本发明专利技术属于药学药物筛选领域，涉及一种致敏动物的脾细胞模型及其用途。本发明专利技术采用空肠弯曲菌CJ-S131诱导小鼠产生SLE样症状，无菌条件下，制备其脾脏单细胞悬液；在培养板中加入空肠弯曲菌CJ-S131，再次刺激已致敏的脾细胞，制得致敏动物的脾细胞模型，并采用具有抗SLE作用的药物，验证该模型在制备防治系统性红斑狼疮药物中的用途。本发明专利技术还提供了采用制得的脾细胞模型建立离体筛选抗SLE相关药物的方法，实现抗SLE药物的高通量筛选；该离体筛选抗SLE相关药物的方法弥补了现有筛选抗SLE药物不能高通量进行的缺陷，同时显著地缩短了普通SLE模型评价的周期。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于药学药物筛选领域，涉及一种致敏动物的脾细胞模型及其用途。本专利技术采用空肠弯曲菌CJ-S131诱导小鼠产生SLE样症状，无菌条件下，制备其脾脏单细胞悬液；在培养板中加入空肠弯曲菌CJ-S131，再次刺激已致敏的脾细胞，制得致敏动物的脾细胞模型，并采用具有抗SLE作用的药物，验证该模型在制备防治系统性红斑狼疮药物中的用途。本专利技术还提供了采用制得的脾细胞模型建立离体筛选抗SLE相关药物的方法，实现抗SLE药物的高通量筛选；该离体筛选抗SLE相关药物的方法弥补了现有筛选抗SLE药物不能高通量进行的缺陷，同时显著地缩短了普通SLE模型评价的周期。【专利说明】
本专利技术属于药学药物筛选领域，涉及细胞模型及其用途，具体涉及一种致敏动物 的脾细胞模型及其在药物筛选中的用途；所述模型可用于建立离体药物筛选，尤其作为筛 选防治系统性红斑狼疮（SLE)药物的高通量筛选平台。
技术介绍
已知系统性红斑狼疮（SLE)是一种难治的、反复发作、致死率高的严重自身免疫 病；虽然所述SLE的病因和发病机制尚未完全阐明，但患者均存在免疫调节功能严重失 调，机体高水平的抗自身抗体和低水平的单核巨噬细胞清除能力，使免疫复合物增多，并广 泛性激活补体系统，造成机体的炎症扩大和组织器官损伤，同时使机体对自身抗原的识别 长期存在，造成病情的迁延不愈。 有研究报道，针对SLE患者能检测到多种自身抗体的产生，如抗核抗体，抗双链 DNA抗体(抗dsDNA抗体)，抗组蛋白抗体等；且由于其免疫调节障碍，能引起丙种球蛋白升 高，以及相关细胞因子分泌的改变，如干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10 (IL-10)和白 细胞介素-17 (IL-17)等的水平升高。 目前，国内外抗SLE药物研究中采用的动物模型有自发性的SLE模型(如MRL/ lpr)和空肠弯曲菌诱导的实验性模型等，上述模型证实了环境因素对免疫耐受的维持和遗 传因素起着同样至关重要的作用；但其中所述动物模型的实验周期长，不能实现药物高通 量筛选；由于空肠弯曲菌CJ-S131的43KD的热休克蛋白和LPS均具有与机体自身抗原相 似的抗原表位(分子模拟现象)，细菌成分作为交叉抗原进入体内，产生应激，引起一系列免 疫反应，T细胞活化后通过旁路途径辅助B细胞多克隆激活，引起自身抗体的产生，使得空 肠弯曲菌可诱导小鼠形成具有典型的SLE样症状，该模型为目前研究SLE病理机制及寻 找治疗药物较理想的模型之一。 柴胡是我国的传统中药和常用中药，其性味苦凉，有疏散退热、疏肝解郁、升阳举 气之功效，用于治疗寒热往来，胸满胁痛，口苦耳聋，头痛目眩等。以柴胡为主药的小柴 胡汤性较平和，具有和解少阳之功，以清泄枢机之热为特点，有报道用于热毒炽盛型SLE， 疗效显著；已有文献（ZhengWang, Hong Li, et al. Beneficial effect of Bupleurum polysaccharides on autoimmune disease induced by Campylobacter jejuni in BALB/ c mice. Journal of Ethnopharmacology. 2009; 124: 481-487.)报道，柴胡多糖对 SLE 样小鼠具有保护作用，能选择性抑制补体激活，并对小鼠免疫功能具有调节作用。鉴于目前 国内外均缺乏离体高通量筛选制备防治系统性红斑狼疮（SLE)药物的方法，本申请的专利技术 人拟提供一种致敏动物的脾细胞模型，并采用所述柴胡多糖验证该脾细胞模型在离体高通 量筛药方面的特性，进一步建立离体高通量筛选制备防治系统性红斑狼疮（SLE)药物的方 法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。该致 敏动物的脾细胞模型实验周期短、能实现药物高通量筛选。 本专利技术的致敏动物的脾细胞模型通过下述方法制备，采用空肠弯曲菌CJ-S131诱 导建立小鼠 SLE样模型，取模型鼠脾脏细胞，用CJ-S131离体刺激，制得SLE样表现的离体 模型；该离体模型表现出SLE相关免疫指标升高，所述SLE相关免疫指标包括：抗dsDNA抗 体、总 IgG、IFN-γ 和 IL-10。 更具体的，本专利技术的致敏动物的脾细胞模型的制备方法，其特征在于，其包括步 骤： 采用空肠弯曲菌CJ-S131诱导小鼠产生SLE样症状，按常规方法处理实验小鼠，无菌条 件下取其脾脏，制备单细胞悬液；在培养板中加入空肠弯曲菌CJ-S131，再次刺激已致敏的 脾细胞，制得致敏动物的脾细胞模型。 本专利技术进一步采用具有抗SLE作用的药物柴胡多糖，验证上述离体模型在药物筛 选中的用途，尤其是在制备防治系统性红斑狼疮药物中的用途。 本专利技术中，在制得的脾细胞模型中加入不同浓度的待测药物柴胡多糖，置于37°C、 5% C02培养箱培养48h ;培养结束后，吸取培养板中的细胞培养上清，检测抗dsDNA抗体、总 IgG、IFN- γ和IL-10等疾病相关免疫学指标，结果显示，SLE相关病变指标中，细胞培养上 清液中抗dsDNA抗体、总IgG、相关炎症因子IFN- γ和IL-10水平明显升高； 结果表明，采用本专利技术制得的脾细胞模型可用于筛选防治系统性红斑狼疮（SLE)的药 物。 本专利技术还提供了一种离体筛选抗SLE相关药物的方法，实现抗SLE药物的高通量 筛选；其步骤包括： (1) 建立SLE相关免疫异常细胞模型： 通过空肠弯曲菌CJ-S131再刺激疾病模型鼠脾细胞，成功建立离体SLE样表现的炎症 模型； (2) 采用SLE样细胞模型筛选药物； (3 )抗dsDNA抗体测定： (4) 总IgG测定： (5) IFN-γ 测定： (6) IL-10 测定： 筛选出防治系统性红斑狼疮的药物。 本专利技术中，所述的SLE疾病在病理上的显著特征是患者体内自身抗体的产生；所 述自身抗体包括抗双链DNA抗体(抗dsDNA抗体)、抗核抗体等；本专利技术的实验结果显示，离 体未刺激时，模型组与正常对照组以及佐剂对照组相比，抗dsDNA抗体的水平已显著升高， 表明整体动物SLE样模型造模成功；而离体脾细胞经CJ-S131再刺激后，模型组的抗dsDNA 抗体的水平进一步升高，且与对照组相比均有显著性差异；此外，SLE疾病过程中，由于免 疫调节障碍，引起总免疫球蛋白IgG蛋白升高，以及相关细胞因子分泌的改变，如IFN-γ、 IL-10、IL-17等；本专利技术的实验结果还显示，离体再刺激之前，总IgG、IFN-γ、IL-10的水平 在模型组和对照组之间无明显差异，而离体脾细胞经空肠弯曲菌CJ-S131再刺激后，模型 组的总IgG、IFN- γ、IL-10的水平较对照组均显著升高； 上述检测结果表明，通过空肠弯曲菌CJ-S131再刺激疾病模型鼠脾脏细胞，成功建立 了 SLE样表现的炎症模型；而所述柴胡多糖对该SLE离体药物筛选模型有明显的保护作用， 表现为明显改善疾病相关免疫指标的作用，证实了所述离体筛药方法的有效性。 本专利技术所述的离体筛选抗SLE相关药物的方法，具有以下优点： 取经CJ-S131免疫过的脾细胞，采用CJ-S131离体再刺激，建立离体药物筛选平台，脾 细胞表本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种致敏动物的脾细胞模型，其特征在于，所述的致敏动物的脾细胞模型通过采用空肠弯曲菌CJ‑S131诱导建立小鼠SLE样模型，取模型鼠脾脏细胞，用CJ‑S131离体刺激，制得SLE样表现的离体模型；该离体模型表现出SLE相关免疫指标升高，所述SLE相关免疫指标包括：抗dsDNA抗体、总IgG、IFN‑γ和IL‑10。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：力弘，李雯，欧颖晔，章蕴毅，陈道峰，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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