一种猪伪狂犬病毒的高通量药物筛选的方法技术

本发明专利技术公开了一种猪伪狂犬病毒的高通量药物筛选的方法，其步骤：（1）在白色底透96孔细胞板中接种IBRS-2细胞，在37°C5%CO2温箱中培养；（2）弃去生长液，加入维持液，加入待筛选化合物，依次进行倍比稀释，混合均匀，在每个孔中加入猪伪狂犬病毒鄂A株，在同一块96孔板上，设置未加入病毒和化合物的对照、加入病毒未加化合物的对照，化合物溶解于二甲亚砜中；（3）在37°C5%CO2温箱中继续培养，加入Celltiterglo试剂，在高通量化学发光检测仪中检测，计算化合物的抑制率；（4）具有较高抑制率的化合物作为抗伪狂犬病毒的潜在药物。方法简便、快速、成本低、便于高通量操作，能够针对猪伪狂犬病毒在细胞中增殖的全部过程进行筛选，具有较高的成功率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及动物传染病防控和动物药物筛选
更具体涉及，在药物抑制猪伪狂犬病毒导致的细胞病变基础上，通过测定细胞活力，建立的针对猪伪狂犬病毒的体外药物筛选方法。
技术介绍
猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)所引起的一种以发热、奇痒和脑脊髓炎为主要症状的急性、接触性和高度致死性传染病。该病能引起妊娠母猪流产、产死胎和木乃伊胎等，公猪表现睾丸炎、睾丸肿胀萎缩失去种用能力，仔猪表现高热、呼吸困难、流涎、呕吐、腹泻、食欲废绝以及抑郁震颤等症状，继而出现间歇性抽搐、昏迷以致衰竭死亡。伪狂犬病是引起我国猪繁殖疾病的主要原因，在养猪密集的地方可爆发流行。2周龄以内仔猪的发病率和死亡率几乎高达100%，断奶仔猪发病率为20% 40%，死亡率为10% 20%。成年猪感染后，常常继发细菌和病毒感染，加重病程和增加死亡率。猪伪狂犬病已给我国的养猪业造成了严重的经济损失，开发猪伪狂犬病的预防和治疗产品具有重要的经济价值。当前对于猪伪狂犬病的预防主要依赖于疫苗，且目前已成功开发并产业化了多种疫苗。用伪狂犬病毒强毒株经灭活、乳化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪伪狂犬病毒的高通量药物筛选的方法，其步骤是：???（1）在白色底透96孔细胞板中接种IBRS?2细胞，细胞的接种密度为5000个/孔，在37°C?5%?CO2温箱中培养10?14小时；???（2）弃去生长液，在第一孔加入98μL维持液：DMEM中含有1%v/v牛血清和1%v/v双抗，其它孔加入50μL维持液，再在第一孔加入2μL待筛选化合物，依次进行倍比稀释，混合均匀后，在每个孔中均加入50μL?0.02MOI的猪伪狂犬病毒鄂A株，在同一块96孔板上，设置未加入病毒和化合物的对照、加入病毒未加化合物的对照，化合物均是溶解于二甲亚砜中，在所有对照组中加入1%v/vDMSO；???（3）在3...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宋云峰，周锐，王翠，陈焕春，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：