本发明专利技术公开了一株解淀粉芽孢杆菌JK6及生物肥和应用，该菌株保藏编号为CGMCC No.10658，于2015年03月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；本发明专利技术的解淀粉芽孢杆菌JK6主要用于番茄青枯病的生物防治；该解淀粉芽孢杆菌具备产铁载体、生物膜、蛋白酶、过氧化氢酶、纤维素酶和IAA特性，可有效抑制香蕉枯萎病原菌、荔枝炭疽病原菌、荔枝霜疫霉病原菌、水稻稻瘟病原菌、黄瓜枯萎病原菌等多种真菌病原菌，显著促进生菜植株的生长；K6菌株能够在土壤中成功定殖，并在土壤中表达防病功能基因yndJ、srfAB、fenD和ituC；该菌种繁殖速度快，生产工艺简单，抗逆能力强，易保存，利于工业化生产，利用该菌株制备生物肥，既可以防治土传病害又能促进植物生长，应用前景广阔。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种微生物及其应用，具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌JK6 (Bacillus amyloliquefaciens)及应用。
技术介绍
番前青枯病是由青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum)引起的一种毁灭性土 传病害，重病田发病率可高达80%以上，甚至造成绝收。目前，农业上对番茄青枯病主要依 靠化学农药防治，效果均不理想，长期大量、不合理地施用化肥和化学农药，容易导致病原 菌的耐药性、果蔬有毒化学物质残留量增加等问题。随着绿色农业的发展，逐渐转向以生物 防治为主的综合防治，筛选高效拮抗菌株是生物防治的核心。研宄表明能产生多种抗生素、 具有广谱抑菌能力的解淀粉芽孢杆菌成为生物防治的重要研宄对象。 全基因组测序快速发展以及对防病功能基因表达调控的研宄，为探明生防菌株田 间生防潜力提供了有力的技术方法。Okubara报道生防菌抗菌活性物质的合成与功能基因 有关。B. amyloliquefaciens FZB42、FMB38、AS43. 3的全基因组测序发现其均含有srfA、B、 C、D，ituA、B、C、D，fenA、B、C、D，yndj，qk等多对防病功能基因，其发酵产物中也检测到多 种抗生素，例如B. amyloliquefaciens FZB42能产surfactin、fengycin等抗生素，对尖孢 镰刀菌、水稻纹枯病、灰霉病等有抑制作用；Christopher报道的B. amyloliquefaciens AS 43. 3能产iturinA、baciIlibactin等抗生素，可以有效防治赤霉病。Abdulwareth研宄了 Bacillus strain Ami、D16单独培养以及和青枯雷尔氏菌混合培养中ituC、srfAA、bacA、 fenD等四个功能基因表达量的差异，结果表明：Bacillus strain D16和青枯雷尔氏菌混合 培养液中，四个功能基因的表达量都增高；而Bacillus strain Aml和青枯雷尔氏菌混合 培养液中，fenD的表达量下降，其余三个功能基因的表达量均增高；该结果表明Bacillus strain Aml、D16抑制青枯雷尔氏菌的效果与功能基因的表达情况密切相关。 虽然较多生防菌株已经报道含有多种防病功能基因，但在复杂的土壤环境因子中 菌株能否成功定殖并大量表达还没有深入研宄，土壤中功能基因表达量的定量检测方法尚 待研宄。本专利技术中的 B. amyloliquefaciens JK6 基因组中含有 srfAB，ituA、B、C、D，fenD， yndj等多种防病功能基因，并建立了利用RT-PCR技术研宄菌株在土壤中功能基因表达的 制备方法，结果证明施加了 JK6菌剂的盆栽土中yndj、srfAB、fenD、ituC等功能基因的拷 贝数显著高于对照组，表明JK6菌株能够在土壤中大量定殖、繁殖，并成功表达多种功能基 因，这些结果进一步确证菌株在土壤中生防潜力发挥。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于根据现有技术中上述问题，提供一种兼具防病与促生功能 的解淀粉芽孢杆菌JK6。 本专利技术的第二个目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌JK6基因组为模板进行PCR扩 增得到合成脂肽类抗生素的功能基因。 本专利技术的第三个目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌JK6的功能基因在土壤中表 达的制备方法。 本专利技术的第四个目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌JK6的发酵液。 本专利技术的第五个目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌JK6发酵液的生物肥。 本专利技术的最后一个目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌JK6及生物肥的应用。 本专利技术的第一个目的是通过以下技术方案实现上述目的： 一种解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens) JK6,简称JK6菌。该菌株于 2015年03月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，保藏 编号CGMCC No. 10658,保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研 宄所。 该JK6菌是在广州华南农业大学蔬菜基地的赤红壤中分离、纯化所得，目前已经 在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址是：北京市朝阳区 北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研宄所，邮政编码100101，其保藏编号为：CGMCC No. 10658,保藏日期为2015年03月23日。 菌株的生理生化性质如下：属革兰氏阳性菌，有芽孢；菌体为杆状，有运动性，好 氧；在牛肉膏蛋白胨培养基上培养24h后形成的菌落为圆形或不规则状，48h后菌落全部为 圆形，乳白色，直径约为1~2mm，边缘不整齐，扁平湿润，表面形成生物膜，接触酶反应、蛋 白酶反应为阳性；利用碳水化合物产酸试验：淀粉水解、水解明胶为阳性，柠檬酸盐利用和 甲基红试验为阴性。 菌株具有较强的抑制细菌和真菌病原菌的能力，经过生理生化和分子鉴定为解淀 粉芽孢杆菌，其拉丁名为：Bacillus amyloliquefaciens，菌株的16S rRNA基因序列测定结 果如SEQ ID NO: 1所示。 JK6菌的保藏方法，其保藏培养基的成分为牛肉膏3. 0g，蛋白胨5. 0g，氯化钠 5. 0g，琼脂18. 0g，蒸馏水lOOOmL，或按照此比例配制成的培养基，pH值为7. 0~7. 2。按常 规菌种保藏温度保藏。 本专利技术的第二个目的是通过下述技术方案实现的： 以上述的解淀粉芽孢杆菌JK6基因组为模板进行PCR扩增得到合成脂肽类抗生素 的功能基因； 所述的功能基因如下： l)yndj，其基因序列如 SEQ ID NO. 4 ; 2) fenD，其基因序列如 SEQ ID NO. 5 ; 3) ituC，其基因序列如 SEQID NO. 6 ; 4) ituD，其基因序列如 SEQID NO. 7 ; 5) ituB，其基因序列如 SEQID NO. 8 ; 6) ituA，其基因序列如 SEQID NO. 9 ; 7) srfAB，其基因序列如 SEQID NO. 10〇 上述功能基因，其PCR反应体系和条件如下： (1)?〇?反应体系：10\丁&9 1311打6『5 4 1^，(1阶134 4 1^，5'端引物（25口111〇1/1)2 4 1^， 3'端引物（25口111〇1/1)2 4 1^，模板0嫩2 4 1^，丁&9〇嫩聚合酶（5扔0.25 4 1^，！120 34.75 4 1^， 总体积50 μ L。 (2)?〇?反应条件：95°0预变性511^11;94°0变性308,55°0退火308,72°0延伸308， 30个循环；72°C补充延伸lOmin。 本专利技术的第三个目的是通过下述技术方案实现的： 上述解淀粉芽孢杆菌JK6的功能基因在土壤中表达的制备方法： (1)以分别含有功能基因（yndJ、srfAB、fenD、ituC)当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株解淀粉芽孢杆菌JK6，保藏编号CGMCC No.10658，于2015年03月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡燕飞，熊汉琴，李永涛，郭真真，张娅娅，江亚雄，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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