人微RNA miR‑185在制备细胞生长和/或衰老调控剂中的应用制造技术

本发明专利技术提供了人微RNA（microRNAs）miR‑185在制备细胞生长和/或衰老调控剂中的应用。所述miR‑185可以直接作用于人端粒蛋白POT1的信使RNA（mRNA）的3’‑非翻译区（3’UTR），抑制POT1的mRNA和蛋白表达，引起端粒损伤和端粒长度紊乱，从而加速细胞衰老和抑制细胞生长速度。因此，miR‑185在细胞生长和衰老过程中有着重要的调控功能，可以针对miR‑185开发有效的细胞生长和衰老的调控剂，如开发抗衰老药物用于延缓细胞衰老过程，以及开发肿瘤生长抑制剂用于抑制肿瘤细胞的生长，用于抗癌治疗，都具有重要的意义。

Micro RNA miR 185 applications in preparation of cell growth and / or senescence regulation agent in

The invention provides a micro RNA (microRNAs) miR 185 applications in preparation of cell growth and / or senescence regulation agent in. The miR 185 messenger RNA can directly affect human telomeric protein POT1 in the (mRNA) 3 'untranslated region (3' UTR), inhibited the expression of mRNA and protein of POT1, induced by telomere damage and telomere length disorder, thus accelerating cell senescence and inhibit cell growth rate. Therefore, miR 185 in cell growth and senescence have important regulatory functions, control agent for miR 185 can develop effective cell growth and senescence, such as the development of anti-aging drugs for delaying cell aging process, and the development of tumor growth inhibitors to inhibit the growth of tumor cells, for anticancer therapy, has important.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药
，具体地，涉及人微RNA（microRNAs）miR-185在制备细胞生长和衰老调控剂中的应用。
技术介绍
端粒是真核生物染色体末端由包括双链TTAGGG重复序列和单链3’悬突构成的DNA序列及其相互作用蛋白组成的高度有序的特殊结构。它能够保护染色体末端、维持基因组稳定性及参与细胞衰老调控等生物学过程。正常人细胞每分裂一次，由于末端复制问题，端粒长度将逐渐缩短。当端粒缩短到一定界限时，细胞将无法继续分裂，进入衰老和死亡过程。端粒结合蛋白是特异结合在端粒上的特殊蛋白复合体，具有保护端粒，稳定端粒结构，防止端粒间融合，抑制DNA损伤发生等功能。人类端粒蛋白复合体由6个蛋白组成，分别是TRF1、POT1、TIN2、RAP1、TPP1和POT1。在这六个蛋白中，端粒保护蛋白1（protections of telomere 1 protein，POT1）是在进化中最为保守的一个蛋白。POT1能够结合端粒3’悬突单链DNA（ssDNA），从而保护3’悬突不被降解和不被DNA损伤修复通路识别，促进端粒T环结构的形成。POT1对于端粒长度有着重要影响，对细胞周期的进程也有影响，同时还可避免ATR介导的DNA损伤修复反应，但这些功能在不同物种中具有巨大的差别。人的POT1蛋白与TPP1结合，共同调控端粒酶的持续延伸能力。POT1的异常表达伴随着一些重大疾病的发生，全基因组测序结果表明一些影响POT1正确剪接或者ssDNA结合的POT1的点突变在家族遗传性的黑色素瘤病人中被发现，并且引起了端粒的异常延伸；在某些心脏血管肉瘤的病人中也存在POT1的点突变，引起了POT1的表达降低和端粒的异常延伸和结构紊乱；在某些慢性淋巴细胞白血病人中，POT1的点突变引起了端粒的紊乱；在端粒异常缩短的再生障碍性贫血病人中，POT1呈现低表达；这些结果说明了POT1蛋白的正确表达对于正常细胞的端粒调控和基因组稳定性的维持具有重要意义。在人的正常细胞内敲除POT1，将引发端粒紊乱，细胞衰老和生长停滞。细胞衰老是一个复杂有序的生物学过程。体外培养的正常细胞经过有限次数分裂，端粒逐渐缩短，DNA损伤积累，细胞形态和生理代谢活动发生改变，表现出细胞生长减慢、β半乳糖苷酶活性升高和炎症因子分泌增多等。衰老可引起组织代谢减缓，器官机能衰退，诱发各种衰老相关的退行性疾病如阿尔茨海默病亨廷顿病等，以及显著增加恶性肿瘤的发病率。我国目前已全面进入人口老龄化，也面临着恶性肿瘤越来越高发和医疗资源的紧张，社会保障不足的各种危机。因此，研发抗衰老或延缓衰老药物，以及抗恶性肿瘤的药物，不仅能治疗衰老相关疾病，解决人口老龄化问题，还能极大满足全球范围抗肿瘤治疗的需求。基于以上POT1在衰老和恶性肿瘤中发挥的重要功能，寻找调控POT1表达的因子将为我们研究细胞生长衰老过程，研发抗衰老药物和抗肿瘤药物具有重要的指导意义。microRNAs（以下简称miRNAs）是一类长约20-24 nt的单链小分子非编码RNA，由一段具有茎环结构的、长度为70-80 nt的单链RNA前体(pre-miRNA)经剪切而生成。miRNAs通过与mRNA分子的3'非编码区域(3'-untranslated region,3'UTR)互补匹配导致该mRNA分子的翻译受到影响或被降解。miRNA的形成始于细胞核内由RNA聚合酶II或III转录得到片段较长的初级miRNA（pri-miRNA），然后在核内由dsRNA特异性核酸酶Drosha剪切为约70 nt，具有茎环结构的miRNA前体（pre-miRNA）。pre-miRNA在Ran-GTP依赖的核质/细胞质转运蛋白Exportin 5的作用下，从核内运输到胞质中，再由Dicer酶（双链RNA专一性RNA内切酶）进一步加工成为约22 nt的成熟双链miRNA（miRNA:miRNA*双螺旋），随即双链中的一条链被整合到RNA沉默复合体（RNA-induced silencing complex，RISC）中，形成非对称RISC复合物(asymmetric RISC assembly，miRISC)。当miRISC识别互补或部分互补的目标mRNA分子的3'UTR后，就会阻止蛋白质的翻译或者降解mRNA，从而抑制基因的表达。microRNAs通过调控靶基因的表达，参与调控许多生物学过程，如细胞周期、肿瘤发生发展、肿瘤转移和干细胞多能性等。目前未见有miRNAs在细胞生长和衰老调控方面，尤其是调控POT1表达的研究和报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服上述现有技术中细胞生长和抗衰老药物的缺陷和不足，提供人微RNA（microRNAs）miR-185在制备细胞生长和/或衰老调控剂中的应用。本专利技术研究表明，miR-185直接作用于人端粒蛋白POT1的信使RNA（mRNA）的3’-非翻译区（3’UTR），抑制POT1的mRNA和蛋白表达，进而抑制肿瘤细胞生长和加速肿瘤细胞衰老，在调控细胞生长和衰老过程中有重要作用。本专利技术的目的是提供miR-185在制备细胞生长和/或衰老调控剂中的应用。本专利技术的另一目的是提供miR-185表达调控剂在制备细胞生长和衰老调控剂中的应用。本专利技术的再一目的是提供一种调控细胞生长和衰老的药物制剂，所述制剂含有miR-185。本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现：本专利技术公开了miR-185在调控细胞生长和衰老过程中的功能，提供了miR-185在制备细胞生长和/或衰老调控剂中的应用。所述miR-185的序列为：AGGGGGCGAGGGAUUGGAGAGAAAGGCAGUUCCUGAUGGUCCCCUCCCCAGGGGCUGGCUUUCCUCUGGUCCUUCCCUCCCA（下划线部分为种子序列）。本专利技术研究表明，miR-185通过直接作用于POT1的3’UTR，抑制POT1的表达，进而抑制肿瘤细胞生长和加速细胞衰老。具体地，miR-185通过其第2-10位种子序列（seed region）与POT1的3’UTR的第2873-2889位碱基互补配对，降低POT1的mRNA和蛋白水平，导致肿瘤细胞生长速度减缓，加速细胞衰老。本专利技术发现，miR-185与端粒蛋白POT1的表达呈负相关，且端粒蛋白POT1及其机制在人体细胞中普遍存在。因此，miR-185在调控细胞生长和衰老过程中有着重要功能，可以针对其调控机制制备有效的衰老调控剂或抗衰老药物，以及抗肿瘤细胞生长药物。优选地，上述应用是指miR-185在制备肿瘤细胞生长延缓剂或加速肿瘤细胞衰老制剂中的应用。另外，以下所述的应用均应在本专利技术的保护范围之内：miR-185表达调控剂在制备细胞生长和/或衰老调控剂中的应用。miR-185表达促进剂或激活剂在制备细胞生长延缓剂或加速细胞衰老制剂中的应用。优选地，所述细胞为肿瘤细胞。优选地，所述肿瘤细胞为人纤维肉瘤细胞。更优选地，所述人纤维肉瘤细胞为人纤维肉瘤细胞HTC75。miR-185表达抑制剂在制备抗衰老剂中的应用。miR-185表达抑制剂在制备皮肤抗衰老剂中的应用。另外，一种包含有效量的miR-185的细胞生长和衰老调控的药物制剂，也在本专利技术的保护范围之内。优选地，所述药物制剂还包含药本文档来自技高网...

【技术保护点】
miR‑185在制备细胞生长和/或衰老调控剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.miR-185在制备细胞生长和/或衰老调控剂中的应用。2.miR-185在制备肿瘤细胞生长延缓剂或加速肿瘤细胞衰老制剂中的应用。3.miR-185表达调控剂在制备细胞生长和/或衰老调控剂中的应用。4.miR-185表达促进剂或激活剂在制备细胞生长延缓剂或加速细胞衰老制剂中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述细胞为肿瘤细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：松阳洲，黄燕，黄军就，李婷婷，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44