硫酸长春新碱脂质体及制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种硫酸长春新碱脂质体及其制备方法，该硫酸长春新碱脂质体由硫酸长春新碱以及使用鞘磷脂制备的纳米脂质体组成，其中所述硫酸长春新碱包裹在所述纳米脂质体中。本发明专利技术使用鞘磷脂来制备纳米脂质体，并包裹硫酸长春新碱后制得硫酸长春新碱脂质体，其中鞘磷脂含有较多的酰胺键能够更好地抵抗化学和生物的降解，保护脂质体结构的稳定，提高肿瘤细胞的药物富集量，从而提高抗肿瘤效果。

Vincristine sulfate liposome and preparation method and application thereof

The present invention relates to vincristine sulfate liposome and its preparation method, the vincristine sulfate liposome by vincristine sulfate and sphingomyelin prepared nano liposome composition, wherein the vincristine sulfate wrapped in the nano liposomes. The invention uses sphingomyelin to prepare nano liposome, and encapsulated vincristine sulfate prepared after vincristine sulfate liposomes, wherein the amide bond contains more sphingomyelin can better resist degradation of chemical and biological protection, the structure of the liposome stability, enhancing drug accumulation in tumor cells, thereby enhancing the antitumor effect.

【技术实现步骤摘要】
硫酸长春新碱脂质体及制备方法和应用
本专利技术涉及用于癌症的给药系统，更具体地说，涉及一种硫酸长春新碱脂质体及制备方法和应用。
技术介绍
硫酸长春新碱(vincristinesulfate，VCR)是夹竹桃科植物长春花生物碱类的细胞周期特异性抗肿瘤药物，抗肿瘤作用靶点是微管，主要抑制微管蛋白的聚合而影响纺锤体微管的形成，使有丝分裂停止于中期。和其它长春花生物碱类一样，VCR对于许多淋巴组织的恶性肿瘤，包括侵袭性非霍奇金淋巴瘤和急性淋巴细胞白血病，有着很好的治疗效果。临床主要应用于急性白血病、恶性淋巴瘤、神经母细胞瘤、慢性淋巴细胞白血病等疾病的治疗。虽然VCR抗肿瘤效果好，但VCR制剂体内代谢迅速、半衰期短、神经毒性大、胃肠道反应和骨髓抑制作用严重，VCR在临床上的应用受到限制。因此，迫切需要研发新型靶向药物制剂，降低VCR的毒副作用、提高白血病的治疗效果。脂质体(Liposome)，由磷脂或其他类脂化合物形成的具有双分子层结构的封闭囊泡，是一种性质稳定、在血液循环中具有长效半衰期的非病毒载体。将抗肿瘤药物包封在脂质体中，不仅可以保护药物在进入病灶部位前免受机体酶的分解，延长药物循环时间，增加药物在病灶部位的浓度和作用时间，提高疗效，降低毒性；而且和其它传递系统相比，脂质体能够提供优越的生物相溶性、生物可降解性、低毒性、尺寸可控性及表面功能可修饰性。虽然硫酸长春新碱的脂质体制剂传递药物的高效性，降低了硫酸长春新碱的毒副作用，增强了癌症的治疗效果。但是以传统的卵磷脂、胆固醇制备的常规脂质体在体内多被网状内皮系统(reticuloendothelialsystem，RES)吞噬，在血液循环中驻留时间较短，并且其物理化学稳定性差，储存和应用过程中容易发生融合聚集，包封药物容易泄漏，难以抵抗体内的化学和生物的降解，因而也不适于制备尺寸较小的纳米颗粒。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于，针对常规磷脂制备的硫酸长春新碱脂质体稳定性不高的缺陷，提供一种使用鞘磷脂制备的硫酸长春新碱脂质体及制备方法和应用。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：构造一种硫酸长春新碱脂质体，由硫酸长春新碱以及使用鞘磷脂制备的纳米脂质体组成，其中所述硫酸长春新碱包裹在所述纳米脂质体中。在根据本专利技术所述的硫酸长春新碱脂质体中，所述使用鞘磷脂制备的纳米脂质体包括鞘磷脂、磷脂稳定剂和胆固醇类成分；其中，所述磷脂稳定剂选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇和磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇中的一种或多种。在根据本专利技术所述的硫酸长春新碱脂质体中，所述硫酸长春新碱脂质体的粒径为100-120nm。在根据本专利技术所述的硫酸长春新碱脂质体中，所述硫酸长春新碱脂质体还包括通过化学键连接在所述纳米脂质体上用于特异识别肿瘤细胞的核酸适配体；所述核酸适配体为sgc8、A10、S2.2、AS1411或TLS11a。在根据本专利技术所述的硫酸长春新碱脂质体中，优选地，所述核酸适配体为sgc8，使用鞘磷脂制备的纳米脂质体包括以下成分：鞘磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺交联物。本专利技术还提供了一种硫酸长春新碱脂质体的制备方法，该制备方法包括：S1、将鞘磷脂、胆固醇类成分和磷脂稳定剂按摩尔比为50-60：35-45：4-6溶解在有机溶剂中制备空白脂质体；S2、使用步骤S1的空白脂质体制备包裹硫酸长春新碱的脂质体；S3、将核酸适配体连接至包裹硫酸长春新碱的脂质体上，制备硫酸长春新碱脂质体。在根据本专利技术所述的硫酸长春新碱脂质体的制备方法中，所述步骤S1具体为：将鞘磷脂成分、胆固醇类成分和磷脂稳定剂按摩尔比为50-60：35-45：4-6溶解在氯仿中的混合，在50-70℃下以转速为100-200rpm/min旋转并抽真空形成干燥的脂质薄膜，去除有机溶剂；所述脂质薄膜分散在枸橼酸缓冲液中，在液氮和50-60℃水浴反复冻融多次，并经过粒径筛选后得到空白脂质体。在根据本专利技术所述的硫酸长春新碱脂质体的制备方法中，所述步骤S1中将鞘磷脂、胆固醇类成分、磷脂稳定剂和功能性磷脂按摩尔比为50-60：35-45：4-5：0.2-0.4溶解在有机溶剂中制备空白脂质体；且所述方法还包括：S3、在步骤S2制备的硫酸长春新碱脂质体的溶液中按照核酸适配体sgc8和功能性磷脂的摩尔比为1：5-1：10加入核酸适配体sgc8，氮气保护环境下室温反应，并透析洗涤多余的功能性磷脂、硫酸长春新碱和核酸适配体sgc8，得到连接核酸适配体sgc8的硫酸长春新碱脂质体。本专利技术还提供了一种治疗和/或预防肿瘤药物，该治疗和/或预防肿瘤药物的活性成分为如前所述的硫酸长春新碱脂质体。本专利技术还提供了如前所述的硫酸长春新碱脂质体在治疗和/或预防肿瘤中的应用。实施本专利技术的硫酸长春新碱脂质体及制备方法和应用，具有以下有益效果：本专利技术使用鞘磷脂来制备纳米脂质体，并包裹硫酸长春新碱得到硫酸长春新碱脂质体，其中鞘磷脂含有较多的酰胺键能够更好地抵抗化学和生物的降解，保护脂质体结构的稳定，提高肿瘤细胞的药物富集量，从而提高抗肿瘤效果。附图说明下面将结合附图及实施例对本专利技术作进一步说明，附图中：图1为根据本专利技术优选实施例的硫酸长春新碱脂质体的制备方法图；图2为根据本专利技术优选实施例的硫酸长春新碱脂质体的结构示意图；图3A-C分别为根据本专利技术优选实施例的硫酸长春新碱脂质体各个阶段颗粒的透射电镜图；图4为根据本专利技术优选实施例的硫酸长春新碱脂质体各个阶段颗粒的粒径分布图；图5为CEM细胞与sgc8/VCR-Lipo和VCR-Lipo的结合实验图；图6为荷瘤小鼠在不同的存活率时距接种肿瘤的时间图；图7为不同处理的荷瘤BalB/c裸鼠的肿瘤大小图；图8为硫酸长春新碱脂质体的体内靶向作用图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。本专利技术提供了一种硫酸长春新碱脂质体，由硫酸长春新碱以及使用鞘磷脂制备的纳米脂质体组成，其中硫酸长春新碱包裹在纳米脂质体中。本专利技术中主要用鞘磷脂制备纳米脂质体，其成分包括鞘磷脂、磷脂稳定剂和胆固醇类成分。其中鞘磷脂作为一种磷脂，与胆固醇类成分一起共同构成脂质体的基础物质。该胆固醇类成分选自胆固醇及其衍生物、胆甾烷、胆酸和胆汁酸中的一种或多种。胆固醇类成分具有调节膜流动性的作用，因此被称为脂质体的“流动性缓冲剂”。磷脂主要由一个磷酸基团和一个季铵盐基团组成的亲水性基团，以及由两个较长的烃基组成的亲脂性基团。使用的磷脂类可以是天然磷脂，也可以是合成磷脂。天然磷脂主要以卵磷脂，又名磷脂酰胆碱(PC)为主，主要来源于蛋黄磷脂和大豆磷脂，显中性。合成磷脂主要有二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)等，这些均属氢化磷脂类。本专利技术中选用鞘磷脂(sphingomyelin)来替代常规的磷脂，这是因为鞘磷脂含有较多的酰胺键连接的脂肪链，能更好地抵抗化学和生物的降解，保护脂质体结构的稳定。前述磷脂稳定剂也称为mPEG化磷脂或mPEG磷脂，其加入可使由鞘磷脂和胆固醇类成分构成的普通脂质体成为空间稳运脂质体、隐形脂质体或长循环本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种硫酸长春新碱脂质体，其特征在于，由硫酸长春新碱以及使用鞘磷脂制备的纳米脂质体组成，其中所述硫酸长春新碱包裹在所述纳米脂质体中。

【技术特征摘要】
1.一种硫酸长春新碱脂质体，其特征在于，由硫酸长春新碱以及使用鞘磷脂制备的纳米脂质体组成，其中所述硫酸长春新碱包裹在所述纳米脂质体中。2.根据权利要求1所述的硫酸长春新碱脂质体，其特征在于，所述使用鞘磷脂制备的纳米脂质体包括鞘磷脂、磷脂稳定剂和胆固醇类成分；其中，所述磷脂稳定剂选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇和磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇中的一种或多种；所述胆固醇类成分选自胆固醇及其衍生物、胆甾烷、胆酸和胆汁酸中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的硫酸长春新碱脂质体，其特征在于，所述硫酸长春新碱脂质体的粒径为100-120nm。4.根据权利要求1所述的硫酸长春新碱脂质体，其特征在于，所述硫酸长春新碱脂质体还包括通过化学键连接在所述纳米脂质体上用于特异识别肿瘤细胞的核酸适配体；所述核酸适配体为sgc8、A10、S2.2、AS1411或TLS11a。5.根据权利要求4所述的硫酸长春新碱脂质体，其特征在于，所述核酸适配体为sgc8，使用鞘磷脂制备的纳米脂质体包括以下成分：鞘磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺交联物。6.一种硫酸长春新碱脂质体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：S1、将鞘磷脂、胆固醇类成分和磷脂稳定剂按摩尔比为50-60：35-45：4-6溶解在有机溶剂中制...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵永祥，卢小玲，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：广西,45