本发明专利技术公开了一种壁虎蛆虫蛋白质在制备抗黑色素瘤药品中的应用，所述壁虎蛆虫蛋白质制备方法如下：将壁虎蛆虫在常温膨化装置中膨化粉碎；然后加入到膨胀溶剂体系提取装置中提取出壁虎蛆虫蛋白质粗品；收集含有壁虎蛆虫蛋白质粗品的溶液并用微孔过滤器过滤去掉杂质；用超滤机超滤处理，收集壁虎蛆虫蛋白质超滤溶液；超滤液溶解在乙腈中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分；将洗脱成分溶解在溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱分离纯化；用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉，可用于制备抗黑色素瘤药品。本发明专利技术分离的纯化壁虎蛆虫蛋白质为非均一蛋白质，相对分子量为10.9~12.6KPa，等电点为pH8.8~10.2，不含糖基，纯化的壁虎蛆虫蛋白质含量为96.7%。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种壁虎蛆虫蛋白质的新用途，尤其是壁虎蛆虫蛋白质在制备抗黑色 素瘤药品中的应用。
技术介绍
恶性黑素瘤是由皮肤和其它器官黑素细胞产生的肿瘤，皮肤黑素瘤表现为色素性 皮损在数月或数年中发生明显改变。 由于黑色素细胞起源于神经嵴，广泛分布于皮肤、眼、黏膜表面和神经系统等，因 此，恶性黑色素瘤可以在皮肤、口腔、消化道、生殖系统的黏膜、眼球的睫状体、虹膜、脉络膜 以及脑膜等处发生。恶性黑色素瘤大多是由良好黑色素痣转化而来。环境因素、遗传因素、严重的化 学、光损害及药物侵蚀都可以引发生成恶性黑色素瘤。治疗方案一般采用外科手术治疗、放疗、化疗、内分泌治疗、生物治疗、生物化学治 疗，中医则将病症分为风湿热毒、外郁肌肤型，肝郁气虚、瘀毒凝滞型，肝肾阴虚、肌肤失养 型三种类型，对症治疗。 CN103417953A公开了重组灵芝免疫调剂蛋白（rLZ-8)在制备治疗黑色素瘤药物 中的应用。该专利技术采用原位瘤和转移瘤实验动物模型研宄重组灵芝免疫调节蛋白的抗肿瘤 作用。 CN102067828A公开了人黑色素瘤高转移模型、细胞亚系以及建立方法和转移的动 态检测。该专利技术采用肺转移灶在小鼠肺转移用体内筛选的方法建立了皮下移植模型及相应 的细胞亚系。 CN103952367A公开了一种发酵培养基及利用其生产黑色素瘤治疗性质粒DNA疫 苗pSVK-CAVA的方法。该专利技术描述了发酵培养基的组成，并描述了其生产方法。 CN102805859A公开了作为体内造血刺激剂的TAT-H0XB4H重组蛋白质及其医疗组 成物。本专利技术涉及一种C-端含有组氨酸标记的H0XB4H重组蛋白质的制备方法，该重组蛋 白质应用于增加骨髓内以及周边血液内的造血干细胞的数量。 CN102847144A公开了一种提高机体免疫功能的细胞类生物药物及其制备方法和 应用。该专利技术表述了以免疫细胞与特定抗原在培养基中培养并获得相应抗原的特异性免疫 细胞培养物，然后后处理分离出具有免疫应答的细胞，用于治疗和预防肿瘤及病毒性疾病。 CN102924578A公开了抗肿瘤多肽及其制备方法和抗肿瘤应用。该专利技术提供了一种 具有抗肿瘤功能的多肽的制备方法，该多肽包括内皮抑素N端锌离子结合位点的3个组氨 酸结构，一个0折叠结构及串联的RGD系列。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种，根据 黑色素瘤的病灶特性及壁虎蛆虫蛋白质生物活性特点，两者相结合制备的药剂具有适应性 强、疗效好的特点。 本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的： (1)将1000 g壁虎蛆虫在常温膨化装置（200520108339. X)中常温条件下膨化粉碎。 本步骤中，所述膨化压力为0? l~5MPa，时间为10~60min。 (2)膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076. 6)中，加入 膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出壁虎蛆虫蛋白质粗品。 本步骤中，所述膨胀溶剂由l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及 100~300gNH 3 ? H2O组成或由l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化铵组 成。 本步骤中，所述提取温度为10~20°C，时间为10~30min。 (3)收集含有壁虎蛆虫蛋白质粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质。 本步骤中，所述微孔过滤器的孔径为0. 5~50Mffl。 (4)用超滤机超滤处理，收集含有相应分子量的壁虎蛆虫蛋白质超滤溶液。 本步骤中，所述超滤机的孔径为50~100nm。 (5)超滤液溶解在适宜的溶剂中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分。 本步骤中，所述溶剂为乙腈。 (6)将洗脱成分溶解在合适的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱 (200920274485. 8)分离纯化。 本步骤中，所述溶剂体系由正丁醇-乙酸乙酯-水(体积比1. 25:3. 75:5)组成或 4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比）组成。(7)纯化后的壁虎蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。 本步骤中，所述真空冷冻干燥温度为_30~50°C、时间为18~26h。 (8)赋予不同的药用辅助材料，可用于制备抗黑色素瘤药品。 本技术方案中分离的纯化壁虎蛆虫蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向聚丙烯酰 胺凝胶电泳及琼脂聚糖免疫电泳谱上测得非均一蛋白质；用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 及葡聚糖凝胶G-75凝胶过滤法测得相对分子量为10. 9~12. 6KPa;用等电聚焦发测定其等 电点为PH8. 8~10. 2;常规化学法分析结果表明其不含糖基；紫外分光光度法测定纯化的壁 虎蛆虫蛋白质含量为96. 7%。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术的技术方案作进一步的说明，但并不局限如此，凡是对 本专利技术技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神和范围，均应涵 盖在本专利技术的保护范围中。 实施例1: (1) 将1000 g壁虎蛆虫干燥品装入常温膨化装置（200520108339. X)中，对膨化装置内 充入二氧化碳气体并加压至0. l~5MPa，时间10~60min，然后迅速释放压力至常压，壁虎蛆 虫被膨化成粉体； (2) 膨化粉碎后的壁虎蛆虫粉体加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076. 6)中， 加入l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH3 ? H2O,加压至2~10MPa，形成膨 胀溶剂体系，保持温度l〇~20°C，时间10~30min，壁虎蛆虫粉体中的蛋白质溶解，然后降压 至常压，生成壁虎蛆虫蛋白质粗品与甲醇-NH3 ? H2O的混合液； (3) 收集含有壁虎蛆虫蛋白质粗品的溶液，用孔径0. 5~50Mm的微孔过滤器过滤去处固 体杂质； (4) 溶液用孔径50~100nm的超滤机超滤处理，压力0. 3~0. 8MPa，温度为常温，收集含有 相应分子量的壁虎蛆虫蛋白质超滤溶液； (5) 超滤溶液用20%乙腈溶解，C18固相萃取柱用50~100%乙腈活化预处理，加 0. 02~0. 1%三氟乙酸-水平衡，用10%乙腈溶液溶解的超滤溶液上柱，常温下用10~80%的 乙腈梯度脱洗，流速l~l〇mL/min，收集相关梯度的洗脱成分； (6) 将洗脱成分溶解在4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比)溶剂体系中，用超声驻 波液相制备色谱（200920274485. 8)分离纯化，超声波功率0. 2~3. 0KW，频率500~1000KHz， 流速50~500mL/min，紫外检测器波长260~280nm ; (7) 纯化后的壁虎蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机在温度-30~501：、时间18~2611干燥制 备成冻干蛋白粉。 实施例2: (1) 将1000 g壁虎蛆虫干燥品装入常温膨化装置（200520108339. X)中，对膨化装置内 充入二氧化碳气体并加压至0. l~5MPa，时间10~60min，然后迅速释放压力至常压，壁虎蛆 虫被膨化成粉体； (2) 膨化粉碎后的壁虎蛆虫粉体加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076. 6)中， 加入5Kg液态二氧化碳、300mL甲醇及200gNH3 ? H2O,加压至5MPa，形成膨胀溶剂体系本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种壁虎蛆虫蛋白质在制备抗黑色素瘤药品中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐华民，赵荣华，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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