本发明专利技术涉及鹿胶原肽脂质体，具体地说是一种具有降血糖鹿胶原肽脂质体及制备和应用。将鹿胶原肽制备成为脂质体，具有以抑制二肽基肽酶活性为靶标的降血糖功能。本发明专利技术制备的鹿胶原肽脂质体可使鹿胶原肽免受消化道酶的降解，可直达靶标器官发挥二肽基肽酶抑制活性，从而达到降血糖的目的。本发明专利技术解决了鹿胶原肽口服时易被消化道酶降解失去活性的难题，提高鹿胶原肽口服的生物利用率，扩大鹿胶原肽的服用方式，可用于药品、功能性食品、食品添加剂等领域，具有广阔应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及鹿胶原肽，具体地说是一种具有降血糖功能的鹿胶原肽脂质体及其制备和应用。
技术介绍
二肽基肽酶IV(dipeptidylpeptidase-IVDPP-IV)(EC3.4.14.5)是一种丝氨酸蛋白酶，广泛分布于人体内。DPP-IV通过对多肽的剪切使其失活，从而达到调节生理功能的作用。DPP-IV优先水解N-末端第二位上具有脯氨酸(Pro)或丙氨酸(Ala)的蛋白质。其作用底物包括：胰高血糖素样肽-1(GLP217-36)、抑胃肽(GIP1-42)、神经肽(NPY)、YY肽(PYY)以及胰多肽家族(PP-family)等。这些物质的共同特点就是N-末端第二位的氨基酸残基或者是脯氨酸或者是丙氨酸残基。DPP-IV通过作用于以上多肽底物而在糖尿病、葡萄糖耐量、肥胖、食欲调节、高血脂症、骨质疏松、神经肽新陈代谢和T-细胞激活等相关疾病中起着重要的作用。因此，体内给予DPP-IV抑制剂可预防相关底物肽的N-末端降解，从而保障人体机能正常运行。DPP-IV将完整的GLP-1和GIP反应切断N-末端2个氨基酸残基后，使其失活从而影响GLP-1和GIP相关的血糖调节等生理反应。体内给予DPP-IV抑制剂可预防GLP-1和GIP的N-末端降解，使胰岛素分泌物增加从而改善葡萄糖耐量。鉴于DPP-IV抑制剂与血糖代谢的密切关系，DPP-IV抑制剂已成为新型2型糖尿病药物的研究热点。DPP-IV抑制剂通过影响胰岛素对葡萄糖的敏感性及β细胞，提高周围组织对胰岛素的敏感性，促进乳糜微粒和极低密度脂蛋白的分解，从而起到降脂的作用。基于同样的理由，DPP-IV也同时具有减肥等功能。因此具有广阔的应用前景。鹿胶原肽具有二肽基肽酶抑制活性，应用于药品、保健品、食品等领域发挥降血糖功能，但是与其他活性肽所面临的问题一样，当生物活性肽通过口服方式进入人体消化系统时，口服鹿胶原肽易于被消化系统蛋白酶所降解，从而失去生物活性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种保护鹿胶原肽免受消化道酶降解的技术；其以鹿胶原肽为活性成分，将鹿胶原肽制备成为脂质体，鹿胶原肽脂质体可抵御消化道蛋白酶的降解，使鹿胶原肽活性组分到达靶标器官发挥降糖作用。本专利技术通过脂质体的方法将鹿胶原肽包埋，不影响鹿胶原肽的生物活性，又能抵御消化道蛋白酶的降解，具有良好的应用前景。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种具有降血糖功能的鹿胶原肽脂质体，以鹿胶原肽为活性组分，将鹿胶原肽制备成为脂质体，具有降血糖功能。一种以权利要求1所述鹿胶原肽脂质体的制备方法，以新鲜的鹿皮或鹿筋中的一或二种以上为原料，鹿皮或鹿筋1～30％NaOH于50～100℃煮10～30分钟进行脱脂处理后用纯水清洗干净，剪为2～3平方厘米的碎片，鹿皮或鹿筋碎片按照1:1～100(原料：缓冲液)质量比加入0.01～1M缓冲液，再按1:10～500(酶：原料)质量比加入蛋白酶，于20～50℃搅拌反应1～10小时；将上述反应液的pH用0.1～1MNaOH或0.1～1MHCI调至6～8，加入复合酶进行酶解，加酶量为反应物质量的0.1～1％，于20～70℃搅拌反应1～10小时，反应结束后70～100℃灭活5～30min；将上述反应液2000～8000rpm离心3～10min，收集上清，冷冻干燥得到鹿胶原肽。取干燥磷脂与胆固醇混合物，磷脂与胆固醇的质量比为1：0.01～1，混合物溶于氯仿中并混合均匀，混合物与氯仿的质量体积比为1:0.1～20(mg：ml)；混合溶液于20～80℃真空旋转蒸发，形成一层脂膜。加入去离子水水化脂膜，磷脂与胆固醇混合物质量与去离子水体积的比例为1：0.1～10(mg：ml)，加入直径0.5～3mm的玻璃珠于30～90℃搅拌3～60分钟，在室温下搅拌5～60分钟，形成脂质体。上述制备的鹿胶原肽溶于pH7.4磷酸缓冲液中，制备成为浓度为5～20mg/ml的溶液；取鹿胶原肽加入脂质体混合，鹿胶原肽与脂质体的体积比为1：1～50。混合物分散均匀后冷冻干燥，加入去离子水水化，去离子水体积是鹿胶原肽溶液体积的0.5～20倍，并在30～50℃孵育5～30分钟。混合物于4℃、30000g转速下离心120分钟，收集上清即为鹿胶原肽脂质体。鹿皮和/或鹿筋原料酶解过程为两步法，第一步用单酶酶解，第二步用复合酶酶解；单酶酶解所用酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶其中一种；复合酶为胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶或中性蛋白酶其中两种、三种、四种或五种酶组合使用，复合酶中单酶以相同的质量比例混合。鹿胶原肽脂质体具有抑制二肽基肽酶IV活性的降血糖功能，可应用用于药品、保健食品、食品添加剂中。本专利技术的特点如下：1.利用本专利技术所制备的鹿胶原肽脂质体，既不影响鹿胶原肽的DPP-IV抑制活性，又使鹿胶原肽在消化道内免受消化道蛋白酶的降解而保持降血糖活性。2.本专利技术将鹿胶原肽制备成为脂质体，保证了口服方式服用鹿胶原肽的生物活性，使鹿胶原肽可作为食品添加剂等使用范围，扩大了鹿胶原肽的应用范围，具有良好的应用前景。3.本专利技术方法简单，易于大规模生产。具体实施方式实施例1按照以下工艺制备鹿胶原肽脂质体：以新鲜的梅花鹿鹿皮为原料，鹿皮用质量浓度10％NaOH于50℃煮30分钟进行脱脂处理后纯水清洗干净，剪为2～3平方厘米的碎片，鹿皮碎片按照1:80(原料：缓冲液质量比)加入0.01M醋酸缓冲液，再按1:10(酶：原料)质量比加入胃蛋白酶，于40℃搅拌反应1小时。将上述反应液的pH用1MNaOH调至7，加入复合酶(胰蛋白酶，碱性蛋白酶，质量混合比例1:1)进行酶解，加酶量为反应物原料质量的0.1％，于20℃搅拌反应1小时，反应结束后90℃灭活20min。将上述反应液5000rpm离心5min，收集上清，冷冻干燥得到鹿胶原肽。取50mg干燥磷脂与胆固醇混合物，磷脂与胆固醇的质量比为1：0.01，混合物溶于1000ml氯仿中并混合均匀，于40℃真空旋转蒸发，形成一层脂膜。加入500ml去离子水水化脂膜，加入直径0.5～3mm的玻璃珠于90℃搅拌60分钟，再在室温下搅拌60分钟，形成脂质体。上述制备的鹿胶原肽溶于pH7.4的磷酸缓冲液中，制备成为浓度为5mg/ml的溶液；取50ml的鹿胶原肽溶液加入500ml脂质体混合。混合物分散均匀后冷冻干燥，加入1000ml去离子水水化，并在50℃孵育15分钟。混合物于4℃、30000g转速下离心120分钟，收集上清即为鹿胶原肽脂质体。实施例2以新鲜的梅花鹿鹿筋为原料，鹿筋用5％NaOH于80℃煮10分钟进行脱脂处理后用纯水清洗干净，剪为2～3平方厘米的碎片，鹿筋碎片按照1:100(原料：缓冲液质量比)加入0.01M磷酸缓冲液，再按1:500(酶：原料)质量比加入胰蛋白酶，于35℃搅拌反应10小时。将上述反应液的pH用0.1MHCI调至6，加入复合酶(木瓜蛋白，菠萝蛋白酶,质量比1:1)进行酶解，加酶量为反应物质量的1％，于50℃搅拌反应10小时，反应结束后100℃灭活5min。将上述反应液2000rpm离心10min，收集上清，冷冻干燥得到鹿胶原肽。取50mg干燥磷脂与胆固醇混合物，磷脂与胆固醇的质量比为1：0.5，混合物溶于5本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有降血糖功能的鹿胶原肽脂质体，其特征在于：其以鹿胶原肽为活性组分，将鹿胶原肽制备成为脂质体。
【技术特征摘要】
1.一种具有降血糖功能的鹿胶原肽脂质体，其特征在于：其以鹿胶原肽为活性组分，将鹿胶原肽制备成为脂质体。2.一种权利要求1所述鹿胶原肽脂质体的制备方法，其特征在于：1)以新鲜的鹿皮或鹿筋中的一或二种以上为原料，原料采用质量浓度1～30％NaOH于50～100℃煮10～30分钟进行脱脂处理后用水清洗干净，剪为2～3平方厘米的碎片，原料碎片按照原料：缓冲液为1:1～100的质量比加入0.01～1M缓冲液，再按酶：原料的1:10～500为质量比加入蛋白酶，于20～50℃搅拌反应1～10小时；将上述反应液的pH用0.1～1MNaOH或0.1～1MHCI调至6～8，加入复合酶进行酶解，加酶量为反应物原料质量的0.1～1％，于20～70℃搅拌反应1～10小时，反应结束后70～100℃灭活5～30min；将上述反应液2000～8000rpm离心3～10min，收集上清，冷冻干燥得到鹿胶原肽；2)取干燥磷脂与胆固醇混合物，磷脂与胆固醇的质量比为1：0.01～1，混合物溶于氯仿中并混合均匀，混合物与氯仿的质量体积比为1:0.1～20(mg：ml)；混合溶液于20～80℃真空旋转蒸发，形成一层脂膜；加入去离子水水化脂膜，磷脂与胆固醇混合物质量与去离子水体积的比例为1：0.1～10(mg：ml)，加入直径0.5～3mm的玻璃珠于30...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹汉法，靳艳，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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