本发明专利技术涉及一株产凝乳酶的枯草芽孢杆菌。该菌株分离自奶酪中，现已保藏于中国典型培养物保藏中心（ＣＣＴＣＣ），保藏号是Ｍ２０８０２３，名称为枯草芽孢杆菌ＱＬ－２（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ ＱＬ－２）。其发酵液富含凝乳酶并具有良好的凝乳作用。具有用于凝乳酶工业生产的潜力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株产凝乳酶的枯草芽孢杆菌QL-2 (Bacillus subtilis QL-2)，该菌株分 离自奶酪中，现已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号是M208023，其发酵液 富含凝乳酶并具有良好的凝乳作用，具有用于凝乳酶工业生产的潜力。
技术介绍
干酪富含多种营养成分，容易消化吸收，又不易致肥，因此被营养学家奉为理想的食品 ，誉之为"奶黄金"。凝乳酶是干酪生产中凝固牛乳的关键性酶制剂，它是一种酸性蛋白 酶。凝乳过程可分为两步第一步是酶专一性地水解乳中K-酪蛋白多肽链的105 106位苯 丙氨酸和甲硫氨酸之间的肽键，形成稳定的副K-酪蛋白及亲水性的糖巨肽；第二步是当总 的K-酪蛋白被水解掉约85C/a寸，在Ca+存在下通过在酪蛋白胶粒间形成的化学键形成凝块 或凝固的乳，从而使变化的凝乳酶、酪蛋白胶粒发生沉淀。凝乳酶来源广泛，可从动物、植物及微生物中得到。传统的凝乳酶来源于小牛皱胃(第 4胃)中提取的皱胃酶，但随着世界奶酪产业不断发展壮大，每年宰杀大量小牛以获得凝 乳酶的方法显然是与现代工业发展极不协调的；植物性凝乳酶可从木瓜、菠萝、无花果属植 物、红花等植物中提取，但其蛋白水解能力强，并且受时间、地域、生长周期长等条件限 制，难以发展；目前发现有40余种微生物可生产一定活力的凝乳酶，这些微生物主要是放线 菌、细菌和真菌等。自1964年，ArimaW发现毛霉属微小毛霉(Mucor pusillus)可以产生 高活力凝乳酶后，许多科学家对其展开了大量研究。中科院微生物所的钱世均等人从19株 毛霉中筛选出一株微小毛霉菌株，完成了菌种培养、酶提取和纯化，发现经纯化后，纯酶的 凝乳活力与蛋白水解活力的比值大大提高，且完全没有纤维素活性。并对其产生的凝乳性蛋 白酶进行了纯化和酶学性质的研究。郭光远等人在对云南不同地区放线菌区及资源的考 察过程中，对所分离到的2502株放线菌、真菌、细菌进行了凝乳酶产生菌的筛选，结果发现 放线菌中链霉菌属(Str印tomyces)、小单胞菌属(Micromonospora)、马杜拉放线菌属( Actinomadura)等和9. 8%的真菌及8. 8%细菌中都有一定的产酶活力。目前在国际上的微生 物凝乳酶主要是由米黑毛霉生产的。本专利技术中所涉及的一株枯草芽孢杆菌QL-2，其发酵液富含凝乳酶，且凝乳活性较高，而且生长周期短，受气候、地域、时间限制小，用其生产凝乳酶成本较低、酶提取方便、经济 效益高较以前的产凝乳酶微生物具有较大的优势。枯草芽孢杆菌是常见的非致病菌，利用其 发酵所产的凝乳酶适合工业化生产奶酪。 参考文献 杜琨，张亚宁.干酪的营养价值及研究动态.中国食物与营养，2005， 10: 45-46. Satyendra K Garg， Bhavdish N johri. Food Reviews International. 1994. 10(3): 313-355.井乐罡.凝乳酶及其在干酪生产中的应用.中国畜产与食品，1997， 2: 78-79. 郭本恒.乳品化学.北京中国轻工业出版社，2001.刘振民，刘辉等.酒药中凝乳酶菌株筛选及产酶条件研究.食品与发酵工业，2000， 27 (5) : 8-lite] 张红梅，刘钟滨.凝乳酶的研究进展.同济大学学报(医学版)，2004， 25 (3):254-257.周俊清，林亲录，赵谋明.微生物源凝乳酶的研究进展.中国食品添加剂，2004， 2:6-9. Arima，K，and Iwasaki，S. Milk Coagulating Enzyme "Microbial Rennet" and Method of Preparation Thereof. United Stated Paptent， 3， 151， 039.钱世均，张纯青，矫庆华等.微小毛霉凝乳酶的纯化和性质.微生物学报，1989 :272-277.郭光远，姜成林，马俊.微生物凝乳酶的研究I.菌株的筛选、发酵、制备及毒性 .微生物学通报，1988， 15 (5) : 207-210. G A Tucker, L J Wood (英)著.李雁群，肖功年译.酶在食品加工中的应用. 中国轻工业出版社，2001.
技术实现思路
本专利技术所涉及的产凝乳酶细菌为枯草芽孢杆菌QL-2 (Bacillus subtilis QL-2)，是由 奶酪中分离的菌株。现已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号M208023。 本专利技术所述的产凝乳酶的枯草芽孢杆菌QL-2的培养方法如下液体培养把菌株接种于NA (牛肉膏3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g、酵母浸膏lg、蒸馏水lOOOml、 pH7. 0)液体培养基中，在28-3(TC温度下，转速120r/m的摇床上培养28-32h;固体培养NA (牛肉膏3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g、酵母浸膏lg、蒸馏水1000ml、 PH7.0)液体培养基中加1.0-1.5%的琼脂粉，制成平板，接种菌株，于28-3(TC培养箱中培 养2天。本专利技术所述的产凝乳酶的枯草芽孢杆菌QL-2的特征如下(1) .形态特征菌体为杆状，周生鞭毛；少数产芽孢，中生，椭圆型，孢囊膨大；革兰氏染色阳性。(2) .培养特征该菌株在NA培养基上3(TC培养2天，菌落乳白色，圆形，边缘整齐，中央隆起如馒头状 ，光滑，不易挑起，不产生可溶性色素，有异味。(3) .菌株的生化特征接触酶阳性，兼性好氧生长，VP反应阳性，VP液中产酸PH值小于6.0，水解酪蛋白，蔗 糖产生还原糖，产生果聚糖，水解淀粉、明胶，不水解酪氨酸。(4) .菌株的生理特性可利用葡萄糖产酸不产气，可利用蔗糖、麦芽糖、肌醇、甘露醇、可溶性淀粉、乙酸钠 ，不利用半乳糖。最适生长PH在8 9之间，10%的氯化钠中可生长，最适生长温度为37'C。(5) .遗传学特征 扩增与测序引物27f:5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG -3' 1492r:5'-CGG TTA CCT TGT TAC GAC TT-3' 517f:5'- CCA GCA GCC GCG GTA AT-3'提取QL-2菌株的总DNA，用引物27f和1492r进行PC財广增该菌株的16S rDNA基因，用引物 27f，1492r， 517f，进行测序，该菌株的16S rDNA基因序列为:<formula>formula see original document page 6</formula>1381 ACCCCGAAGTTTCCGGTTGCAAGG (6).枯草芽孢杆菌QL-2的发酵液富含凝乳酶并具有良好的凝乳作用。具有用于凝乳 酶工业生产的潜力。具体实施例方式实施例l从奶酪中用稀释平板法分离枯草芽孢杆菌QL-2:(1) 制备奶酪稀释液称取奶酪5g，迅速倒入带玻璃珠的45ml无菌水中，摇床上振荡 20min，静置使澄清，即成为10 —^勺悬液。无菌操作吸取其上清液O. 5ml加入4. 5ml无菌水中 即为10—2稀释液。如此重复，用无菌水稀释为1(T3、 10—4、 10—5、 10—6、 10^共7个浓度。(2) 培养各稀释度加入冷至45 5(TC的灭菌的酪蛋白水解平板(本文档来自技高网...
【技术保护点】
本专利技术为一株产凝乳酶的枯草芽孢杆菌ＱＬ－２（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＱＬ－２），该菌株分离自奶酪中，其发酵液具有良好的凝乳作用，现已保藏于中国典型培养物保藏中心（ＣＣＴＣＣ），保藏号为Ｍ２０８０２３；。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李红玉，刘河涛，李洋，
申请(专利权)人：李红玉，兰州大学，
类型：发明
国别省市：62[中国|甘肃]
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