本发明专利技术属于农产品加工技术领域，具体涉及一种大豆源抗氧化肽纳米脂质体及其制备方法。以3～10kDa大豆抗氧化肽为原料，以包封率，粒径和电位为质量检测指标，经过混合、超声处理、低压蒸发、真空蒸发、再次超声、加冻干保护剂和冷冻干燥的方法制成脂质体，该方法结合了逆向蒸发法，超声波法和冷冻干燥法，最终得到包封率达到45.43％以上，粒径达到531.2mm以下，电位达到-19.8mV以下的脂质体，本发明专利技术使用的原料成本低廉，设计的工艺路线简便，方法创新，为大豆抗氧化肽的综合利用开辟一条新的途径。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农产品加工
，具体涉及。
技术介绍
大豆肽具有很多生理功能，其中抗氧化功能显著。大豆肽的生理功能包括降血压，降血脂，降胆固醇，促进能量代谢，恢复疲劳，增强肌肉，抗过敏，免疫，抗氧化等等。机体内自由基过量可导致各种疾病，比如肺气肿、眼部疾病、关节疾病、动脉粥样硬化等心脏疾病和糖尿病等，对身体造成严重伤害。大豆蛋白酶解物中存在许多活性物质，包括活性肽和被激活的组氨酸、酪氨酸等。这些活性物质可改善人体消化、吸收功能，能阻止机体内自由基的大量形成，清除大量自由基，达到消除机体内多种生理功能障碍的作用，抗衰老，并且预防老年疾病的发生。大豆源抗氧化肽虽然具有很好的功能，但在应用过程中存在吸湿的问题。肽在常温下放置会吸湿，从而导致粘度增大，放置时间继续延长还会导致微生物的滋长，这些过程严重阻碍了大豆抗氧化肽在生物、食品、化学、医药等发面的应用。目前保护方法有很多，比如添加保护剂，探宄与其他功能因子的协同作用，但这类方法操作复杂，因此简便快捷并能很好的使大豆抗氧化肽发挥其功能作用的产品亟待开发出来。近几年来，脂质体技术应用作为多肽、蛋白质药物的有效载体上受到广泛的关注。脂质体技术是将水溶性或脂溶性的功能物质包封在脂质体的水层或脂膜内的一种方法。脂质体以其高度的生物靶向性、长效缓释性和低毒性引起了人们的广泛关注。脂质体有以下优点:可以在其内水相包封水溶性药物，也可以在外层双层膜包封脂溶性药物，它和天然生物膜有很好的生物相溶性，安全性可靠。由于其对人体无害、无免疫原性反应，能有效保护被包封物质，提高生物利用率，使被包封物质具有靶向作用，能减少被包封物质用量。脂质体的制备方法有很多，比如冻融法、前脂质体法、硫酸铵梯度远程加载方法、pH梯度法、逆向蒸发法、冷冻干燥法、超声波分散法等。包封率是衡量脂质体质量的主要指标，粒径和电位也是衡量脂质体质量的指标之一。测定包封率的主要的方法有凝胶色谱法，离心法，透析法，荧光淬灭反应法，电子自旋共振光谱法等。脂质体包封率测定有两种应用原理，一种是将游离药物与脂质体分离方法，包括离心法和透析法等，一种是不将游离药物与脂质体分离而直接分析测定方法，包括荧光淬灭反应法、电子自旋共振光谱法等。本专利采用了简便快捷的评价指标和评价方法，采用超速离心方法测定包封率，采用纳米粒径仪测定脂质体粒径和电位。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种大豆源抗氧化肽纳米脂质体，是利用超声波法、逆向蒸发法和冷冻干燥法结合的方法制备而成。一种大豆源抗氧化肽纳米脂质体的制备方法，包括如下步骤:I)以3?1kDa的大豆抗氧化肽为原料，称取15?45mg大豆抗氧化肽，于室温下溶于PH值为6?8、浓度0.05?0.5M的磷酸盐缓冲溶液中，获得水相体系；再称取质量比为2:1?8:1的磷脂和胆固醇，将两者置于圆底烧瓶中在室温下溶解于乙醚中，并在瓶口塞上棉花，获得脂相体系，溶解后放置于-10°C?-4°C环境中备用；在通风橱中，将医用针头放置在2mL的注射器上，迅速吸取水相注射到脂相中，脂相:水相体积比为1:1?5:1 ;2)将上述混合物在功率为500?700W，-10°C?_4°C条件下超声6min?lOmin，使其形成稳定的W/0型乳剂，将混合相转移至10mL旋干瓶中备用；3)将上述混合相在40?60°C下低压旋转蒸发9?20min使其成膜，形成悬池液；4)再加入水相体积一半的磷酸盐缓冲溶液，真空旋转蒸发30?50min，除尽脂相乙醚，两相水化成均匀溶液；5)将混合液在室温下再次超声O?lmin，功率为300W，形成更加均匀的溶液；6)用移液枪吸取上述溶液至1mL西林瓶中，并加入10%?15%甘露醇溶液，使保护剂体积与脂质体溶液比为1:4，西林瓶在-70°C?-80°C下放置9?15h，在-50°C?-60°C下真空冷冻干燥24?30h，获得脂质体干粉；进一步地，所述的水相溶液是由NaH2POjP Na 2ΗΡ04配制而成，pH值为6?8，浓度0.05 ?0.5M。本专利技术的技术优势主要体现在以下四个方面:第一，本专利技术的原料创新，是以3?1kDa的大豆抗氧化肽为原料，结合了超声波法，逆向蒸发法和冷冻干燥法，最终得到包封率达到45.43%以上，粒径达到531.2nm以下，电位达到-19.8mV以下的脂质体；第二，原料成本低廉，是以3?1kDa的大豆源抗氧化肽组分为原料，符合大豆天然、高附加值产品开发的主题。而且本专利技术设计的工艺路线简便，方法创新，可进行工业化推广，是一种新型的大豆抗氧化肽产品。第三，本专利技术的核心技术方法不仅包含逆向蒸发法，还结合了超声波法和冷冻干燥法，综上所述，纵观国内外相关研宄与技术报道，未见将3?1kDa大豆抗氧化肽制成脂质体的报道，而且也未见结合了超声波法，逆向蒸发法和冷冻干燥法的脂质体制作方法。并且最终获得包封率达到45.43%以上，粒径达到531.2nm以下，电位达到-19.8mV以下的脂质体。【具体实施方式】实施例1:一种大豆源抗氧化肽纳米脂质体的制备方法，包括如下步骤:以3?1kDa的大豆抗氧化肽为原料，准确称取15mg大豆抗氧化肽，于室温下溶于PH值为6，浓度0.05M的PBS缓冲溶液中，获得水相体系。再称取质量比为2:1的磷脂和胆固醇，将两者置于圆底烧瓶中在室温下溶解于乙醚中，并在瓶口塞上棉花，获得脂相体系，溶解后放置于-10°C环境中备用。在通风橱中，将医用针头放置在2mL的注射器上，迅速吸取水相注射到脂相中，脂相:水相体积比为5:1。采用超声波细胞粉碎仪器处理混合相，功率为700W，-10°C超声6min，使其形成稳定的W/Ο型乳剂。将混合相转移至10mL旋干瓶中，在40°C下低压旋转蒸发9min使其成膜形成悬池液，再加入水相体积一半的PBS溶液，于同温度下，真空旋转蒸发50min，除尽脂相乙醚，将混合液在室温下再次短时超声lmin，功率为300W，形成均匀溶液。用移液枪吸取溶液至1mL西林瓶中。并加入10%甘露醇溶液，使保护剂体积与脂质体溶液比为1:4。西林瓶在_80°C下放置9h，在_50°C下真空冷冻干燥24h，获得脂质体干粉。其中，所述的水相溶液是由NaH2POdP Na 2ΗΡ04配制而成，pH值为6，浓度0.05M。将脂质体冻干粉用0.05M PBS溶液复溶，取lmL，稀释10倍，用移液枪吸取0.8mL稀释溶液，置于纳米粒径检测仪专用比色皿中，运行仪器，测定脂质体粒径。取1.2mL脂质体，稀释34倍，用移液枪吸取1.3mL稀释溶液，置于仪器专用电位槽中，运行仪器，测定脂质体电位。相关参数设定:Material设定为Protein，Measurement time设定为120s，Dispersant name 设定为 PBS，Dispersant RI 设定为 1.330，Temperature 设定为 25°C。取ImL脂质体，至于离心管中，超速离心，转速设定为8 X 103rpm，于0°C离心20min。取上清液稀释15倍，移取稀释溶液至平底96孔细胞培养板中，室温下用酶标仪在260nm处测定吸光度值，通过公式计算包封率。最终脂质体包封率达到45.43%以上，粒径达到531.2nm以下，电位达到-19.8mV以下。包封率测试:取ImL上述脂质本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种大豆源抗氧化肽纳米脂质体，其特征在于，利用超声波法、逆向蒸发法和冷冻干燥法结合的方法制备而成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：林松毅，杨睿雯，段浏嘉，黄延军，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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