏和过量严重影响细胞能量代谢。细胞外HMGB1是一种有效的细胞因子，并且是巨噬细胞和免疫系统其他细胞的强有力的活化因子，导致广泛的炎症反应。由于这个原因，HMGB1与系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎等自身免疫性疾病有关。然而，也发现血液中大量的HMGB1表明严重或危及生命的炎症如败血症。为了拮抗这样的HMGB1相关病变，已经描述了HMGB1功能抑制剂，如抑制性抗体或其片段，在盒A中包含突变的HMGB1变体，或盒A结构域的聚合物缀合物(US6,468,533、WO02/074337、US2003/0144201、WO2006024547、和WO2008031612)。另一方面，HMGB1被提出作为抗癌剂(US2011/0123483A1)。对于HMGB1蛋白，已经描述了几种结构基序：两个DNA结合结构域(盒A和盒B)，两个核定位序列，和C端酸性结构域。HMGB1蛋白可以通过乙酰化、甲基化、ADP-核糖基化、磷酸化或糖基化进行广泛的翻译后修饰。核定位位点的乙酰化是导致HMGB1蛋白从免疫系统的活化细胞中主动分泌的信号。除了主动分泌，HMGB1也被动地从坏死细胞释放。最近将丙酮酸激酶M2(pyruvatekinaseM2，PKM2)鉴定为癌症治疗的特异性靶标，其特别是在癌细胞中产生。PKM2是糖酵解的定步酶，并且以两种形式存在：四聚体形式用于葡萄糖的需氧降解，并且对其底物磷酸烯醇丙酮酸(PEP)具有低Km值；因此，四聚体形式在生理浓度的PEP下的活性很高，引起葡萄糖进入能量代谢。PKM2的二聚体形式对于PEP具有高Km值，并且在生理浓度的PEP下几乎无活性，导致丙酮酸之前的糖酵解中间体被引导至合成过程中。已知有两组PKM2调节剂：抑制剂，例如特定的磷酸酪氨酸-肽，例如P-M2tide(酪氨酸磷酸化肽GGAVDDDYAQFANGG(SEQIDNO：1))引起四聚体解离成二聚体形式。激活剂，例如ML265(CAS-NO：1221186-53-3，6-(3-氨基苄基)-4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4，6-二氢-5H-噻吩并[2′，3′：4，5]吡咯并[2，3-d]哒嗪-5-酮)稳定PKM2的四聚体形式。有趣的是，发现PKM2的抑制剂和激活剂具有抗肿瘤活性；然而，化合物必须以高浓度(约100μM或更高)使用才能发挥作用。除了手术切除肿瘤组织之外，癌症治疗基本上还依赖于对积极分裂的细胞施加有害功能的药物和/或治疗的应用。就其性质而言，这种治疗还会损害正在进行细胞分裂的人体内的非肿瘤细胞和组织，导致化疗和放疗的大部分已知和令人厌恶的副作用，如恶心、消化失常、疲劳、头发损失等等。因此，需要新的治疗剂，其具有通过迄今未知的作用途径有效，从而潜在地允许在化疗和/或放疗中减少剂量，减轻副作用。提供这种使用新的癌细胞杀伤途径的药物也潜在地有助于去除癌症干细胞，这些细胞可以通过进入静息状态而在化疗中存活，并且最近被发现这些细胞对所有复发和转移中的至少一部分负责。因此，本专利技术涉及一种组合制剂，其包含(i)丙酮酸激酶M2(PKM2)活性的调节剂，和(ii)提供高速泳动族盒1(HMGB1)蛋白质或其衍生物的试剂。如以下所使用的，术语“具有”，“包含”或“包括”或其任何语法变体以非排他性的方式使用。因此，这些术语都可以指除了由这些术语引入的特征之外在本上下文中描述的实体中不存在其他特征的情况，并且可以指除了存在一个或多个其他特征的情况。作为一个例子，表述“A具有B”，“A包含B”和“A包括B”可以既指A中除B之外不存在其他要素的情况(即单独并且排他性地由B组成)并且也指在实体A中除了B之外还在存在一个或多个另外的要素(诸如要素C、要素C和D或甚至其他要素)的情况。此外，如下文中所使用的，术语“优选”、“更优选”、“最优选”、“特别地”、“更特别地”、“具体地”、“更具体地”或类似术语与任选特征结合使用，而不限制其他可能性。因此，这些术语引入的特征是任选特征，并不意图以任何方式限制权利要求的范围。如本领域技术人员将认识到的，本专利技术可以通过使用替代特征来执行。类似地，由“在本专利技术的实施方案中”或类似的表述引入的特征旨在作为任选特征，对本专利技术的其他实施方案没有任何限制，对本专利技术的范围没有任何限制，并且对以这种方式引入的特征与本专利技术其他任选的或非任选的特征组合的可能性没有任何限制。而且，如果没有另外指出，则术语“约”与指示值±20％有关。在本申请中提及的术语“组合制剂”涉及在一种制剂中包含本专利技术的药学活性化合物的制剂。优选地，组合制剂包含在容器中，即优选地，所述容器包含本专利技术的所有药学活性化合物。优选地，所述容器包含作为单独的配制品的本专利技术的药学活性化合物，即优选一种PKM2活性调节剂配制品，和一种提供高速泳动族蛋白1(HMGB1)蛋白或其衍生物的试剂配制品；更优选地，所述容器包含呈单一配制品例如本专利技术的药学活性化合物，优选作为双层片剂等。最优选地，组合制剂是混合配制品，即优选地，组合制剂包含本专利技术化合物的混合物。如技术人员将理解的，术语“配制品”涉及化合物的混合物优本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合制剂，包含(i)丙酮酸激酶M2(PKM2)活性的调节剂，和(ii)提供高速泳动族盒1(HMGB1)多肽或其衍生物的试剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.11 EP 15199555.2;2015.12.21 EP 15201752.11.一种组合制剂，包含(i)丙酮酸激酶M2(PKM2)活性的调节剂，和(ii)提供高速泳动族盒1(HMGB1)多肽或其衍生物的试剂。2.如权利要求1所述的组合制剂，其中提供HMGB1多肽或其衍生物的所述试剂是(i)包含HMGB1多肽的多肽，(ii)包含HMGB1多肽的盒B的多肽，(iii)具有与(i)或(ii)的多肽至少70％相同的氨基酸序列并具有抑制PKM2四聚体形式活性的多肽，(iv)特异性结合包含(i)至(iii)中任一项所述的多肽的肿瘤细胞的试剂，(v)经诱导分泌HMGB1多肽的HMGB1分泌细胞，(vi)编码(i)、(ii)和/或(iii)的多肽的可表达的多核苷酸，优选包含在载体和/或宿主细胞中；或(vii)(i)至(vi)的任何组合。3.如权利要求2所述的组合制剂，其中(i)的所述HMGB1多肽是人HMGB1多肽，优选包含SEQIDNO：4的氨基酸序列；其中(ii)的HMGB1多肽的所述盒B是人HMGB1多肽的盒B，优选包含SEQIDNO：5的氨基酸序列；其中(iv)的所述HMGB1分泌细胞是巨噬细胞或NK细胞；和/或其中(vi)的所述可表达的多核苷酸是包含以下项的多核苷酸：(I)SEQIDNO：6和/或7的核酸序列，或(II)与(I)的核酸序列至少70％相同的核酸序列，和启动子，优选异源启动子。4.权利要求1至3中任一项所述的组合制剂，其中所述PKM2调节剂是PKM2抑制剂，优选PKM2四聚化抑制剂，更优选是P-M2tide(酪氨酸磷酸化SEQIDNO：1)。5.如权利要求1至3中任一项的组合制剂，其中所述调节剂是PKM2的激活剂，优选稳定PKM2四聚体的试剂，更优选ML265(6-(3-氨基苄基)-4-甲基-2-(甲基亚磺酰基)-4，6-二氢-5H-噻吩并[2′，3′：4，5]吡咯并[2，3-d]哒嗪-5-酮)。6.如权利要求1至5中任一项的组合制剂，其中所述组合制剂用于组合使用或分开使用和/或同时使用或顺序使用。7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合制剂，用作药物。8.根据权利要求1至6中任一项所述的组合制剂，用于治疗不适当的细胞增殖，优选用于治疗癌症。9.用于根据权利要求1至8中任一项的用途的组合制剂，用于在不适当的细胞增殖中防止细胞选择，所述细胞(i)对用PKM2活性调节剂治疗有抗性或(ii)对用提供HMGB1或其衍生物的试剂的治疗有抗性。10.一种PKM2活性调节剂，用于在针对不适当的细胞增殖的组合疗法中使用...

【专利技术属性】
技术研发人员：格奥尔格·格迪尼亚，维尔弗里德·罗特，
申请(专利权)人：海德堡吕布莱希特卡尔斯大学，
类型：发明
国别省市：德国,DE