一种免疫脂质体及其制备方法和应用技术

技术编号:15753480 阅读:278 留言:0更新日期:2017-07-04 22:44
本发明专利技术涉及药物领域,具体涉及一种免疫脂质体及其制备方法和应用,特别涉及一种伊立替康脂免疫嵌合西妥昔单抗的免疫脂质体及其制备方法和应用,所述方法将西妥昔单抗进行处理,得到具有单价活性的Fab片段,将盐酸伊立替康复合磷脂组合物与修饰材料混合,再将混合物与具有单价活性的Fab片段混合得到所述免疫脂质体。本发明专利技术免疫脂质体中的盐酸伊立替康复合磷脂组合物和西妥昔单抗联合作用,具有协同效果,可针对转移性结肠癌具有治疗效果,具有临床适应性,大大增强了所述免疫脂质体在临床上的应用,便于后期大范围推广使用;本发明专利技术免疫脂质体的制备工艺简单,制备方法成熟,质量可控,适合工业化生产。

Immune liposome and preparation method and application thereof

The present invention relates to the field of medicine, in particular to a kind of immune liposome and preparation method and application thereof, in particular to a irinotecan lipid immune chimeric cetuximab immune liposome and its preparation method and the application of the method of cetuximab treatment, get out at the activity of the Fab fragment, the irinotecan hydrochloride phospholipid composition and modification of material mixing, then Fab fragment mixture with unit activity to obtain the immune liposome. The invention of immune liposome in irinotecan hydrochloride phospholipid composition and cetuximab combined effect, synergistic effect, for metastatic colorectal cancer with clinical therapeutic effect, has greatly enhanced the adaptability, the application of immune liposome in clinic, to promote the use of a wide range of late; the invention of immune the liposome preparation process is simple, mature preparation methods, quality control, suitable for industrialized production.

【技术实现步骤摘要】
一种免疫脂质体及其制备方法和应用
本专利技术涉及药物领域,具体涉及一种免疫脂质体及其制备方法和应用,特别涉及一种伊立替康脂免疫嵌合西妥昔单抗的免疫脂质体及其制备方法和应用。
技术介绍
盐酸伊立替康(1rinotecan,CPT-11)是半合成水溶性喜树碱衍生物,是DNA拓扑异构酶I(TopoI)的抑制剂。伊立替康与其活性代谢产物SN-38通过与DNA-Topo-1复合体的稳定结合引起DNA单链的断裂,使DNA产生不可逆的损伤而死亡。伊立替康是治疗转移性结直肠癌的有效药物,对氟尿嘧啶耐药病例仍有效,而且具有很广的抗肿瘤谱。I期、Ⅱ期临床研究结果表明,该药对化疗抗拒性肿瘤,如非小细胞肺癌、卵巢癌和宫颈癌有肯定疗效;另外它对胃癌、恶性淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、乳腺癌、小细胞肺癌、皮肤癌、胰腺癌也有一定疗效。CN104906586A中公开了一种盐酸伊立替康复合磷脂组合物、制备方法及其在制备治疗肿瘤或耐药性肿瘤药物中的用途。所述复合磷脂组合物包含盐酸伊立替康、复合磷脂、胆固醇、长循环膜材、表面活性剂、缓冲介质。该组合物针对抗耐药性肿瘤,治疗小细胞肺癌和胰腺癌,但其临床适应性有待提高。西妥昔单抗属于嵌合型IgG1单克隆抗体,分子靶点为表皮生长因子受体(EGFR)。可与表达于正常细胞和多种癌细胞表面的EGF受体特异性结合,并竞争性阻断EGF和其他配体,如α转化生长因子(TGF-α)的结合。本品是针对EGF受体的IgG1单克隆抗体,两者特异性结合后,通过对与EGF受体结合的酪氨酸激酶(TK)的抑制作用,阻断细胞内信号转导途径,从而抑制癌细胞的增殖,诱导癌细胞的凋亡,减少基质金属蛋白酶和血管内皮生长因子的产生。临床上通常使用西妥昔单抗与伊立替康(irinotecan)联用于表皮生长因子(EGF)受体过度表达的,以伊立替康为基础的化疗方案耐药的转移性直肠癌的治疗。因此开发一种同时包含西妥昔单抗与伊立替康的尤为重要,更大的方便临床上的使用,增强药物靶向的协同性非常有效。
技术实现思路
针对现有技术的不足,本专利技术的目的在于提供一种免疫脂质体及其制备方法和应用,所述免疫脂质体可以发挥盐酸伊立替康复合磷脂组合物和西妥昔单抗联合治疗转移结肠癌,具有协同作用。为达到此专利技术的目的,本专利技术采用以下技术方案:第一方面,本专利技术提供一种免疫脂质体的制备方法,包括如下步骤:(1)用酶处理西妥昔单抗,得到Fab片段;(2)将Fab片段与还原剂反应,得到具有单价活性的Fab片段;(3)将盐酸伊立替康复合磷脂组合物与修饰材料混合,得到具有活化基团的盐酸伊立替康复合磷脂组合物;(4)将步骤(3)得到的具有活化基团的盐酸伊立替康复合磷脂组合物与步骤(2)得到的具有单价活性的Fab片段混合后反应,得到所述免疫脂质体。本专利技术中,盐酸伊立替康复合磷脂组合物已在CN104906586A中公开,本专利技术采用该专利中的盐酸伊立替康复合磷脂组合物,本领域技术人员可以根据CN104906586A中公开的制备方法制备所述盐酸伊立替康复合磷脂组合物。本专利技术中,所述Fab单价活性指的是Fab片段是一个含有铰链区、一条完整的轻链及重链的VH和CH1区,可特异性结合一分子的抗原,因此称为单价抗体,而单价活性指的是获得的Fab单价抗体具有活性。本专利技术中,将盐酸伊立替康复合磷脂组合物与西妥昔单抗单纯的联用可以起到联合治疗的效果,但是也会产生许多不良反应诸如增加手足综合症、过敏反应等,而本申请将其作成免疫脂质体后靶向效果更明显,被动靶向和主动靶向效应的叠加,可直接作用于靶器官,而不会在其他非靶器官过多停留。根据本专利技术,步骤(1)所述的酶为木瓜蛋白酶和/或胃蛋白酶,优选为木瓜蛋白酶。根据本专利技术,所述酶与西妥昔单抗的质量比为(1-80):1000,例如可以是1:1000、2:1000、3:1000、5:1000、6:1000、8:1000、10:1000、12:1000、15:1000、18:1000、20:1000、22:1000、25:1000、28:1000、30:1000、32:1000、35:1000、38:1000、40:1000、42:1000、45:1000或50:1000,优选为(1-50):1000,以及上述数值之间的具体点值,限于篇幅及出于简明的考虑,本专利技术不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。根据本专利技术,所述酶处理西妥昔单抗的pH可根据酶的参考说明书进行调整,不同公司的酶反应pH会有差别,本领域技术人员可以根据选择酶的参考说明书进行调整,本申请选用PIERECE公司的酶,其反应的pH为5-7,例如可以是5、5.5、6、6.5或7,以及上述数值之间的具体点值,限于篇幅及出于简明的考虑,本专利技术不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。根据本专利技术,步骤(2)所述的还原剂为含有活性巯基的类似化合物,本申请选用2-巯基乙胺·盐酸。根据本专利技术,步骤(3)所述的修饰材料为活化磷脂,活化磷脂是链接Fab片段的关键所在,因为活化磷脂上有具有活性的MAL键,可以与Fab上的SH键发生化学反应。根据本专利技术,所述活化磷脂为DSPE-PEG-MAIL(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺)、DMPE-PEG-MAIL(双肉豆蔻磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯)、DPPE-PEG-MAIL(二棕榈酸磷脂酰乙酸胺-聚乙二醇-活性酯)、POPE-PEG-MAIL(1-棕榈酰基-2-油酰基基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯)或DOPE-PEG-MAIL(二油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯)中的任意一种或至少两种的组合,所述组合例如可以是DSPE-PEG-MAIL和DMPE-PEG-MAIL,DSPE-PEG-MAIL和DPPE-PEG-MAIL,DMPE-PEG-MAIL和DPPE-PEG-MAIL,POPE-PEG-MAIL和DOPE-PEG-MAIL,DSPE-PEG-MAIL、DMPE-PEG-MAIL和DPPE-PEG-MAIL,DMPE-PEG-MAIL、DPPE-PEG-MAIL和POPE-PEG-MAIL,DPPE-PEG-MAIL、POPE-PEG-MAIL和DOPE-PEG-MAIL。根据本专利技术,所述活化磷脂中的聚乙二醇的分子量太大容易配巨噬细胞吞噬,分子量太小起不到修饰的作用,本申请聚乙二醇的分子量为1000-5000,例如可以是1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500或5000,优选为2000-5000,以及上述数值之间的具体点值,限于篇幅及出于简明的考虑,本专利技术不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。根据本专利技术,步骤(4)所述反应的温度为20-30℃,例如可以是20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃,以及上述数值之间的具体点值,限于篇幅及出于简明的考虑,本专利技术不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。优选地,步骤(4)所述反应的时间为0-5小时且不包括0点,例如可以是0.1小时、0.2小时、0.5小时、0.6小时、0.8小时、1小时、1.2小时、1.5小时、1.8小时、2小时、2.2小时、2.5小时、2.8小时、3小时、3.2小时、3.5小时、3.8小时、4小时、4.2小时、4.5小时、4.8小时本文档来自技高网
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一种免疫脂质体及其制备方法和应用

【技术保护点】
一种免疫脂质体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)用酶处理西妥昔单抗,得到Fab片段;(2)将Fab片段与还原剂反应,得到具有单价活性的Fab片段;(3)将盐酸伊立替康复合磷脂组合物与修饰材料混合,得到具有活化基团的盐酸伊立替康复合磷脂组合物;(4)将步骤(3)得到的具有活化基团的盐酸伊立替康复合磷脂组合物与步骤(2)得到的具有单价活性的Fab片段混合后反应,得到所述免疫脂质体。

【技术特征摘要】
1.一种免疫脂质体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)用酶处理西妥昔单抗,得到Fab片段;(2)将Fab片段与还原剂反应,得到具有单价活性的Fab片段;(3)将盐酸伊立替康复合磷脂组合物与修饰材料混合,得到具有活化基团的盐酸伊立替康复合磷脂组合物;(4)将步骤(3)得到的具有活化基团的盐酸伊立替康复合磷脂组合物与步骤(2)得到的具有单价活性的Fab片段混合后反应,得到所述免疫脂质体。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述的酶为木瓜蛋白酶和/或胃蛋白酶,优选为木瓜蛋白酶;优选地,所述酶与西妥昔单抗的质量比为(1-80):1000,优选为(1-50):1000;优选地,所述酶处理西妥昔单抗的pH为5-7;优选地,步骤(2)所述的还原剂为2-巯基乙胺·盐酸。3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述的修饰材料为活化磷脂;优选地,所述活化磷脂为DSPE-PEG-MAIL、DMPE-PEG-MAIL、DPPE-PEG-MAIL、POPE-PEG-MAIL或DOPE-PEG-MAIL中的任意一种或至少两种的组合;优选地,所述活化磷脂中的聚乙二醇的分子量为1000-5000,优选为2000-5000;优选地,步骤(4)所述反应的温度为20-30℃;优选地,步骤(4)所述反应的时间为0-5小时且不包括0点。4.一种如权利要求1-3中任一项所述的制备方法制备得到的伊立替康脂免疫嵌合西妥昔单抗的免疫脂质体。5.一种免疫脂质体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1’)用酶处理西妥昔单抗,得到Fa...

【专利技术属性】
技术研发人员:邱永锋杨君周雪付爱玲
申请(专利权)人:上海景峰制药有限公司
类型:发明
国别省市:上海,31

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