人类胎儿生长受限相关的血清微小核糖核酸标志物及其应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程及临床医学领域，公开了人类胎儿生长受限相关的血清微小核糖核酸标志物及其应用。该标志物选自hsa-miR-212、hsa-miR-597和hsa-let-7d中的多种。该标志物胎儿生长受限具有特异性和敏感性，可用于制备胎儿生长受限诊断或监测试剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程及临床医学领域，涉及与人类胎儿生长受限相关的血清微小核糖核酸(microRNA, miRNA)标志物及其应用。
技术介绍
胎儿生长受限(fetal growth restriction, FGR)是指胎儿出生体重低于同孕龄平均体重的两个标准差，或低于同龄正常体重的第10百分位数。FGR不仅直接影响胎儿及新生儿，也会改变成 人对疾病的易感性。FGR会引起新生儿呼吸困难、红细胞增多症、低血糖、脑室出血、低温等并发症。Barker等对1924年到1944年在赫尔辛基大学附属医院出生的13517例男性和女性进行纵向研究发现，这些人群出生时伴有低体重，童年时体重加速增长，使得成年后冠心病、II型糖尿病、高血压等心血管疾病和代谢性疾病的发病率增加。FGR在我国发生率为6.39%，是围生儿死亡的第二大原因。死亡率为正常发育儿的6 10倍。在死亡中约占围生儿的30%，产时宫内缺氧围生儿中50%为FGR。FGR的病因迄今尚未完全阐明，其发生与孕妇、胎儿因素、胎盘、环境等多方面的因素密切相关。明确FGR的病因对早期诊断和治疗有重要的作用。30% 40%的FGR发生于孕母有各种疾患及妊娠合并症者，如子痫前期、妊娠合并高血压或高血压合并妊娠、妊娠期糖尿病等，此外母体血管疾病和血栓形成会导致子宫胎盘灌注不足而引起胎儿生长受限。10%由于多胎，多胎加重了子宫胎盘动脉的压力。10%由于胎儿问题一感染或畸形，约有40%发生于正常妊娠，其发病原因迄今未阐明，称为“特发性胎儿生长受限”。有时即便孕妇和胎儿均无异常因素，胎盘及其附属物的变化亦可导致FGR。胎盘滋养细胞参与激活代谢、产生激素、吸收营养和排除代谢废物等，广泛的证据表明在FGR的发生中胎盘功能不足。导致胎儿生长受限的最主要最直接的原因是胎盘发育异常及循环功能障碍，造成胎儿营养物质供给和利用障碍。研究发现不同的胎盘因素参与疾病的发生，如解剖、血管、染色体和/或形态异常等。FGR组与正常对照组相比，胎盘绒毛数目、绒毛血管数目、胎盘体重和胎儿-胎盘重量比均明显下降。增厚的绒毛滋养细胞基底膜、绒毛梗死的发病率、血栓形成和血肿的存在和发生在FGR组中较常见。子宫-胎盘血管、胎儿-胎盘血管重构异常也发生于FGR。绒毛血管的生成障碍导致胎儿与母体间血运减少、营养物质的输送能力下降。同时绒毛间隙纤维素沉积可导致绒毛间血流减少，合体滋养细胞微绒毛膜表面的Na(+)/K(+)ATPase活性明显降低，导致Na(+)_偶联的转运功能削弱，母胎间的交换面积和效率均降低。已知许多生长因子，包括血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PIGF)、转化生长因子β (TGF β )、成纤维细胞生长因子(FGF)等在绒毛细胞内产生，经其受体在局部起作用，控制胎盘血管的生成、迁移、入侵等能力。此外，ΜΜΡ-9是滋养层细胞分泌的有效水解酶，选择性水解子宫内膜成分及基底膜，在胎盘的植入中发挥重要作用，其分泌的减少使滋养细胞对子宫肌层的浸润和螺旋动脉的形成发生变化，限制胎盘血供，使绒毛间隙含氧量减少，造成绒毛细胞缺氧。但是FGR的病因迄今尚未完全阐明。为此我们迫切需要寻找本病特异标志物与治疗靶点，从而尽早启动预防与干预措施，对减少本病的发生、改善母儿预后具有极其重要的意义！微小核糖核酸(microRNA,即miRNA)是近年刚刚兴起的研究热点，它是一类长约19-23个核苷酸的单链RNA分子，多位于基因组非编码区，进化上高度保守，可在转录后水平对基因表达进行调节，并与动物的许多正常生理活动，同时也与许多疾病的发生及发展存在着紧密的联系。小分子非编码RNAs不编码合成蛋白，但可以影响蛋白合成过程。第一个ncRNA于1965年在面包酵母中被发现，但是它的生理功能直到1993年才被认识，在线虫体内时序性调控生长发育，所以叫做“小时空RNA”。直到20世纪初，才被称为miRNA，它在细胞内的RNA干扰机制开始被认识。miRNA是一类真核生物内源性小分子单链RNA，长度通常为21 22个核苷酸，影响基因表达、细胞周期和个体发育等多种功能，大约30%的人类基因表达可能受miRNAs调控。通过与靶mRNA特异性的碱基配对引起靶mRNA的降解或者抑制其翻译，从而对基因转录后表达进行调控。最近的十几年，在人类中已发现了 1000多种miRNAs，并提出它们在细胞增殖、分化、代谢和凋亡中发挥着重要的调节作用。在同一个细胞中，多种miRNAs的表达使得细胞处在一种同估的miRNA环境中，这种环境调控着成千上万的编码基因的mRNA表达水平，从而使各种蛋白的表达处在一个适度的水平。这些小分子RNA是从60 200nt的具有发夹状结构的前体中被切割出来而成熟，在动物细胞中，miRNA的转录初产物(pr1-miRNA)很快被一种核糖核酸酶III Drosha加工成miRNA前体(pre-miRNA)，然后由细胞核转运至细胞质中，经另一种核糖核酸酶III Dicer识别剪切为成熟miRNA。随后，这个单链与RNA诱导沉默复合体(RISC)结合，RNA通过RISC直接结合到mRNAs的3’ UTR, mRNA和miRNA之间部分或完全互补的碱基配对。miRNA诱发的基因沉默现象是通过直接切割或阻碍基因的转录。多数的miRNA与一个特定的mRNA不是完全互补的，因此相同的miRNA可以同时调控多个基因。另外，不同的miRNAs也可以靶向调控相同的mRNA，并且有相似的生物学功能。目前，miRNA与肿瘤的关系已成为研究的重点，已发现若干miRNA通过负调控基因的表达与慢性淋巴细胞性白血病、肺癌、乳腺癌、结肠癌高度相关。然而，血清miRNA与胎儿生长受限等的相互关系尚未见报道。最新的研究成果发现血清中存在上百种的miRNA，性质稳定、含量丰富、易于定量检测，且存在显著的疾病特异性，在肺癌、结肠癌中已经证实血清miRNA的表达谱可作为早期诊断的潜在生物标志物。这一发现令人振奋，血清miRNA作为一类非编码调节性的小分子RNA有可能取代传统的特异蛋白为代表的生物标志物，开拓了生物标志物的新境界。该研究迅速引起国际媒体的广泛关注，路透社、合众社、《科学的美国人》、美国《技术评论》等都对该研究成果进行了专门报道，《Nature》杂志也在其网站首页的一最新研究进展||专栏中展示了这一最新研究进展。然而血清中miRNA在胎儿生长受限早期诊断监测中的应用还未得到相应的关注，若能发现稳定的与胎儿生长受限发病相关的特异血清miRNA作为生物标志物，并研发相应疾病的诊断、监测试剂盒，不仅在该领域处于国际领先地位，可创造令人瞩目的经济效益，对我国胎儿生长受限的防治也将是一次强有力的推动。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供与人类胎儿生长受限发生相关的血清microRNA标志物。本专利技术的另一个目的是提供上述血清microRNA标志物的引物。本专利技术还有一个目的是提供上述血清microRNA标志物或其引物的应用。本专利技术再有一个目的是提供含有上述血清microRNA标志物或其引物的用于人类胎儿生长受限诊断或监测的试剂盒。本专利技术的目的是通过下列技术措施实现的:与人类胎儿生长受限相关的血清microRNA标志物，选自hsa-miR-212、hsa-miR-59本文档来自技高网...

【技术保护点】
人类胎儿生长受限相关的血清microRNA标志物，选自hsa?miR?212、hsa?miR?597和hsa?let?7d中的多种。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：夏彦恺，吴炜，王心如，许倩，江华，黄璐，汤秋勤，吕述彦，傅广波，
申请(专利权)人：夏彦恺，
类型：发明
国别省市：