一种花色苷脂质体冻干粉及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种新型花色苷脂质体冻干粉，采用甘露糖赤藓糖醇脂或者甘露糖赤藓糖醇脂/磷脂混合物为壁材制备所得，具体制备方法包括以下步骤：(1)将甘露糖赤藓糖醇脂溶于有机溶剂中得到溶液甲；(2)将花色苷溶解在溶剂中得到溶液乙；(3)将步骤(1)得到的甲溶液和步骤(2)得到的乙溶液混匀，超声处理后静置平衡，然后置于旋转蒸发仪中减压蒸发得到脂质膜；(4)向步骤(3)所得脂质膜中加入磷酸盐缓冲液，搅拌溶解后膜过滤，得到脂质体悬液；(5)向步骤(4)所得脂质体悬液中加入冻干保护剂，经冷冻干燥即可。本发明专利技术制备所得花色苷脂质体稳定性好；制备方法简单、成本低；丰富了脂质体的制备壁材，可应用于食品和化妆品领域。

Anthocyanin liposome freeze-dried powder and preparation method thereof

The invention discloses a novel anthocyanin liposome lyophilized powder, using mannosylerythritol lipid or mannosylerythritol lipid / phospholipid mixtures as wall material prepared, the preparation method comprises the following steps: (1) the mannosylerythritol lipid soluble in organic solvent to obtain a solution; (2) the anthocyanin solution dissolved in solvent B; (3) the step (1) and a solution obtained in step (2) B solution mixing, ultrasonic treatment after the static balance, and then placed in a vacuum rotary evaporation apparatus in evaporation by lipid membrane; (4) to step (3) adding phosphate buffer the lipid membrane, stirring to dissolve after membrane filtration, by liposome suspension; (5) to step (4) of the liposome suspension with cryoprotector, by freezing drying. The anthocyanin liposome prepared by the invention has good stability, simple preparation method and low cost, and enriches the preparation of wall material of liposome, and can be applied in the field of food and cosmetics.

【技术实现步骤摘要】
一种花色苷脂质体冻干粉及其制备方法
本专利技术属于生物
，特别是涉及一种新型花色苷脂质体冻干粉及其制备方法。
技术介绍
花色苷是一种安全、无毒的天然食用色素，其来源丰富，且具有很高的营养和药理价值，在食品、化妆品和医药领域有着巨大应用潜力。但是由于花色苷稳定性较差、易降解、生物利用度低，限制了其广泛应用。近年来，花色苷的稳态技术，尤其是脂质体制备技术成为了该领域的研究热点。通过将花色苷包埋在脂质体中，既能在空间上防止花色苷与水分子接触失活，也能稳定花色苷的生物活性，改善花色苷的释放速度，增加其生物可利用度。中国专利技术专利(申请号：CN201210177952.1)公开了一种花色苷提取物脂质体及其制备方法，其利用类脂作为载运体系；中国专利技术专利(申请号：CN201610054330.8)公开了一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法，其采用大豆卵磷脂和胆固醇作为壁材，制得杨梅花色苷脂质体悬液。中国专利技术专利(申请号：CN201310413928.8)公开了一种花青素脂质体的制备方法，该方法采用了pH梯度结合逆向蒸发的方法，利用磷脂和胆固醇作为脂质体壁材，获得花青素脂质体。由此可见，现在制备脂质体采用天然磷脂与胆固醇按照一定比例复配为壁材，但是所得脂质体性质不稳定、生物利用度低，且壁材种类单一。
技术实现思路
本专利技术提供了一种新型的花色苷脂质体冻干粉的制备方法。本专利技术还并提供了根据上述制备方法制备所得的新型花色苷脂质体冻干粉。本专利技术所述的一种花色苷脂质体冻干粉的制备方法，包括以下步骤：(1)将甘露糖赤藓糖醇脂溶于第一溶剂中得到溶液甲；(2)将花色苷溶解在第二溶剂中得到溶液乙；(3)将步骤(1)得到的甲溶液和步骤(2)得到的乙溶液混匀，超声处理后静置，然后置于旋转蒸发仪中减压蒸发得到脂质膜；(4)向步骤(3)所得脂质膜中加入磷酸盐缓冲液，搅拌溶解后膜过滤，得到脂质体悬液；(5)向步骤(4)所得脂质体悬液中加入冻干保护剂，经真空冷冻干燥即可。步骤(1)中，所述甘露糖赤藓糖醇脂是由Ustligomaydis或Pseudazyma属菌株发酵合成，再经分离纯化得到，纯度为95％以上。具体合成步骤如下：菌种PseudozymaaphidisDSMZ70725购买于德国微生物菌种保藏中心(DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturen)；Ustligomaydis(编号5.203)购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心(ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollectionCenter,CGMCC)。将上述购买的菌株之一转接于斜面培养基(3.0g/L酵母提取物，3.0g/L麦芽提取物，5.0g/L蛋白胨，10.0g/L葡萄糖，15.0g/L琼脂，蒸馏水)中，28℃下活化2d，然后将其转接到液体培养基(4.0g/L葡萄糖，3.0g/LNaNO3，0.3g/LMgSO4·7H2O，0.3g/LKH2PO4，1.0g/L酵母提取物，蒸馏水，pH6.0)中，于28℃、220rpm条件下培养3d。将培养好的种子液接入发酵培养基(85mL/L大豆油，3.0g/LNaNO3，0.3g/LMgSO4·7H2O，0.3g/LKH2PO4，1.0g/L酵母提取物，蒸馏水)中，于28℃、220rpm条件下培养6d。将发酵产物用乙酸乙酯萃取，离心，上清旋转蒸发去除有机试剂，获得甘露糖赤藓糖醇脂粗产物。采用硅胶柱层析纯化产物，首先将玻璃层析柱(3×40cm)洗净烘干，并用氯仿润湿。用200～300目硅胶湿法装柱，静置12h平衡，保证硅胶柱内无气泡。将粗产物1.0g溶于3mL氯仿，上样。用600mL有机溶剂氯仿:丙酮＝7:3洗脱得到组分，控制洗脱速率为0.8mL/min。洗脱的组分旋转蒸发去除有机试剂，得到MEL-A。步骤(1)中，将甘露糖赤藓糖醇脂(MEL-A)溶于第一溶剂中得到溶液甲，其中，所述第一溶剂为正己烷、氯仿或乙醚，配制所得溶液甲的浓度为15.0～20.0mg/L。优选的，配制所得溶液甲的浓度为15.0～17.5mg/L。优选的，步骤(1)中，使用甘露糖赤藓糖醇脂和磷脂混合物替换甘露糖赤藓糖醇脂。进一步的，将甘露糖赤藓糖醇脂和磷脂按照1～4:1的质量比混合溶于第一溶剂中，配制所得溶液甲的浓度为15.0～25.0mg/L。其中，所述磷脂为二月桂酰基卵磷脂或大豆卵磷脂。进一步优选的，甘露糖赤藓糖醇脂和磷脂的质量比为1～3:1。步骤(2)中，所述的第二溶剂为蒸馏水或磷酸盐缓冲液，配制所得溶液乙的浓度为100.0～800.0mg/L。其中，所述磷酸盐缓冲液pH为3.0～5.0、离子浓度为0.05～0.1M。步骤(2)中，所述花色苷从富含花色苷的植物花、茎、叶、果实等原料中提取分离纯化得到，具体步骤为：按照每100g原料，加入440mL浓度为50％的柠檬酸酸化乙醇(pH3.0)，在40℃水浴中避光超声浸提60min。提取结束后，在4000rmp离心，上清液旋转蒸发浓缩为花色苷粗提液。在25℃条件下，将花色苷粗提液在AB-8型树脂吸附平衡5h，解吸平衡时间为4h，用75％乙醇溶液解吸。上样速率为2.0mL/min，上样体积为500mL粗提液，用3倍柱床体积的75％乙醇，以1.0mL/min洗脱速率洗脱。将洗脱液旋转蒸发浓缩，得到花色苷。步骤(2)中，所述花色苷也可以直接购买获取，CAS：7084-84-4，6906-38-3，18466-51-8。步骤(3)中，将步骤(1)得到的甲溶液和步骤(2)得到的乙溶液按照体积比1～5:1混匀。优选的，所述甲、乙溶液体积比，优选为2～4:1。步骤(3)中，超声处理温度为30～40℃，时间为5～10min，超声功率为100～300W，静置15～20min。步骤(3)中，旋转蒸发仪的真空度为0.001～0.1MPa，转速为10～120rpm，温度为35～55℃。步骤(4)中，向步骤(3)所得脂质膜中加pH5.0～7.0、离子浓度为0.05～0.1M的磷酸盐缓冲液，搅拌溶解后过0.22～0.45μm滤膜，得到脂质体悬液。步骤(5)中，向步骤(4)所得脂质体悬液中加入质量分数为5.0％～12.0％冻干保护剂，冻干保护剂为甘露醇、蔗糖、海藻糖或麦芽糊精。优选的，步骤(5)中，所述冻干保护剂为质量分数为10.0％的甘露醇、8.0％的海藻糖或10.0％的蔗糖。进一步的，步骤(5)中，真空冷冻干燥的温度为-10～-50℃，真空度为0.001～0.1MPa，时间为48～72h。采用上述制备方法制备所得花色苷脂质体冻干粉也在本专利技术的保护范围内。有益效果：本专利技术专利将甘露糖赤藓糖醇脂MEL-A用于花色苷脂质体的制备，一方面丰富了脂质体制备的壁材来源，另一方面获得了一种新型的花色苷脂质体冻干粉；制备所得花色苷脂质体冻干粉稳定性好、易保存、生物利用度高，可应用于食品和化妆品领域；制备方法中所用材料安全无毒，方法简单、成本低。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做出详细说明。二月桂酰基卵磷脂：CAS：127641-86-5。大豆卵磷脂：CAS：8002-43-5。甘露糖赤藓糖醇脂MEL-A的制备：由Ustligomaydis或Pseudazyma属菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种花色苷脂质体冻干粉的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将甘露糖赤藓糖醇脂溶于第一溶剂中得到溶液甲；(2)将花色苷溶解在第二溶剂中得到溶液乙；(3)将步骤(1)得到的甲溶液和步骤(2)得到的乙溶液混匀，超声处理后静置，然后置于旋转蒸发仪中减压蒸发得到脂质膜；(4)向步骤(3)所得脂质膜中加入磷酸盐缓冲液，搅拌溶解后膜过滤，得到脂质体悬液；(5)向步骤(4)所得脂质体悬液中加入冻干保护剂，经冷冻干燥即可。

【技术特征摘要】
1.一种花色苷脂质体冻干粉的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将甘露糖赤藓糖醇脂溶于第一溶剂中得到溶液甲；(2)将花色苷溶解在第二溶剂中得到溶液乙；(3)将步骤(1)得到的甲溶液和步骤(2)得到的乙溶液混匀，超声处理后静置，然后置于旋转蒸发仪中减压蒸发得到脂质膜；(4)向步骤(3)所得脂质膜中加入磷酸盐缓冲液，搅拌溶解后膜过滤，得到脂质体悬液；(5)向步骤(4)所得脂质体悬液中加入冻干保护剂，经冷冻干燥即可。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，使用甘露糖赤藓糖醇脂和磷脂混合物替换甘露糖赤藓糖醇脂。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述甘露糖赤藓糖醇脂是由Ustligomaydis或Pseudazyma属菌株发酵合成，再经分离纯化得到，纯度为95％以上。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述第一溶剂为正己烷、氯仿或乙醚，配制所得溶液甲的浓度为15.0～20.0mg/L。5.根据权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：范琳琳，周剑忠，夏秀东，王英，李莹，刘小莉，黄自苏，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32