马来酸匹杉琼脂质体及其制备方法技术

本发明专利技术属于公开一种马来酸匹杉琼脂质体及其制备方法，本发明专利技术将匹杉琼普通注射液制备成脂质体可以降低毒副作用，更好的发挥药效；解决了硫酸铵梯度法制备脂质体包封率低的问题；采用高压均质-挤出机能更好的控制空白脂质体的粒径，使其分布均匀；采用硫酸铵梯度法制备脂质体的方法经过长期验证，具有良好的安全性，制备工艺简单，脂质体包封率高，并且适合工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种马来酸匹杉琼脂质体及其制备方法，属于医药

技术介绍
匹杉琼(pixantronedimaleate)是一种细胞毒性氮杂蒽二酮、弱拓扑异构酶II抑制剂，2012年被欧盟批准用于治疗成人复发或难治侵略性非霍奇金B细胞淋巴瘤，商品名为Pixuvri。匹杉琼的母核为米托蒽醌，多年临床应用表明米托蒽醌具有明显的毒性副反应，尤其是与骨髓抑制和心脏中毒相关的毒副作用，而匹杉琼的动物试验研究未表现出可测量的心脏毒性，并且细胞毒性和骨髓抑制更小，在不同的肿瘤模型中具有明显的抗肿瘤活性，尤其在白血病和淋巴瘤模型中始终优于米托蒽醌和阿霉素。匹杉琼游离形式不稳定，因此将其合成二马来酸盐的形式，维持酸性pH值，使其稳定。目前上市的匹杉琼为普通注射液，有报道显示，临床给予匹杉琼普通注射液会出现严重的蓄积性心脏毒性反应，并且存在剂量依赖性。因此，本专利技术将马来酸匹杉琼制备成脂质体形式，减少单次给药剂量，降低严重不良反应的发生。脂质体是一种靶向给药系统的新剂型，近年来一直是学者们的研究热点。脂质体具有靶向性、可缓慢释放药物延长作用时间、提高疗效、降低药物毒性等特点。最具有代表性的脂质体药物是美国Alza公司开发的盐酸多柔比星脂质体注射液，于1995年在美国上市，商品名为Doxil。Doxil是采用硫酸铵梯度法主动包封技术将盐酸多柔比星包封在脂质体内部，形成稳定的、高包封率的盐酸多柔比星脂质体。静脉注射后，盐酸多柔比星脂质体会蓄积到肿瘤组织中，体内分布呈现肿瘤靶向性，同时降低毒性，显著提高抗癌效能。经过多年临床证明，硫酸铵梯度法制备的盐酸多柔比星脂质体的安全性高、疗效好。已有专利将马来酸匹杉琼制备成脂质体，分别为一种马来酸匹杉琼的脂质体制剂及其制备工艺(公开号：CN103479578A)和6,9－二－[(2－氨基乙基)氨基]苯并[g]异喹啉－5,10－二酮二马来酸酯的脂质体制剂(公开号：CN1382039A)。专利CN103479578A中采用pH梯度法制备的马来酸匹杉琼脂质体包封率高，但是由于引入新缓冲盐粒子，增加临床用药风险；同时该专利中研究硫酸铵梯度法无法制备符合临床需要的样品，包封率低于10％。另一专利CN1382039A是采用被动载药方法，直接向磷脂膜中加入匹杉琼溶液水合，包封率仅为85％，且药物容易从脂质体内泄漏，未达到降低匹杉琼注射剂毒性反应的目的。
技术实现思路
本专利技术的技术方案如下：本专利技术马来酸匹杉琼脂质体每1000体积份脂质体中包含：本专利技术马来酸匹杉琼脂质体每1000体积份脂质体中其余部分含pH调节剂和注射用水。本专利技术马来酸匹杉琼脂质体每1000体积份脂质体中DSPC与CHO重量比为3：1～3，DSPC与PEG-DSPE2000重量比为3:1～2；硫酸铵溶液的浓度为0.1～0.3mol/L；氢氧化钠调节蔗糖溶液pH至6.50～7.50。本专利技术所述体积份/重量份为ml/g。本专利技术马来酸匹杉琼脂质体的制备方法，采用硫酸铵梯度法制备，包括以下步骤：(1)成膜：称取二硬脂酰基磷脂酰胆碱/胆固醇/聚乙二醇化磷脂2000，溶于三氯甲烷，加热溶解后于旋转蒸发仪上减压蒸发除去氯仿，得到脂质薄膜；(2)水化：向脂质薄膜加入0.1～0.3mol/L硫酸铵水溶液水化，得到空白脂质体初品；(3)整粒：将空白脂质体于超声波分散仪上超声整粒，整粒后采用不同孔径的微孔滤膜过滤，得到粒径分布均匀的空白脂质体；(4)制造脂质体内外跨膜梯度：采用超滤法，用9％蔗糖溶液置换外水相硫酸铵溶液，得到空白脂质体；(5)载药、孵化：称取马来酸匹杉琼溶于上述空白脂质体中，用氢氧化钠调节pH至6.50～7.10，55～65℃保温，得到马来酸匹杉琼脂质体；(6)保存：马来酸匹杉琼脂质体用0.22μm微孔滤膜除菌分装，4℃保存。本专利技术马来酸匹杉琼脂质体的制备方法还可以是，采用硫酸铵梯度法制备，包括以下步骤：(1)油相：称取二硬脂酰基磷脂酰胆碱/胆固醇/聚乙二醇化磷脂2000，溶于无水乙醇，加热溶解后于55～65℃保温；(2)水相：配制0.1～0.3mol/L的硫酸铵水溶液，于55～65℃保温；(3)乳化：在55～65℃下将油相注入到水相中，不断搅拌，并通入氮气，直到无水乙醇完全挥发，得到空白脂质体初品；(4)整粒：将空白脂质体于超声波分散仪上超声整粒，整粒后采用不同孔径的微孔滤膜过滤，得到粒径分布均匀的空白脂质体；(5)制造脂质体内外跨膜梯度：采用超滤法，置换液为9％蔗糖溶液，置换空白脂质体外水相的硫酸铵溶液，得到空白脂质体；(6)载药、孵化：称取马来酸匹杉琼溶于上述空白脂质体中，用氢氧化钠调节pH至6.50～7.10，55℃～65℃保温，得到马来酸匹杉琼脂质体；(7)保存：马来酸匹杉琼脂质体用0.22μm微孔滤膜除菌分装，4℃保存。所述制造脂质体内外跨膜梯度的方法还可以为透析法，采用9％蔗糖溶液，置换空白脂质体外水相的硫酸铵溶液，得到空白脂质体。本专利技术脂质体磷脂浓度为10～30mg/mL，马来酸匹杉琼浓度为1～2mg/mL，马来酸匹杉琼脂质体的平均粒径为50～200nm，优选70～150nm。本专利技术采用高压均质-挤出机制备空白脂质体的粒径。本专利技术采用硫酸铵梯度法制备马来酸匹杉琼脂质体，解决了现有技术中使用硫酸铵梯度法制备马来酸匹杉琼脂质体包封率低的问题，降低匹杉琼注射液的毒性反应，抗肿瘤效果更优。硫酸铵梯度法制备脂质体用于临床多年，安全性更为可靠。本专利技术采用高压均质-挤出机能更好的控制空白脂质体的粒径，使其分布均匀，适合工业化生产。附图说明图1为a9粒径分布图；图2为a9电位分布图。实验例：本专利技术通过实施例1-9不同方法制备的马来酸匹杉琼脂质体，包封率见表1。实施例5中用透析的方法除去外水相硫酸铵溶液，虽然包封率达到89.6％，但不适合工业化生产。实施例7和8采用缓冲液调节pH值，脂质体包封率仅为4％。实施例9采用高压均质机-挤出机制备的马来酸匹杉琼脂质体粒径为87.29nm，粒径分布均匀，分布宽度40.15，电位-9.06mV，结果见图1和图2。表1实施例中制备的马来酸匹杉琼脂质体的包封率实施例1(1)成膜：称取DSPC300.2mg，CHO100.2mg，DSPE-PEG200099.8mg，溶于10mL三氯甲烷，加热溶解，于旋转蒸发仪上55℃减压蒸发除去三氯甲烷，得到脂质薄膜；(2)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种马来酸匹杉琼脂质体，其特征在于每1000体积份脂质体中各组分含量为：

【技术特征摘要】
1.一种马来酸匹杉琼脂质体，其特征在于每1000体积份脂质体中各组分含量
为：
2.根据权利要求1所述马来酸匹杉琼脂质体，其特征在于每1000体积份脂质
体中各组分含量为：
3.根据权利要求1或2所述马来酸匹杉琼脂质体，其特征在于DSPC与CHO重

\t量比为3：1～3，DSPC与PEG-DSPE2000重量比为3:1～2。
4.根据权利要求1或2所述马来酸匹杉琼脂质体，其特征在于蔗糖溶液用氢
氧化钠调节pH至6.50～7.50。
5.根据权利要求1-4任一所述的马来酸匹杉琼脂质体的制备方法，其特征在
于采用硫酸铵梯度法制备，包括以下步骤：
(1)成膜：称取二硬脂酰基磷脂酰胆碱/胆固醇/聚乙二醇化磷脂2000，溶于
三氯甲烷，加热溶解后于旋转蒸发仪上减压蒸发除去氯仿，得到脂质薄膜；
(2)水化：向脂质薄膜加入0.1～0.3mol/L硫酸铵水溶液水化，得到空白脂
质体初品；
(3)整粒：将空白脂质体于超声波分散仪上超声整粒，整粒后采用不同孔径
的微孔滤膜过滤，得到粒径分布均匀的空白脂质体；
(4)制造脂质体内外跨膜梯度：采用超滤法，用9％蔗糖溶液置换外水相硫酸
铵溶液，得到空白脂质体；
(5)载药、孵化：称取马来酸匹杉琼溶于上述空白脂质体中，用氢氧化钠调
节pH至6.50～7.10，55～65℃保温，得到马来酸匹杉琼脂质体；
(6)保存：马来酸匹杉琼脂质体用0.22μm微孔滤膜除菌分装，4℃保存。
6.根据权利要求1-4任一所述的马来酸匹杉琼脂质体的制备方法，其特征在
于采用硫酸铵梯度法制备，包括以下步骤：
(1)油相：称取二硬脂酰基磷...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭光明，佟志远，王海燕，
申请(专利权)人：北京博恩特药业有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11