一种分离纯化锁阳黄酮的方法技术

本发明专利技术的目的在于提供一种利用大孔吸附树脂混合模拟移动床分离纯化高纯度锁阳总黄酮的方法，该工艺所得锁阳黄酮的提取率大于70％，纯度均达到80％以上，而且大孔吸附树脂的再生性能好，可以再生重复使用，生产过程中使用绿色溶剂，成本低、效率高、环境友好；工艺路线简单，可为药物、保健品或食品等提供高纯度的锁阳黄酮，便于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术的目的在于提供一种利用大孔吸附树脂混合模拟移动床分离纯化高纯度锁阳总黄酮的方法，该工艺所得锁阳黄酮的提取率大于70％，纯度均达到80％以上，而且大孔吸附树脂的再生性能好，可以再生重复使用，生产过程中使用绿色溶剂，成本低、效率高、环境友好；工艺路线简单，可为药物、保健品或食品等提供高纯度的锁阳黄酮，便于工业化生产。【专利说明】
本专利技术属于天然产物分离纯化
，具体涉及一种锁阳黄酮的分离方法。
技术介绍
锁阳为锁阳科（Cynomoraceae)植物锁阳（Cynomorium Songaricum Rupr.)的干 燥肉质茎，又名"不老药"、"金不换"、"沙漠人参"等。植物锁阳主要分布于内蒙古、宁夏、新 疆、甘肃、青海等西北地区。锁阳味甘、性温，具有补肾、助阳、益精、润肠之功效，中医常用于 治疗肾阳不足、精血亏虚、腰膝萎软、阳瘘滑精、肠燥便秘等症。现代药理学研宄表明，锁阳 具有提高机体免疫力、清除自由基、抑制人体免疫缺陷病毒（HIV)、抑制血小板聚集等多种 药理活性。 锁阳中含有丰富的黄酮类化合物，黄酮类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗癌、 抗菌等多种生理活性及药理作用，且无毒无害，对治疗和预防肿瘤、心血管病等疾病的有 显著的效果，对延缓人体的衰老有重要意义，因此锁阳黄酮成为近年来研宄、开发和利用的 热点。据文献调研，目前关于锁阳黄酮的研宄主要集中于锁阳黄酮的提取方法，而对于锁阳 黄酮分离纯化工艺的系统研宄较少。目前采用的锁阳黄酮分离纯化工艺普遍存在提取率 低、锁阳总黄酮的含量低、不易工业化等缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种锁阳黄酮的分离方法，能够高效的从锁阳中分离锁阳 黄酮，从而弥补现有技术的不足。 申请人:在研宄中发现，锁阳中除了锁阳黄酮外，还有大量的淀粉、鞣质和蛋白质 等。这些成分一方面影响在提取过程中锁阳黄酮的溶出，从而导致锁阳黄酮提取率的降低； 另一方面，鞣质等水溶性杂质大量溶于提取液中，导致锁阳黄酮分离纯化困难，纯度降低。 本专利技术首先利用混合酶将锁阳的细胞壁、淀粉和蛋白类化合物水解，使锁阳黄酮充分分散 在提取溶剂体系内；然后利用石灰水增加黄酮类物质的溶解性，使一些鞣质和水溶性杂质 生成钙盐沉淀；最后将混合大孔吸附树脂（MR)模拟移动床应用于锁阳黄酮的分离。 本专利技术的方法，包括有如下的步骤： 1)将锁阳粉碎，将纤维素酶和α -淀粉酶的复合酶水溶液加入到粉碎的锁阳中进 行提取；所述的复合酶水溶液的PH值为5. 0,提取温度为55°C ; 2)向步骤1)的提取液中加入生石灰，至提取液有的pH值为11，在90?95°C提 取2h，然后调节pH为8?9,放置4h后弃去沉淀，对上清液减压浓缩后，用盐酸调节pH为 5?7 ; 3)向步骤2)的pH为5?7的上清液中加入乙醇进行沉淀，静置24h后过滤，弃去 沉淀，得到上清液； 4)将步骤3)的上清液减压浓缩，然后加入到混合MR模拟移动床进行吸附，流速 为5?10BV/h (柱体积，简称BV)，弃去吸附残液；吸附结束后，用10?40BV的水进行清洗， 流速为5?10BV/h，弃去清洗液； 5)用10?40BV的洗脱液进行洗脱，流速为5?10BV/h，收集洗脱液，将洗脱液减 压浓缩、干燥后得到锁阳黄酮产品。 上述步骤1)中纤维素酶用量为5?15U/g，α -淀粉酶用量为50?100U/g，以锁 阳的量作为基准； 上述步骤4)中混合MAR模拟移动床中包含有2?4根MAR柱；每根MAR柱之间即 可串联也可并联，其中至少有2根MAR柱串联，MAR柱径高比为1:4?1:12。所用MAR柱使 用XDA-8、AB-8、D101、LSA-21中的一种或几种以不同比例混合的树脂； 为了获得更好的分离效果，上述步骤4)中的大孔吸附树脂为混合树脂，其中 XDA-8 :AB-8 :LSA-21 的质量比为 5:1:1 ; 上述步骤4)中的洗脱液为70?80 %的乙醇； 上述步骤5)的干燥方法为喷雾干燥、低温冷冻干燥、微波干燥、真空干燥、鼓风干 燥中的一种或几种。 本专利技术的的方法所得的锁阳黄酮的提取率大于90%，纯度均达到90%以上，而且 在生产过程中使用绿色溶剂，成本低、效率高、环境友好、工艺路线简单，可为药物、保健品 或食品等提供高纯度的锁阳黄酮，便于锁阳类产品的工业化生产 【具体实施方式】 本专利技术方法对锁阳黄酮的提取率大于90%，提取纯化的锁阳黄酮纯度均达到 90%以上，可用作提高免疫力、缓解体力疲劳、抗氧化、抗衰老、提高缺氧耐受力、祛痤疮、祛 黄褐斑、改善皮肤水份类药物、保健食品原料或新食品原料。 下面对本专利技术所涉及的锁阳总黄酮的检测方法记录如下： A. 1方法提要 利用紫外-可见光谱法测定锁阳黄酮提取物中总黄酮的含量，采用 Al (NO3) 3-NaN02-Na0H络合体系进行显色。锁阳黄酮提取物以Al (NO3) 3-NaN02-Na0H体系显 色后于500nm处可测得总黄酮的吸光度。A. 2仪器 A. 2. 1紫外-可见分光光度计 A. 2. 2分析天平（分度值0· OOOlg) A. 3 试剂 A. 3. 1三氯化铝、亚硝酸钠、氢氧化钠：分析纯 A. 3. 2水：去离子水或二次蒸馏水 A. 3. 3乙醇：分析纯 A. 3. 4芦丁对照品 A. 4芦丁对照品溶液的制备 取芦丁对照品约20mg，精密称定，置于IOOmL容量瓶中，加60%乙醇适量，超声处 理使之溶解，放置至室温，加60%乙醇至刻度，摇匀，即得芦丁对照品储备液。 A. 5标准曲线的制作 分别精密量取芦丁对照品储备液 0· 5, L 0, L 5, 2. 0, 2. 5, 3. 0, 3. 5, 4. 0, 4. 5, 5. 0， 5. 5,6. Oml置于25mL容量瓶中，用30%乙醇补足至6ml，加5% NaNO2Iml,静置6min，然后 加入10% AlNO3Iml,静置6min，最后加入4% NaOH 10ml，30 %乙醇定容后静置15min，并在 500nm下测定吸光度，以芦丁对照品溶液浓度（x，mg/mL)为横坐标，吸光度（y)为纵坐标绘 制标准曲线，得线性回归方程y = klx+bl。 A. 6供试品溶液的制备 取本品约100mg，精密称定，置25ml容量瓶中，加60%乙醇适量，超声处理使之溶 解，放置至室温，加60%乙醇至25ml，摇勾，即得置于25ml供试品储备液。 A. 7测定方法 精密量取2mL供试品储备液，置25ml容量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自 "用30 %乙醇补足至6ml "起依法测定，吸光度记为Al。 A. 8锁阳黄酮含量的计算 具体公式如下： 【权利要求】1. ，其特征在于，所述的方法包括有如下的步骤： 1) 将锁阳粉碎，将纤维素酶和a-淀粉酶的复合酶水溶液加入到粉碎的锁阳中进行提 取；所述的复合酶水溶液的pH值为5. 0,提取温度为55°C ; 2) 向步骤1)的提取液中加入生石灰，至提取液有的pH值为11，在90?95°C提取本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离纯化锁阳黄酮的方法，其特征在于，所述的方法包括有如下的步骤：1)将锁阳粉碎，将纤维素酶和α‑淀粉酶的复合酶水溶液加入到粉碎的锁阳中进行提取；所述的复合酶水溶液的pH值为5.0，提取温度为55℃；2)向步骤1)的提取液中加入生石灰，至提取液有的pH值为11，在90～95℃提取2h，然后调节pH为8～9，放置4h后弃去沉淀，对上清液减压浓缩后，用盐酸调节pH为5～7；3)向步骤2)的pH为5～7的上清液中加入乙醇进行沉淀，静置24h后过滤，弃去沉淀，得到上清液；4)将步骤3)的上清液减压浓缩，然后加入到混合MAR模拟移动床进行吸附，流速为5～10BV/h，弃去吸附残液；吸附结束后，用10～40BV的水进行清洗，流速为5～10BV/h，弃去清洗液；5)用10～40BV的洗脱液进行洗脱，流速为5～10BV/h，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩、干燥后得到锁阳黄酮产品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邸多隆，裴栋，
申请(专利权)人：阿拉善盟万铭生物制品有限公司，中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15