本发明专利技术公开了一种斑蝥蛆虫蛋白质在制备抗膀胱癌药品中的应用，所述制备方法如下：将斑蝥蛆虫在常温膨化装置中膨化粉碎；然后加入到膨胀溶剂体系提取装置中提取出斑蝥蛆虫蛋白质粗品；收集含有斑蝥蛆虫蛋白质粗品的溶液并用微孔过滤器过滤去掉杂质；用超滤机超滤处理，收集斑蝥蛆虫蛋白质超滤溶液；超滤液溶解在乙腈中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分；将洗脱成分溶解在溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱分离纯化；用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉，可用于制备抗膀胱癌药品。本发明专利技术制备的斑蝥蛆虫蛋白质制剂质量稳定，结构清楚，药理明晰，疗效明显，含量可检可测，剂型多样，成本较低，适合工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种斑蝥蛆虫蛋白质的新用途，尤其是斑蝥蛆虫蛋白质在制备抗膀胱 癌药品中的应用。
技术介绍
膀胱癌是指发生于膀胱壁的恶性肿瘤，是泌尿系统常见的肿瘤，膀胱癌可分为两 大类：（1)在间叶组织发生的肿瘤(淋巴瘤、肉瘤、类癌等）；（2)在上皮组织发生的肿瘤(膀 胱移行上皮癌、鳞状上皮癌及腺癌)。 现在一般认为膀胱癌的病因与下列因素有关：（1)环境因素，长期接触芳香族有 机化合物、橡胶、制革、染料、油漆、造纸、纺织等行业人群；（2)吸烟族人群；（3)药物副作用 影响；（4)慢性膀胱炎、结石、血吸虫；（5)体内色氨酸的代谢异常。 CN103857796A公开了膀胱癌细胞的检测方法，用于膀胱癌细胞的检测方法的引物 及膀胱癌标记物。该专利技术提供一种对膀胱癌的特异度高且能够检测出恶性度低的膀胱癌组 织的检测方法及膀胱癌标记物。 CN103975078A公开了治疗和诊断膀胱癌的方法和组合物，该专利技术提供用于检测和 治疗膀胱癌的方法、组合物和试剂盒。 CN103857796A公开了治疗膀胱癌的方法，该专利技术通过施用包括纳米颗粒的组合物 提供用于治疗包括转移性膀胱癌和非肌肉浸润性膀胱癌在内的方法和组合物。所述的纳米 颗粒包括紫衫烷和白蛋白制备而成。 CN103800842A公开了一种治疗膀胱癌的中药组合物，该组合物由金银花、半枝莲、 肉桂、木通、泽泻、牡丹皮、当归、黄柏、莪术、山药等27种中草药组成，药效具有协同作用。 CN102372773A公开了人膀胱癌肿瘤标志物及其抗体和应用，该专利技术中的人膀胱癌 肿瘤标志物为异常糖基化的整合素和产生的单克隆抗体的杂交瘤细胞及其分泌的单克隆 抗体。 CN103908581A公开了一种治疗膀胱癌的药物及制备方法，该专利技术的药物由浮萍、 长杆兰、苦菜、滑石、石苇、车前草、木通和磨盘草等16种中草药组成。 CN102793725B公开了人工培育斑蝥蛆虫的工艺，本工艺充分利用昆虫生长特性、 生物学特性，批量培育生成奇特成分的昆虫，这种成分是一种专门抗膀胱癌的蛋白质。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种，本专利技术 工艺过程中采用适宜的方法提取分离斑蝥蛆虫蛋白质，并根据斑蝥蛆虫蛋白质的特性辅以 相应的材料至制备成不同剂型的药剂。 本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的： (1)将1000 g斑蝥蛆虫在常温膨化装置（200520108339. X)中常温条件下膨化粉碎。 本步骤中，所述膨化压力为0?l~5MPa，时间为10~60min。 (2)膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076. 6)中，加入 膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出斑蝥蛆虫蛋白质粗品。 本步骤中，所述膨胀溶剂由l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及 100~300gNH 3 ? H2O组成或由l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化铵组 成。 本步骤中，所述提取温度为10~20°C，时间为10~30min。 (3)收集含有斑蝥蛆虫蛋白质粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质。 本步骤中，所述微孔过滤器的孔径为0. 5~50Mm。 (4)用超滤机超滤处理，收集含有相应分子量的斑蝥蛆虫蛋白质超滤溶液。 本步骤中，所述超滤机的孔径为50~100nm。 (5)超滤液溶解在适宜的溶剂中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分。 本步骤中，所述溶剂为乙腈。 (6)将洗脱成分溶解在合适的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱 (200920274485. 8)分离纯化。 本步骤中，所述溶剂体系由正丁醇-乙酸乙酯-水(体积比1. 25:3. 75:5)组成或 4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比）组成。 (7)纯化后的斑蝥蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。 本步骤中，所述真空冷冻干燥温度为_30~50°C、时间为18~26h。 (8)赋予不同的药用辅助材料，分别制备成注射剂、口服剂、栓剂等，可用于制备抗 膀胱癌药品。 本专利技术的优点和有益效果如下：通过本专利技术分离纯化的斑蝥蛆虫蛋白质 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法及葡聚糖凝胶G-75凝胶过滤法测得相对分子量为 11. 8~12. 6KPa;用等电聚焦法测定其等电点为pH9. 6~10. 7;常规化学法分析结果表明其不 含糖类和磷酸基团；紫外分光光度法分析在260nm和280nm测定纯化的斑蜜蛆虫蛋白质含 量为98. 2%;分子结构属非典型、非单一的昆虫蛋白质，链内与链间不含二硫键，其三级结 构构象单元以无规卷曲为主，a螺旋与e折叠的含量比例基本相当。本专利技术制备的斑蝥 蛆虫蛋白质制剂质量稳定，结构清楚，药理明晰，疗效明显，含量可检可测，剂型多样，成本 较低，适合工业化生产。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术的技术方案作进一步的说明，但并不局限如此，凡是对 本专利技术技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神和范围，均应涵 盖在本专利技术的保护范围中。 实施例1: (1) 将1000 g斑蝥蛆虫干燥品装入常温膨化装置（200520108339. X)中，对膨化装置内 充入二氧化碳气体并加压至〇. l~5MPa，时间10~60min，然后迅速释放压力至常压，斑蜜蛆 虫被膨化成粉体； (2) 膨化粉碎后的斑蝥蛆虫粉体加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076. 6)中， 加入l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH3 ? H2O,加压至2~10MPa，形成膨 胀溶剂体系，保持温度l〇~20°C，时间10~30min，斑蝥蛆虫粉体中的蛋白质溶解，然后降压 至常压，生成斑蝥蛆虫蛋白质粗品与甲醇-NH3 ? H2O的混合液； (3) 收集含有斑蝥蛆虫蛋白质粗品的溶液，用孔径0. 5~50Mm的微孔过滤器过滤去处固 体杂质； (4) 溶液用孔径50~100nm的超滤机超滤处理，压力0. 3~0. 8MPa，温度为常温，收集含有 相应分子量的斑蝥蛆虫蛋白质超滤溶液； (5) 超滤溶液用20%乙腈溶解，C18固相萃取柱用50~100%乙腈活化预处理，加 0. 02~0. 1%三氟乙酸-水平衡，用10%乙腈溶液溶解的超滤溶液上柱，常温下用10~80%的 乙腈梯度脱洗，流速l~l〇mL/min，收集相关梯度的洗脱成分； (6) 将洗脱成分溶解在4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比)溶剂体系中，用超声驻 波液相制备色谱（200920274485. 8)分离纯化，超声波功率0. 2~3. 0KW，频率500~1000KHz， 流速50~500mL/min，紫外检测器波长260~280nm ; (7) 纯化后的斑蝥蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机在温度-30~501：、时间18~2611干燥制 备成冻干蛋白粉。 实施例2: (1) 将1000 g斑蝥蛆虫干燥品装入常温膨化装置（200520108339. X)中，对膨化装置内 充入二氧化碳气体并加压至〇. l~5MPa，时间10~60min，然后迅速释放压力至常压，斑蜜蛆 虫被膨化成粉体； (2) 膨化粉碎后的斑蝥蛆虫粉体加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076. 6)中， 加入5Kg本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种斑蝥蛆虫蛋白质在制备抗膀胱癌药品中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐华民，赵荣华，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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