一种重组人朊蛋白hPrP及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种重组人朊蛋白hPrP及其制备方法和应用，该重组hPrP蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示。本发明专利技术以人全血基因为模板，以SEQ?ID?No3、4所示核苷酸序列为引物通过PCR方法获得带有酶切位点的人朊蛋白DNA序列，将其连接到pPROEX-htb质粒上，通过定点突变技术除去表达载体中目的基因之前的多余酶切位点，获得hPrP全真表达载体。将该载体在大肠杆菌中表达、过高亲和力层析柱纯化、复性，得到了重组人朊蛋白。本发明专利技术所得到的重组人朊蛋白hPrP具有较好的生物活性，可用于开发人朊蛋白多克隆抗体、单克隆抗体以及针对人的朊病毒病诊断试剂盒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体的说，涉及一种重组人朊蛋白hPrP及其编码基因和制备方法，以及含有该编码基因的重组表达载体和重组人朊蛋白hPrP在检测朊病毒病中的应用。
技术介绍
朊病毒(Prion)病，又称为传染性海绵状脑病(TSEs)，是一种致死性神经退行性疾病，以脑空泡化、神经元死亡和神经小胶质细胞增生为主要特征。朊蛋白与传染性海绵状脑病的的发生密切相关，因此，重组朊蛋白对这类病的诊断试剂的研发及发病机制的研究是必不可少的。目前获得重组朊蛋白的方法都是通过基因工程技术构建朊蛋白表达载体，通过大肠杆菌表达目的蛋白，然后通过复性获得可溶状态 的重组朊蛋白。然而这些表达技术在构建载体的环节都存在一个不足目的片段通过双酶切技术连接在表达载体上之后，上游的酶切位点(构建载体的酶切位点和额外的酶切位点)没有去除，会与目的基因一起被翻译，目的蛋白的N端相应会多出几个氨基酸O 2)，这样的蛋白在一般的研究中，如制备相应抗体等研究中可能会有一定的影响，且在对朊蛋白抗性机制研究的过程中，无法满足精确氨基酸位点的研究工作。迫切需要一种定点消除了酶切位点的全真朊蛋白，为传染性海绵状脑病的抗体研制、疾本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人朊蛋白hPrP，其氨基酸序列为：a）SEQ？ID？No.2所示的氨基酸序列；或b）SEQ？ID？No.2所示的氨基酸序列经替换、缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基形成的具有同等功能的氨基酸序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨利峰，赵德明，杨秀进，王伊琴，宋志琦，姚皓，周向梅，尹晓敏，张爽，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：