本发明专利技术属于生物医药领域，涉及核受体FXR在肝癌干细胞靶向治疗中的应用。以核受体FXR为靶点，诊断或辅助诊断肝癌干细胞，并通过设计基因药物或化学药物作为治疗肝癌干细胞的应用。核受体FXR在肝癌干细胞靶向治疗中的应用，所述基因药物为含有FXR表达载体或干扰载体；所述化学药物含有调控FXR的配体及调控FXR靶基因的配体。本发明专利技术通过细胞转染并活化核受体FXR后，能够显著降低肝癌细胞系的瘤球形成能力，降低肝癌干细胞的致瘤性，为肝癌干细胞的鉴定和肝癌的诊断及治疗提供一个新的分子靶标，从而解决常用肿瘤干细胞分子标记难以调控的问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，涉及核受体FXR在肝癌干细胞靶向治疗中的应用。
技术介绍
原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，居恶性肿瘤的第四位。我国每年因肝癌死亡人数为 42.2/10000 人，仅次于肺癌和胃癌。肝细胞癌（Heptocellular carcinoma， HCC）是原发性肝癌中最常见的一种，约占85％-90％。目前关于肝癌发生的详细机制仍不清楚，但来自于白血病，生殖细胞肿瘤和一系列实体肿瘤的数据支持了肿瘤是由一小群能自我更新的肿瘤干细胞（CSCs）来维持，这就是我们一般熟知的肿瘤干细胞模型，CSC对肿瘤发生、发展、侵袭、转移、复发及耐药起了决定性作用。肝硬化或肝炎导致的慢性肝损伤是肝癌形成的重要环节，而胆汁酸代谢障碍则是造成慢性肝损伤的一个重要诱因。作为胆汁酸的核受体，法尼酯X受体（FXR， NR1H4）早在1995年被分离出来，它作为一个孤儿核受体被法尼醇活化，是甲羟戊酸代谢通路的中间媒介。FXR 高表达于肝、肠、肾和肾上腺中，反馈性控制调节这些器官中胆汁酸的合成、分泌和重吸收通道。FXR能被数种胆汁酸活化，像鹅脱氧胆酸（CDCA）、胆酸（CA）、脱氧胆酸（DCA）等，GW4064做为一种合成激动剂也可活化FXR（Identification of a nuclear receptor for bile acids. Science 1999; 284: 1362-1365.）。在肝脏中，FXR可作为一个单一元件或和类维生素AX 受体（RXR）形成二聚体作为FXR的功能单位调节多种目的基因。FXR调控的基因包括不同的代谢途径，如胆汁酸平衡、脂类代谢和葡萄糖代谢。例如，FXR可活化小异质二聚体伴侣（SHP），而抑制胆固醇7α羟化酶（CYP7A1）；FXR也能活化磷脂泵MDR3；FXR也可调节肝脏糖质新生途径的关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）基因表达。FXR与肝癌的发生也关系密切。Kim等发现FXR缺陷小鼠易发生肝损伤，并且促进促炎因子IL-1β和c-my表达，最终导致高的肝癌发生率（Spontaneous hepatocarcinogenesis in farnesoid X receptor-nμLl mice. Carcinogenesis 2007; 28: 940-946.）；Yang等也发现12月龄的 FXR缺陷小鼠自发性肝癌发生率极高（Spontaneous Development of Liver TμMors in the Absence of the Bile Acid Receptor Farnesoid X Receptor. Cancer Res 2007; 67: 863-867.）。对于 FXR基因敲除小鼠产生自发性肿瘤的机制尚不明确，可能是由于持续性激活Wnt/β-catenin通路所致；我们也发现FXR可以通过抑制NF-κB信号通路抑制肝炎，从而抑制肝癌的发生（Farnesoid X receptor antagonizes NF-κB in hepatic inflammatory response. Hepatology 2008; 48: 1632-1643.）；此外，在许多研究中表明，FXR不仅能抑制肝癌的生成，对结肠癌、肠道肿瘤、胆管癌和胃食管癌的发生也有拮抗作用。但在肿瘤上，Guan对食道癌研究证明，FXR高表达于食道癌中，并且FXR表达与肿瘤恶性程度、大小、淋巴结转移成正相关。此外，抑制FXR则抑制肿瘤细胞的生长，诱导细胞凋亡，并且降低异种移植瘤的形成（Inhibition of Farnesoid X Receptor Controls Esophageal Cancer Cell Growth In Vitro and in Nude Mouse Xenografts. Cancer 2012; 000: 1-9.）。胰腺癌中的研究也证明FXR与肿瘤细胞的增殖，侵袭密切相关。Deuschle发现FXR能通过控制肿瘤抑制基因NDRG2控制肿瘤形成，FXR激动剂PX20606能诱导NDRG2来抑制异种移植肿瘤的生长和转移（FXR Controls the TμMor Suppressor NDRG2 and FXR Agonists Reduce Liver TμMor Growth and Metastasis in an Orthotopic Mouse Xenograft Model. PLOS ONE 2012; 7: 1-16.）。CSCs的分离鉴定为临床上靶向治疗提供了理论基础，但是通过表面标志物的方法来进行靶向治疗却在应用上困难重重。我们发现，活化FXR可降低CSCs的致瘤能力。FXR可以调控胆汁酸平衡、脂类代谢和葡萄糖代谢等代谢途径，在代谢中占据重要地位，尤为重要的是可以通过控制FXR内源性配体来调控FXR。因此，通过靶向FXR进行肿瘤治疗或许是一个惊奇的选择。
技术实现思路
本专利技术解决了降低肝癌干细胞致瘤能力的技术难题，公开了FXR在肝癌干细胞靶向治疗中的应用。为解决上述技术难题，本专利技术采用以下技术方案：核受体FXR在肝癌干细胞靶向治疗中的应用，以核受体FXR为靶点，诊断或辅助诊断肝癌干细胞，并通过设计基因药物或化学药物作为治疗肝癌干细胞的应用。所述基因药物为含有FXR表达载体或干扰载体；所述化学药物含有调控FXR的配体及调控FXR靶基因的配体。所述FXR的配体为鹅脱氧胆酸、胆酸、脱氧胆酸或GW4064。所述FXR的靶基因为小异质二聚体伴侣或胆固醇7α羟化酶。以FXR为靶点治疗肝癌干细胞的产品，包括增强或抑制的FXR 表达的基因药物，和通过FXR的配体来调控FXR及其靶基因的表达化学药物，用以改变肿瘤干细胞的致瘤能力。FXR的配体包括鹅脱氧胆酸（CDCA）、胆酸（CA）、脱氧胆酸（DCA），GW4064，FXR的靶基因包括小异质二聚体伴侣（SHP）和胆固醇7α羟化酶（CYP7A1）。所述改变肿瘤干细胞的生物学特性是指减弱或降低肿瘤干细胞的致瘤能力。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的核受体FXR能够通过控制核受体FXR的配体及核受体FXR的靶基因在肿瘤干细胞中的表达降低肝癌干细胞的致癌能力；通过细胞转染并活化核受体FXR后，能够显著降低肝癌细胞系的瘤球形成能力，降低肝癌干细胞的致瘤性，为肝癌干细胞的鉴定和肝癌的诊断及治疗提供一个新的分子靶标，此分子靶标的优点在于可以通过配体的活化来实现对靶基因的调控，从而解决常用肿瘤干细胞分子标记难以调控的问题。附图说明图1为HepG2细胞经无血清培养0、4、10和14天时形成囊球的光镜图，20X。图2为免疫荧光检测HepG2细胞和囊球细胞中CD133的表达。图3为流式检测HepG2细胞和囊球细胞中CD133的表达；其中，红色的是阴性对照，绿色的为CD133标记。图4为囊球细胞和HepG2细胞的FXR及其靶基因SHP和CYP7A1的表达。图5为HepG2细胞转染FXR质粒后无血清培养12天的瘤球形成百分率；其中转染GFP为阴性对照。图6为HepG2细胞转染FXR质粒后显示瘤球光镜图，4X；*， p<0.05; **， p<0.01。图7为HepG2细胞加本文档来自技高网...
【技术保护点】
核受体FXR在肝癌干细胞靶向治疗中的应用，其特征在于：以核受体FXR为靶点，诊断或辅助诊断肝癌干细胞，并通过设计基因药物或化学药物作为治疗肝癌干细胞的应用。
【技术特征摘要】
1.核受体FXR在肝癌干细胞靶向治疗中的应用，其特征在于：以核受体FXR为靶点，诊断或辅助诊断肝癌干细胞，并通过设计基因药物或化学药物作为治疗肝癌干细胞的应用。2.如权利要求1所述的核受体FXR在肝癌干细胞靶向治疗中的应用，其特征在于：所述基因药物为含有FXR表达载体或干扰载体；所述化学药物含有调控F...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈卫东，叶文凌，王艳东，周云，聂小博，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：河南;41
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