一株产生磷脂酶的解淀粉芽孢杆菌诱变菌株及磷脂酶C制造技术

本发明专利技术提供了一株表达磷脂酶C的菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.8499。利用本发明专利技术所提供菌株和制备方法制备所得的磷脂酶C可以用于油脂精炼，脱胶效果良好，可以广泛应用于油脂精炼、添加剂、医药等领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于酶法脱胶领域，具体说是一株产生磷脂酶的解淀粉芽孢杆菌诱变菌株。
技术介绍
磷脂酶(Phospholipase, PL)是生物体内存在的能水解甘油磷脂的酶,水解产物为各种磷脂酸和氨基醇，如胆胺、胆碱、丝氨酸、乙醇胺等。根据磷脂酶水解甘油磷脂的位点(Sehmiel DH, Miller VL.Bacterial Phospholipases and Pathogenesis.Microbesand Infect1n, 1999,1:1103-1112)不同，可将憐脂酶分为憐脂酶 A (phospholipase A,PLA)、憐脂酶 B(Phospholipase B, PLB)、憐脂酶 C(Phospholipase C, PLC)和憐脂酶 D(Phospholipase D,PLD),如图1所示。磷脂酶C作用于3位磷酸酯键,产物为甘油二酯、磷酸胆碱或磷酸乙醇胺等。磷脂酶可广泛应用于油脂精练、磷脂改性、饲料改良剂、食品工业和医药等方面。脱胶是植物油精炼过程中的一个重要环节，对提高油的品质至关重要，脱胶主要是脱除磷月旨，脱胶若不彻底，会影响油品的深加工和油品的稳定性，减低油品货架期。酶法脱胶可以克服传统脱胶方法的胶脱除率低，同时中性油损失高等的问题。而在酶法脱胶工艺中，现有文献多报道磷脂酶PLA用于植物油脱胶。磷脂酶PLA (包括PLAl和PLA2)，脱胶后可产生极性溶血磷脂和极性脂肪酸，PLA脱胶工艺仅仅损失油中总的磷脂分子，来减少精炼损耗。而磷脂酶PLC酶通过选择性水解磷酸酯官能团与磷脂反应，生成甘油二酯(DAG)和磷脂酸基团，甘油二酯不需要被除去，所以PLC脱胶工艺通过保留原始的磷脂分子而仅去除磷酸酯官能团来减少精炼损耗，不存在PLA脱胶工艺中产生的能提高脱胶油酸价的极性脂肪酸的问题，PLC用于脱胶优势明显好于PLA。使用PLC进行脱胶，既可以使用PLC酶，也可以直接使用磷脂酶C产生菌株的发酵液。直接使用高酶活的发酵液，可免除繁杂的纯化步骤，提高酶的利用率，大幅降低生产成本。但现有磷脂酶C产生菌株，大多为致病性菌株，因此无法直接使用现有的磷脂酶C产生菌株的发酵液直接对油脂进行脱胶。因此，寻找磷脂酶C酶活高的GRAS (美国FDA评价食品添加剂的安全性指标)菌成为解决该问题的一个关键因素。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于，提供一种表达磷脂酶C的菌株。本专利技术提供的分离的表达磷脂酶C的菌株，命名为WBRD00091-D，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC N0.8499。本专利技术还有一个目的在于，提供一种生产磷脂酶C的方法。本专利技术提供的生产磷脂酶C的方法包括:培养前述的菌株以使所述菌株或细胞生产磷脂酶C，收获磷脂酶C。在本专利技术的一个优选实施例中，所述培养为在适宜所述菌株生长和/或适宜所述菌株表达磷脂酶C的条件下培养所述菌株，优选的，所述培养为在适宜所述菌株生长的条件下培养所述菌株，以增加所述菌株数量，然后再于适宜所述菌株表达磷脂酶C的条件下培养所述菌株，以表达所述磷脂酶C。在本专利技术的一个优选实施例中，所述培养为在15°C -55°c、50-300rpm培养所述菌株 5-72h。 在本专利技术的一个优选实施例中，所述收获包括分离和收集含有分泌或释放到胞外的磷脂酶C的培养物上清液，由此获得含有磷脂酶C的磷脂酶C酶液；优选地，所述方法还包括对所述磷脂酶C酶液进行浓缩。本专利技术还有一个目的在于，提供一种磷脂酶C。本专利技术提供的磷脂酶C为用前述方法制得。本专利技术还有一个目的在于，提供一种磷脂酶C酶液。本专利技术提供的磷脂酶C酶液为用前述方法制得。本专利技术还有一个目的在于，提供一种脱胶的方法。本专利技术提供的脱胶的方法为使用前述的磷脂酶C或磷脂酶C酶液进行脱胶，优选的，所述脱胶为油脂脱胶。本专利技术还有一个目的在于，提供前述的菌株或磷脂酶C或磷脂酶C酶液用于脱胶的用途，优选的，所述脱胶为油脂脱胶。本专利技术还有一个目的在于，提供前述的菌株或磷脂酶C或磷脂酶C酶液用于磷脂改性、食品添加剂、饲料改良剂和医药工业的用途。本专利技术的产磷脂酶C的细菌-解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)WBRD00091-D及使用该菌株获得的酶液和磷脂酶C可以用于油脂精炼，脱胶效果良好，由于解淀粉芽孢杆菌是GRAS菌株，因此，可以直接用于食品工业，安全可靠，例如可以安全方便的用于油脂精炼。同样解淀粉芽孢杆菌来源的磷脂酶C可以安全的用于磷脂改性、食品添加剂、饲料改良剂和医药工业等方面。【附图说明】图1是几种磷脂酶的酶切位点示意图。图2是解淀粉芽孢杆菌磷脂酶C处理磷脂酰胆碱后的TLC检测结果图，其中，泳道I为解淀粉芽孢杆菌PLC水解磷脂酰胆碱(PC)的样品；泳道2为1，2 二油酸甘油酯；泳道3为1，3 二油酸甘油酯；泳道4为三油酸甘油酯,泳道5为磷脂酰胆碱。图3是解淀粉芽孢杆菌磷脂酶C最适温度曲线。图4是解淀粉芽孢杆菌磷脂酶C最适pH值曲线。图5是解淀粉芽孢杆菌磷脂酶C温度稳定性曲线。图6是解淀粉芽孢杆菌磷脂酶C的pH稳定性曲线图7是金属离子、EDTA等对解淀粉芽孢杆菌磷脂酶C活性的影响曲线该菌株已于2013年11月29日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)”(北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号是CGMCC N0.8499，分类命名为:解淀粉芽孢杆菌Bacillusamyloliquefaciens。【具体实施方式】以下结合具体实施例，对本专利技术作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而非用于限定本专利技术的范围。在本专利技术中，如果没有特别的说明，百分数(％ )或者份都指相对于组合物的重量百分数或者重量份。 在本专利技术中，如果没有特别的说明，所涉及的各组分或其优选组分可以相互组合形成新的技术方案。在本专利技术中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有实施方式以及优选实施方式可以相互组合形成新的技术方案。在本专利技术中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有技术特征以及优选特征可以相互组合形成新的技术方案。在本专利技术中，如果没有相反的说明，组合物中各组分的含量之和为100%。在本专利技术中，如果没有相反的说明，组合物中各组分的份数之和可以为100重量份。在本专利技术中，除非有其他说明，数值范围“a_b”表示a到b之间的任意实数组合的缩略表示，其中a和b都是实数。例如数值范围“0-5”表示本文中已经全部列出了 “0-5”之间的全部实数，“0-5”只是这些数值组合的缩略表示。在本专利技术中，除非有其他说明，整数数值范围“a_b”表示a到b之间的任意整数组合的缩略表示，其中a和b都是整数。例如整数数值范围“1-N”表示1、2……N，其中N是整数。在本专利技术中，除非有其他说明，“其组合”表示所述各元件的多组分混合物，例如两种、三种、四种以及直到最大可能的多组分混合物。如果没有特别指出，本说明书所用的术语“一种”指“至少一种”。如果没有特别指出，本专利技术所述的百分数(包括重量百分数)的基准都是所述组合物的总重量。本文所公开的“范围”以下限和上限的形式。可以分别为一个或多个下限，和一个或多个上限。给定范围是通过选定一个下限和一个上限进行限定的。选本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的表达磷脂酶C的解淀粉芽孢杆菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.8499。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐正军，周美凤，许骏，
申请(专利权)人：丰益上海生物技术研发中心有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31