用于病毒生产的细胞系和使用方法技术

在此提供了工程化细胞系。在一些实施例中，一种工程化细胞系的细胞具有一种基因的改变的表达和/或一种miRNA的改变的表达，其中该改变的表达会导致提高或降低一种病毒的生产。该病毒是一种微小核糖核酸病毒如一种脊髓灰质炎病毒或肠道病毒71。在此还提供了用于使用这些工程化细胞来产生病毒的方法，以及用于治疗患有病毒感染或处于患病毒感染的风险中的受试者的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 相关申请的交叉参考 本申请要求2013年2月5日提交的美国临时申请序列号61/760, 895和2013年 10月1日提交的序列号61/885, 357的权益，每份申请通过引用结合在此。 政府资助本专利技术是在联邦预算线5614A11101 "新发性传染病"下由政府支持进行的。政府 具有本专利技术中一定的权利。 专利
本专利技术涉及用于增强病毒生产的组合物和方法。具体而言，这些组合物可以包括 基因（基因靶标）、所述基因靶标的效应物、以及其中基因靶标已被改变来增强病毒生产的 细胞系和细胞裂解物。 背景 疫苗是用来预防人类疾病的主要策略之一。当前，2种以上疫苗可用于对抗由病 毒传染引起的疾病（例如，水痘、乙型肝炎、麻疹、脊髓灰质炎）和细菌传染引起的疾病（例 如，霍乱、破伤风、伤寒、白喉）。类似地，疫苗用来预防家畜的许多疾患，这些家畜包括但不 限于：家禽、马、猪、以及其他动物。 虽然若干疫苗（包括流感疫苗）仍然是产生于受精鸡卵（家鸡（Gallusgallus domesticus))中，但更多数量的疫苗是产生于细胞培养物中。在一种情况下，充分表征的细 胞系（例如，维洛细胞（VeroCell))首先感染活病毒或活的减毒病毒。随后，含有子代病 毒颗粒的上清液被收集和加工来产生之后可以分配到种群中的高度免疫原性剂量的疫苗。 尽管疫苗被证明是成功的，但根除或控制疾病爆发的能力因疫苗生产的成本和制 造局限而重复受到挑战。脊髓灰质炎疫苗对此作出了最佳说明。脊髓灰质炎病毒是一种人 肠道病毒并且是脊髓灰质炎的病原体，这种神经变性剂的粪-口传播会导致急性麻痹。此 时，疫苗被产生来限制脊髓灰质炎的传播，并且包括高效（且明显更为昂贵）的灭活脊髓灰 质炎疫苗（IPV)以及效力略低（且更为经济）的口服脊髓灰质炎疫苗（OPV)。出于有关减 毒的OPV病毒颗粒会回复到高度传染性的神经毒性脊髓灰质炎病毒的技术原因，成功根除 脊髓灰质炎将借助于开发显著降低IPV制造成本的新技术。 专利技术既述 在此提供了可以由脊髓灰质炎疫苗制造厂家使用来显著降低OPV和IPV疫苗的生 产成本的一批基因、试剂以及细胞系。本专利技术提供调节（下调或过表达）时增强脊髓灰质炎 病毒复制的一列宿主基因（蛋白编码基因和非编码RNA)。因此，鉴别的基因可以被调节来 提高脊髓灰质炎病毒疫苗生产。另外，诸位专利技术人描述了可以被产生来增强脊髓灰质炎病 毒生产的一系列细胞系。以上全部可以单独或组合使用来增强用来对抗脊髓灰质炎以及其 他微小核糖核酸病毒感染的疫苗的生产。最后，诸位专利技术人描述了可以通过多种手段（例 如，siRNA、miRNA、小分子）调节来限制脊髓灰质炎病毒生产的一系列基因。 在此提供了工程化的细胞系。在一个实施例中，该工程化细胞系的细胞具有选 自表I的与一种对照细胞系相比一个编码区的降低的表达，其中该编码区选自ZNF205、CNTD2、SEC61G、ETS1、TAF1L、MCCD1、LY6G6C、BTN2A1、GLXP3、GCGR、EP300。在一个实施例 中，该工程化细胞系的细胞具有选自表I的与一种对照细胞系相比一个编码区的降低的表 达。与该对照细胞系相比，该降低可以是至少5%。表达的降低可以通过测量细胞中由该编 码区编码的多肽或mRNA的量来确定。在一个实施例中，这些细胞在该编码区中或可操作地 连接到该编码区上的一个调节区中包括一个突变。在一个实施例中，这些细胞包括降低该 编码区的表达的一种外源多核苷酸。该外源多核苷酸可以是RNA多核苷酸如siRNA、shRNA、 或反义多核苷酸。在一个实施例中，这些细胞包括导致降低的表达的一个编辑基因组。例 如，该基因组可以由锌指核酸酶、大范围核酸酶或转录激活因子样效应物编辑。 在一个实施例中，这些细胞进一步包括选自表I的至少一个另外的编码区的降 低的表达，与一种对照细胞系相比选自miR-520e、miR-1256、miR-520d-3p、miR-513a-5p、 miR-519c-3p、miR-1270-2、miR-3187、miR-5763p、miR-22、miR-520c-3p以及miR-9 的一 个miRNA的提高的表达，选自表IV的一个miRNA的降低的表达，或它们的组合。在一个实 施例中，这些细胞包括选自表I的至少五个编码区的降低的表达。在一个实施例中，这些 细胞进一步包括至少2个编码区的一个组合的降低的表达，其中编码区的这些组合选自表 VI。在一个实施例中，这些细胞包括选自表II的与一种对照细胞系相比一个编码区的提高 的表达。在一个实施例中，这些细胞进一步包括选自表II的至少一个另外的编码区的提 高的表达，与一种对照细胞系相比选自miR-520e、miR-1256、miR-520d-3p、miR-513a-5p、 miR-519c-3p、miR-1270-2、miR-3187、miR-5763p、miR-22、miR-520c-3p以及miR-9 的一个 miRNA的降低的表达，选自表IV的一个miRNA的降低的表达，或它们的组合。在一个实施例 中，这些细胞包括选自表II的至少五个编码区的提高的表达。 在一个实施例中，该工程化细胞系的细胞包括与一种对照细胞系相比选自 miR_520e、miR-1256、miR-520d_3p、miR-513a_5p、miR-519c_3p、miR-1270-2、miR-3187、 miR-5763p、miR-22、miR-520c-3p以及miR-9的一个miRNA的提高的表达。这些细胞可以 包括充当这些miRNA之一的一种miRNA模拟物。在一个实施例中，这些细胞进一步包括至 少两个miRNA的提尚的表达。 在一个实施例中，该工程化细胞系的细胞包括选自表IV的与一种对照细胞系相 比一个内源miRNA的降低的表达。在一个实施例中，这些细胞在编码该miRNA的该编码区 中或可操作地连接到该编码区上的一个调节区中包括一个突变。在一个实施例中，这些细 胞包括抑制该内源miRNA的活性的一种miRNA抑制剂。 -个工程化细胞系的细胞可以包括一种微小核糖核酸病毒。在一个实施例中，该 微小核糖核酸病毒是一种脊髓灰质炎病毒如减毒的脊髓灰质炎病毒，例如，沙宾（Sabin) 1、 沙宾2、沙宾3。在一个实施例中，该脊髓灰质炎病毒选自Mahoney、Brunhilde、MEF-1、 Saukett、或它们的组合。在一个实施例中，该细胞系的细胞包括两种或三种脊髓灰质炎病 毒。在一个实施例中，该脊髓灰质炎病毒是肠道病毒71。 该工程化细胞系可以是哺乳动物细胞系、禽类细胞系、或昆虫细胞系。在一个实施 例中，该哺乳动物细胞系选自人细胞系、非人灵长动物细胞系、犬细胞系、或仓鼠细胞系。在 一个实施例中，该哺乳动物细胞系是ffip-2或VeroP。在一个实施例中，该禽类细胞系是鸡 细胞系，或鸭细胞系。 在此进一步提供了一种工程化细胞系的一种裂解物。 在此提供了用于产生一种病毒的方法。在一个实施例中，该方法包括提供在此描 述的该工程化细胞系，其中该细胞系的细胞包括一种病毒；在适于通过这些细胞产生该病 毒的条件下孵育该工程化细胞系；任选地收获由这些细胞产生的该病毒。在一个实施例 中，该方法包括提供一个细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种工程化细胞系，其中该工程化细胞系的细胞包括选自表I的与一种对照细胞系相比一个编码区的降低的表达，其中该编码区选自ZNF205、CNTD2、SEC61G、ETS1、TAF1L、MCCD1、LY6G6C、BTN2A1、GLXP3、GCGR、EP300。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：JM卡皮洛，MS奧伯斯特，RA特里普，SM汤普金斯，
申请(专利权)人：乔治亚大学研究基金公司，美国政府卫生与公众服务部，赛默飞世尔科技有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US