一种蝎子蛆虫蛋白质的制备方法及其在制备抗食道癌药品中的应用，所述蝎子蛆虫蛋白质制备方法如下：将蝎子蛆虫在常温膨化装置中膨化粉碎；然后加入到膨胀溶剂体系提取装置中提取出蝎子蛆虫蛋白质粗品；收集含有蝎子蛆虫蛋白质粗品的溶液并用微孔过滤器过滤去掉杂质；用超滤机超滤处理，收集蝎子蛆虫蛋白质超滤溶液；超滤液溶解在乙腈中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分；将洗脱成分溶解在溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱分离纯化；用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉，可用于制备抗食道癌药品。本技术方案中分离的纯化壁虎蛆虫蛋白质为非均一蛋白质；相对分子量为10.6~11.8KPa；等电点为pH8.9~9.6；不含糖基；纯化的壁虎蛆虫蛋白质含量为98.2%。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种药品的制备方法及其新用途，尤其是一种蝎子蛆虫蛋白质的制备 方法及其在制备抗食道癌药品中的应用。
技术介绍
食管癌又称食道癌，是发生于食管黏膜交界部的恶性肿瘤。中医认为该症的病理 病机是由于暴怒忧思、伤及肝脾，脾伤则气结，气结则津液不能输流，阻而成痰，肝伤则气 郁，气郁则血液不能畅行，遂而为瘀，瘀痰阻塞食道，结聚胃腑，故食物难于下行。 西医认为目前食管癌的发病原因尚不明确，一般认为食管癌的发生与一系列致癌 因子有关，很多致癌因子作用于宿主后，从而导致食管癌的发生。该过程使一个多因素、多 阶段、多基因参与的复杂过程。 通常的治疗采用手术治疗、放射治疗、化学药物治疗。中医药治疗一般将食管癌归 纳为痰气交阻型、津亏热结型、瘀血内结型、气虚阳微型等不同种类的病症，分别治疗。 CN102861190A公开了一种治疗食管癌的中药方，该方剂由桃仁、杏仁、桔梗、法半 夏、准牛膝、代赭石、旋复花、瓜萎、川朴、牛蒡子、莱菔子、丹参等十七味中药组成。 CN103393856A公开了一种医治食管癌制剂的制备方法，该专利技术以蟾皮、蜈蚣、土蜂 蜂子、木鳖子、大一支箭、乌药、仙人掌、齒砂、海藻、白英等中草药组成，经加工制成制剂。 CN101797340A公开了一种用于治疗食管癌的组合药物及其制备方法，该专利技术以九 种中草药组成方剂，经粉碎、混合、过筛，所收集粉末用蜂蜡混合配制成型，制成颗粒制剂。 CN102441165A公开了一种单克隆抗体用于治疗食管癌的用途，该专利技术涉及一种抗 表皮生长因子受体的单克隆抗体在治疗食管癌方面的用途，尤其是人源化单克隆抗体-尼 妥珠单抗。 CN102649963A公开了可用于食管癌防治的基于HPVLl基因的重组腺病毒，该专利技术 提供了一种优化型的编码HPV18型主要衣壳蛋白Ll的基因序列以及含有其的复制缺陷型 重组HPV18L1腺病毒疫苗，并提供了制备上述重组腺病毒的方法。 201210315708. 7公开了人工培育蝎子蛆虫的方法，该专利技术以蝎子躯体等为原料， 经多个步骤定向培殖蝎子蛆虫，培殖过程可控，培养基组成合理，培殖的蝎子蛆虫成分既消 除了蝎子具有的毒性，又具有特殊的生物活性功能。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种蝎子蛆虫蛋白质的制备方法及其在制备抗食道癌药品 中的应用，采用蝎子蛆虫为原料，通过一系列的工艺条件分离纯化成为蝎子蛆虫蛋白质，制 备成八项给药系统，具有药效高、一致性好的特点。 本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的： (1)将1000 g蝎子蛆虫在常温膨化装置（200520108339.X)中常温条件下膨化粉碎。 本步骤中，所述膨化压力为0? l~5MPa，时间为10~60min。 (2)膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076. 6)中，加入 膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出蝎子蛆虫蛋白质粗品。 本步骤中，所述膨胀溶剂由l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及 100~300gNH 3 ? H2O组成或由l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化铵组 成。 本步骤中，所述提取温度为10~20°C，时间为10~30min。 (3)收集含有蝎子蛆虫蛋白质粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质。 本步骤中，所述微孔过滤器的孔径为0. 5~50Mm。 (4)用超滤机超滤处理，收集含有相应分子量的蝎子蛆虫蛋白质超滤溶液。 本步骤中，所述超滤机的孔径为50~100nm。 (5)超滤液溶解在适宜的溶剂中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分。 本步骤中，所述溶剂为乙腈。 (6)将洗脱成分溶解在合适的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱 (200920274485. 8)分离纯化。 本步骤中，所述溶剂体系由正丁醇-乙酸乙酯-水(体积比1. 25:3. 75:5)组成或 4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比）组成。 (7)纯化后的蝎子蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。 本步骤中，所述真空冷冻干燥温度为_30~50°C、时间为18~26h。 (8)赋予不同的药用辅助材料，分别制备成注射剂、口服靶向给药系统等，可用于 制备抗食道癌药品。 本技术方案中分离的纯化壁虎蛆虫蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向聚丙烯酰 胺凝胶电泳及琼脂聚糖免疫电泳谱上测得非均一蛋白质；用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 及葡聚糖凝胶G-75凝胶过滤法测得相对分子量为10. 6~11. SKPa ;用等电聚焦发测定其等 电点为PH8. 9~9. 6 ;常规化学法分析结果表明其不含糖基；紫外分光光度法测定纯化的壁 虎蛆虫蛋白质含量为98. 2%。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术的技术方案作进一步的说明，但并不局限如此，凡是对 本专利技术技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神和范围，均应涵 盖在本专利技术的保护范围中。 实施例1: (1) 将1000 g蝎子蛆虫干燥品装入常温膨化装置（200520108339. X)中，对膨化装置内 充入二氧化碳气体并加压至0. l~5MPa，时间10~60min，然后迅速释放压力至常压，蝎子蛆 虫被膨化成粉体； (2) 膨化粉碎后的蝎子蛆虫粉体加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076. 6)中， 加入l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH3 ? H2O,加压至2~10MPa，形成膨 胀溶剂体系，保持温度l〇~20°C，时间10~30min，蝎子蛆虫粉体中的蛋白质溶解，然后降压 至常压，生成蝎子蛆虫蛋白质粗品与甲醇-NH 3 ? H2O的混合液； (3) 收集含有蝎子蛆虫蛋白质粗品的溶液，用孔径0. 5~50Mm的微孔过滤器过滤去处固 体杂质； (4) 溶液用孔径50~100nm的超滤机超滤处理，压力0. 3~0. 8MPa，温度为常温，收集含有 相应分子量的蝎子蛆虫蛋白质超滤溶液； (5) 超滤溶液用20%乙腈溶解，C18固相萃取柱用50~100%乙腈活化预处理，加 0. 02~0. 1%三氟乙酸-水平衡，用10%乙腈溶液溶解的超滤溶液上柱，常温下用10~80%的 乙腈梯度脱洗，流速l~l〇mL/min，收集相关梯度的洗脱成分； (6) 将洗脱成分溶解在4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比)溶剂体系中，用超声驻 波液相制备色谱（200920274485. 8)分离纯化，超声波功率0. 2~3. 0KW，频率500~1000KHz， 流速50~500mL/min，紫外检测器波长260~280nm ; (7) 纯化后的蝎子蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机在温度-30~501：、时间18~2611干燥制 备成冻干蛋白粉。 实施例2: (1) 将1000 g蝎子蛆虫干燥品装入常温膨化装置（200520108339. X)中，对膨化装置内 充入二氧化碳气体并加压至0. l~5MPa，时间10~60min，然后迅速释放压力至常压，蝎子蛆 虫被膨化成粉体； (2) 膨化粉碎后的蝎子蛆虫粉体加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076. 6)中， 加入5Kg液态二氧化碳、300mL甲醇及200gNH3 ? 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种蝎子蛆虫蛋白质的制备方法，其特征在于所述制备方法步骤如下：（1）将1000g蝎子蛆虫在常温膨化装置中常温条件下膨化粉碎；（2）膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置中，加入由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH3·H2O组成或由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化铵组成的膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出蝎子蛆虫蛋白质粗品；（3）收集含有蝎子蛆虫蛋白质粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质；（4）用超滤机超滤处理，收集蝎子蛆虫蛋白质超滤溶液；（5）超滤液溶解在乙腈中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分；（6）将洗脱成分溶解在由正丁醇‑乙酸乙酯‑水按体积比1.25:3.75:5组成或由聚乙二醇‑葡聚糖T500按重量比4.5:7组成的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱分离纯化；（7）纯化后的蝎子蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐华民，赵荣华，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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