一种逆流超声处理谷朊蛋白酶解的方法技术

本发明专利技术一种逆流超声处理谷朊蛋白酶解的方法，涉及生物工程领域。更具体地，涉及一种超声促进谷朊蛋白酶解制备活性肽的方法。此方法中采用在酶解过程中施加超声辅助处理，避免了超声预处理时产生的谷朊蛋白粉聚集和吸附问题，简化了生产工艺，降低了成本，同时通过超声有效地促进谷朊蛋白的酶解，提高的多肽产物的活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及生物工程领域，更具体地，设及一种超声促进谷航蛋白酶解制备活性 肤的方法。
技术介绍
[000引 由于安全性高、毒副作用小，食品蛋白活性肤成为近年来的研究热点之一。已报道 有W牛奶、乳酪、大豆、鱼肉、蔬菜、小麦及大米蛋白等为原料，经蛋白酶酶解或者微生物发 酵制备各种功能的生物活性肤。 我国是盛产小麦的大国，谷航蛋白粉是小麦淀粉生产的副产物，含蛋白质70%W上，是价廉物美的植物性蛋白资源，目前主要用做动物饲料，综合利用率较低。谷航蛋白粉 中主要成分是醇溶蛋白（Zein)，约占总蛋白的50%左右，醇溶蛋白含有大量的非极性氨基 酸，不溶于水，此外还缺乏色氨酸和赖氨酸，营养价值低，很难被生物体吸收。 正因为谷航蛋白富含大量的非极性氨基酸，用于酶解制备高活性的降血压肤是非 常有利的。目前活性肤的生产主要是采用蛋白酶水解的方法。但是，常规酶解存在水解效 率低、水解速度慢、水解度低、酶利用率低和生产成本较高等缺点。 超声波是一种纵波，在介质中传播时，会产生热效应、机械效应和空化效应，引起 介质的一些特性变化。因为上述特性，超声波技术对有效成分的提取、高分子的降解、酶解 反应等都有较好的促进作用。其中超声波酶促反应具有高效、廉价、无污染、操作简单、技 术易推广应用等特点，通过强化传质传热等可提高酶促反应速度和有效成分的产率。国内 外大量研究表明超声波辅助处理蛋白酶解，可W改变蛋白质的构像，加快反应速率，提高产 物的活性。Atequad等研究发现，超声空化对木瓜蛋白酶构象、紫外光谱W及催化活性都有 不同程度的影响（AtequadN,IqbalJ.Effectofultrasoundonpapain.Indian J.Biochem.Bio地ys，1985，22(3): 190-192.)。了青芝等研究表明超声预处理原料的 方式效果最为明显，可W有效地促进菜巧饼稍蛋白的酶解，提高产物的ACE抑制活性(了青 芝，马海乐，骆琳等.超声处理对菜巧蛋白酶解效果的影响.农业工程学报，2009， 25(1): 294-299.)"Rose等研究表明利用超声辅助预处理谷航蛋白对提高酶解效率，加快 反应速度等是非常有价值的（RosemondGo化lessDadzie,小麦谷航蛋白ACE抑制肤超声 辅助酶解制备技术研究巧]，江苏大学，2013)。 但是在生产应用中发现，与其他的蛋白不同，谷航蛋白粉与水的混合物在经过超 声预处理之后，会絮凝成团，团状物粘性比较高，会吸附在容器表面，不容易转移取出，该大 大增加了生产难度，使之应用受到了 一定的限制。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服已有技术存在的问题，提供一种工艺简单的超声促进谷 航蛋白酶解制备活性肤方法。[000引为了实现上述专利技术目的，其具体的技术方案如下： 取谷航蛋白粉，加水混匀，配成5~12%(W/W)的料液，调节抑为8. 0~8. 5,温度50~55°C， 加入1~2% (E/S)的碱性蛋白酶，通过加入化OH维持抑恒定，在酶解过程中施加超声，超声 功率为400~800W，反应液W逆流循环的方式通过超声探头，酶解反应120~150min后，煮沸 灭酶15min,离屯、分离（8000r/min、15min)取上清液，测定活性。 本专利技术的优点：采用在酶解过程中施加超声辅助处理，避免了超声预处理时产生 的谷航蛋白粉聚集和吸附问题，简化了生产工艺，降低了成本，同时通过超声有效地促进谷 航蛋白的酶解，提高了多肤产物的活性(增幅为15. 9~30. 7%)。下面通过附图和实施例，对 本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。【附图说明】 图1为逆流超声处理设备结构示意图，1为聚能式超声波探头，2为超声波控制器， 3为超声杯型腔，4为进料口，5为循环累，6为盛液器，7为出料口。【具体实施方式】 在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常 理解的含义。下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详细地描述本专利技术。应理解，该些 实施例只是，对本专利技术进行进一步说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限定，该领域的技 术工程师可根据上述专利技术的内容对本专利技术作出一些非本质的改进和调整。 在W下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。 所用试剂的来源、商品名W及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相 同试剂如无特殊说明，均与首次标明的内容相同。 图1为本专利技术的逆流超声处理设备，该设备配有超声波控制器2,控制超声参数， 聚能式超声波探头1对进料口 4进入超声杯型腔3的物料进行处理，超声的同时启动循环 累5对料液进行循环，6为盛液器，7为出料口。 实施例中降血压肤的活性测定方法 FAPGG(1.0mmol/L);取FAPGG3. 994mg加基质缓冲液，定容至10血，溶解混合，置 4 °C避光放置。 基质缓冲液；肥阳S1.910g，化C1 1.755g，用双蒸馈水溶解后，用化0H调到 P服.3,再补充水到100血，置4°C备用。 采用N-巧-(2-快喃基）丙締酷]-k苯丙氨酷-甘氨酷-甘氨酸（FAPGG)作为血 管紧张素转移酶（ACE)的底物，用酶标仪测定样品的ACE抑制活性。测定波长为340nm。对 照孔加入ACE(0.lU/mL) 10yL，FAPGG(1.Ommol/L) 50yL，缓冲液 40yL，样品孔加入ACE (0.1口/111〇10^^尸八口60(1.0111111〇1/1)50^^样品液40^^在37°[的环境中反应30 111111。 设空白孔的初始吸光度为al，样品孔的初始吸光度为b2,在37°C的环境中反应30min后再 次测定在340nm的吸光度，反应后空白孔的吸光度为a2,样品孔的吸光度为b2,空白的吸 光度减少值A=al-a2,样品的吸光度减少B=bl-b2,抑制率1= (A-B)/A。 对照例1~5; 1、安装逆流超声设备如图1 (主要由聚能式超声探头1、杯型超声腔3、循环累5、盛液 器6和恒温器等组成)，将超声探头置于杯型超声腔中，超声腔进出口通过两条管道与盛液 器连接，物料的定向循环流动由安装在进出口管道上的循环累完成，盛液器的温度由恒温 器控制。 2、在物料杯中加入一定量的谷航蛋白和1. 5% (E/S)碱性蛋白酶，恒温，反应期间 用0.5M化0H调节抑稳定。酶解反应120min后，煮沸灭酶15min,离屯、分离（8000r/min、15min)取上清液，配置成蛋白含量为1.0g/L溶液，测定活性。[001引 实施例1~5; 1、逆流超声设备的安装同对照例。 2、在物料杯中加入一定量的谷航蛋白和1. 5% (E/S)碱性蛋白酶，恒温，打开超声 设 备，在酶解过程中施加超声处理，反应期间用0.5M化0H调节抑稳定。酶解反应120min后，煮沸灭酶15min,离屯、分离巧000r/min、15min)取上清液，配置成蛋白含量为1.0 g/L溶液，测定活性。 对照例1~5和实施例1~5的谷航蛋白酶解参数及结果如下所示：【主权项】1. 一种适用于谷朊蛋白酶解的方法，其特征在于，在谷朊蛋白酶解反应过程中施加超 声辅助处理。2. 根据权利要求1所述的谷朊蛋白酶解的方法，其特征在于按照下述步骤进行： 取谷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种适用于谷朊蛋白酶解的方法，其特征在于，在谷朊蛋白酶解反应过程中施加超声辅助处理。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李云亮，马海乐，何华纲，张艳艳，任晓峰，王蓓，曲文娟，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32