一种具有低致敏性的高蛋白牡蛎活性肽制备方法技术

本发明专利技术公开一种具有低致敏性的高蛋白牡蛎活性肽制备方法。本发明专利技术的方法包括对牡蛎进行磨浆、水洗和酶解处理。按照本发明专利技术方法得到牡蛎活性肽的抗原性较牡蛎蛋白降低80％以上，牡蛎活性肽中总蛋白含量达到了80％以上，肽含量达到70％以上，分子量小于1000Da的组分占90％以上，可以作为新的功能性营养成分应用于食品、保健食品和药品的开发与生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种肽的制备方法，尤其涉及一种具有低致敏性的高蛋白牡蛎活性肽 制备方法，可应用于功能食品和营养保健制品，属生物

技术介绍
自1975年Hughes等报道从动物组织中发现了具有类吗啡活性的小肽以来，人们 已经从动、植物和微生物中分离出多种多样的生物活性肽，并且已经有研宄证明，经酶解天 然来源蛋白原料后得到的各种生物活性肽类制品不仅更易于人体吸收，而且其特有的结构 和性质通常能表现出抗氧化、抗疲劳、降血脂、降血压、增强免疫力等一系列生理功能，对 天然来源的蛋白实施酶解制备生物活性肽，还具有原料来源广泛、无毒副作用、可规模化生 产、价格便宜等优点。 牡蛎是我国四大经济水产之一，蕴含丰富的蛋白质、多肽、多糖和功能氨基酸等生 理活性物质，以及多种人体必需的维生素、矿物质，具有很高的营养价值。近年诸多以牡蛎 为原材料进行的活性肽研宄屡见报道，然而这些报道中多中存在活性肽产率低，制备过程 复杂等问题。并且由于鱼类、甲壳类、贝类、头足类等水产动物普遍存在致敏问题，如何在制 备牡蛎活性肽的过程中降低其致敏性，同时能最大程度保留活性肽的生理活性、提高牡蛎 活性肽的产率，成为有待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，以拓宽牡 蛎蛋白的加工和利用途径，同时得到具有保健功效的牡蛎活性肽，并可应用于工业化方法。 本专利技术还提供了一种具有低致敏性的高蛋白牡蛎活性肽，所述牡蛎活性肽通过以 上方法制得，所述牡蛎活性肽的抗原性较牡蛎蛋白降低80%以上，牡蛎活性肽中总蛋白含 量达到了 80 %以上，肽含量达到70 %以上，分子量小于1000 Da的组分占90 %以上。 本专利技术提供的，包括 1)将牡蛎去壳清洗后，加水碾磨成牡蛎浆，去壳牡蛎与水的重量比为1:1-5 ; 2)在所述牡蛎浆中加入柠檬酸调整pH至3-7,然后在20°C -50°c条件下搅拌该牡 販衆1-5小时，尚心去上清液，得到牡販澄料； 3)将该牡蛎渣料以1-5:1的水渣比加水混合、搅拌，调pH至7-9,加热至 30°C -60°C，按每克牡蛎渣料加入10-100U的风味蛋白酶和10-100U的木瓜蛋白酶，酶解 2-6小时，最后将酶解液加热灭酶，收取酶解液，经后处理成为所述活性肽。 本专利技术采用了磨浆、水洗处理与酶解相结合的工艺，对牡蛎蛋白进行酶解，最终得 到具有生物活性的牡蛎肽，本专利技术称为"牡蛎活性肽"。可以根据需要对酶解产物实施适当 的加工纯化，得到相关形态的牡蛎活性肽产品，例如液态或粉体等。 根据本专利技术的一个实施方案，还包括以下制备牡蛎活性肽粉的步骤： 1)对所得到的酶解液进行离心，转速12000-16000r/min，留用离心清液，用孔径 0. 05-0. 2 μ m的膜过滤设备进行过滤，条件为压力0. 2-0. 4MPa，温度30-80 °C，制得牡蛎活 性肽透过液； 2)将上述牡蛎活性肽透过液进行蒸发浓缩，直到浓缩液的固含量为20-50%，条 件为蒸汽压〇. 1 ±〇. 〇2MPa，温度40-80°C，按照浓缩液总固含量10 % -30 %的比例加入活性 炭粉进行脱色，并过滤、灭菌； 3)用离心喷雾干燥器将上述脱色后的浓缩液进行干燥处理，条件为进口温度 140-160°C，出口温度80-90°C，制成牡蛎活性肽粉。 根据本专利技术的方法，首先要求对作为原料的牡蛎蛋白粉实施磨浆、水洗目的是以 除去原料中的糖类和其他非蛋白物质，提供作为用于酶解制取牡蛎活性肽的原料（酶解底 物）。 对磨浆、水洗处理后的料液进行固液分离（例如离心分离）并收取渣料，渣料作为 酶解底物。 本专利技术采用的酶解过程包括了对磨浆、水洗处理的料液进行风味蛋白酶和木瓜蛋 白酶的酶解，而所使用的酶制剂均可来自市售产品，并按照其要求的酶解条件实施即可，例 如，在所使用酶制剂的适宜的PH环境及酶解温度下控制适当的酶解时间完成所需酶解。 在一个具体方案中，可按照每克牡蛎渣料加入l〇-l〇〇U(酶活力单位，U)的风味蛋白酶和 10-100U的木瓜蛋白酶继进行酶解。对所购得的酶制剂的酶活力通过简单换算即可确定具 体用量。 对于经过酶解的酶解物料需要实施灭酶，可以通过维持对该物料加热一定时间， 实现灭酶。例如，灭酶条件可以为：将酶解物料加热到100-130°c，维持10s-15min。也可以 根据所使用的酶制剂以及酶解程度而自行确定适当的灭酶操作，例如，也可以采用高温瞬 时灭酶。 酶解液经灭酶和必要分离浓缩处理，即可成为本专利技术所需要的牡蛎活性肽产物， 可以根据最终产品的要求，进一步进行脱色，然后经调配成液体产品，或者经干燥成为粉状 产品。 在一个具体实施方案中，对于灭酶后的酶解液采用活性炭脱色，基于浓缩液总固 含量加入10% -30%的活性炭粉，加热至40-80°C，保温搅拌1-3小时。 本专利技术提供的是一种工业化生产工艺，所使用的设备均可商购得到，具体规格和 型号均按照需要选择配套即可。例如， 所述对牡蛎浆实施离心分离以及制取纯化的渣料的分离操作时，均可使用碟片式 离心机或其它相关设备。 对灭酶后的酶解液实施离心分离时，可使用管式离心机或其它可行的设备。对 离心清液则可进一步通过膜过滤实现纯化，得到澄清的牡蛎活性肽透过液，可以选择采用 0. 05-0. 2 ym的膜过滤设备，例如微滤或超滤设备进行过滤。 对透过液浓缩制取固含量为20-50%的浓缩液时，可使用三效降膜蒸发器，控制蒸 汽压0. 1±0. 02MPa，浓缩温度不高于80°C，例如40-80°C，当然，也可使用其它常用的蒸发 设备。 本专利技术还提供了按照上述方法制备的一种具有低致敏性的高蛋白牡蛎活性肽。 本专利技术还提供了所述的具有低致敏性的高蛋白牡蛎活性肽作为产品或原料在保 健功能性食品或药剂中的应用。 本专利技术方法成的牡蛎活性肽通过间接竞争ELISA方法检测其抗原性较牡蛎蛋白 降低80%以上。采用凯氏定氮法方法检测牡蛎活性肽的总蛋白含量（即牡蛎活性肽中酸溶 蛋白和酸不溶蛋白的总量，酸为15%三氯乙酸）达到了 80%以上（现有其他产品总蛋白含 量只有50% -60% )，采用差量法测得肽含量（即酸溶蛋白中非游离氨基酸的蛋白质含量） 达到70%以上，进一步通过高效液相色谱法检测该牡蛎活性肽中各组分的分子量分布，其 中分子量小于1000 Da的组分占到了牡蛎活性肽的90%以上，说明活性肽段在本专利技术方法 制备的牡蛎活性肽中得以富集，进而使得具有多种多样的生理活性的牡蛎活性肽肽段能够 最大限度的发挥其应有的生理功能。【附图说明】 图1为4种已知相对分子质量的标准品配成标准溶液的凝胶渗透色谱图。 图2为牡蛎活性肽样品1的凝胶渗透色谱图。 图3为牡蛎活性肽样品2的凝胶渗透色谱图。 图4为牡蛎活性肽样品3的凝胶渗透色谱图。【具体实施方式】 以下结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步的详细描述，但并不限制本专利技术的 范围。 牡蛎活件肽的制各 实施例1 1)将600kg去壳牡蛎搅碎后，加入600kg水，投入胶体磨中碾磨成牡蛎浆； 2)在所述牡蛎浆中加入食品级柠檬酸调整pH至3,然后在20°C条件下搅拌该牡蛎 浆1小时，离心去上清液，得到牡蛎渣料； 3)将该牡蛎渣料以1:1的水渣比加水混合、搅拌，调pH至7-9,加热至60°C，按每 克牡蛎本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有低致敏性的高蛋白牡蛎活性肽制备方法，其特征在于，包括以下步骤:1)将牡蛎去壳清洗后，加水碾磨成牡蛎浆，去壳牡蛎与水的重量比为1:1‑5；2)在所述牡蛎浆中加入柠檬酸调整pH至3‑7，然后在20℃‑50℃条件下搅拌该牡蛎浆1‑5小时，离心去上清液，得到牡蛎渣料；3)将该牡蛎渣料以1‑5:1的水渣比加水混合、搅拌，调pH至7‑9，加热至30℃‑60℃，按每克牡蛎渣料加入10‑100U的风味蛋白酶和10‑100U的木瓜蛋白酶，酶解2‑6小时，最后将酶解液加热灭酶，收取酶解液，经后处理成为所述活性肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡木易，谷瑞增，鲁军，陈亮，潘兴昌，董哲，林峰，马勇，徐亚光，马永庆，金振涛，陆路，刘文颖，魏颖，张海欣，刘艳，马涛，曹珂璐，王憬，李国明，周明，
申请(专利权)人：中国食品发酵工业研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11