本发明专利技术描述了用于通过负调节或扰乱细胞骨架，特别是构成细胞骨架的中间丝的一部分的蛋白质，更特别地波形蛋白和/或角蛋白-10，来抑制人免疫缺陷病毒（HIV）复制的方法。对于这些蛋白质的结构的干扰造成在人细胞中所述病毒的复制的抑制。本发明专利技术还涉及试剂用于预防或治疗HIV感染的用途，所述试剂包括肽和/或干扰RNA和/或脂质化合物，并且引起细胞的细胞骨架的负调节或扰乱。本发明专利技术提供了用于扰乱细胞的细胞骨架/纤丝的结构的工具和方法，这干扰HIV对于人细胞的感染并且甚至可以完全抑制之。细胞骨架通过下列方式而被扰乱：通过减少波形蛋白和/或角蛋白-10的量（例如，通过使用干扰RNA来进行的转录控制）或者经由使用扰乱细胞骨架的肽。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生物医学领域，更具体而言涉及针对感染(尤其是针对人免疫缺陷病毒(HIV)感染)的疗法。本专利技术描述了用于通过扰乱细胞的细胞骨架，特别是构成细胞骨架的中间丝的一部分的蛋白质，来抑制HIV复制的方法。本专利技术还涉及负调节或扰乱细胞的细胞骨架的试剂在制备用于预防或治疗HIV感染的药物中的用途。现有技术HIV大流行病/获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的出现是最近30年中记录的最重要的世界性卫生事件之一，并由此导致能够阻止感染进展和降低死亡率的抗逆转录病毒治疗的开发(De Cock K, Crowley SP, Lo YR, Granich RM, Williams BG. Boletin de IaOrganizacion Mundial de la Salud 2009;87:488-488)。 2008年的UNAIDS报告估计，有3300万人被HIV感染，其中270万是当年出现的新病例。据计算，67%的感染属于撒哈拉沙漠以南非洲地区(Report on the globalAIDS epidemic 2008. Geneva, UNAIDS)。根据2009年世界卫生组织发布的公报，提出在世界范围内存在两个大的趋势。一方面，撒哈拉沙漠以南非洲地区的全部人口普遍患病；和另一方面，在世界其余地区，感染集中在特殊风险群体中(De Cock K, Crowley SP, LoYR, Granich RM, Williams BG 2009. Boletin de la Organizaci on Mundial de la Salud87:488-489)οHIV感染的年发生率在九十年代中期达到最大值(Bongaarts J, BuettnerT, Heilig G, Pelletier F. Popul Dev Rev 2008; 34:199-224)。然而，由于持续高的发生率和人口增长的速度，被该病毒感染的人员的绝对数目在非洲继续增加(De Cock K, CrowleySP, Lo YR, Granich RM, Williams BG 2009.Boletin de la Organizacion Mundial de IaSalud 87:488-489)ο对于目前可得的抗-HIV药物的HIV抗性的出现以及对治疗的差的坚持仍然是该疗法失败的主要原因。自开始采用用抗逆转录病毒药的单一疗法起，就观察到了病毒抗性，这导致出现采用两种或更多种通常具有不同作用方式的抗-HIV试剂的组合疗法。随着高活性抗逆转录病毒疗法(HAART)的引入，实现了在经治疗的患者中发病率和死亡率的显著下降。该疗法组合了核苷逆转录酶抑制剂、非核苷逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。然而，该多药物疗法并未彻底去除HIV，并且长期的治疗通常导致对于各种药物的抗性。一半接受抗-HIV组合疗法的患者对于该治疗并不完全地应答，这主要是由于对于所使用的一种或多种药物的病毒抗性。在近期被感染的个体中也观察到了病毒抗性，这大大地限制了用于那些患者的疗法的选择。组合疗法的成功导致考虑根除该病毒的可能性，然而，知道在潜在被感染的细胞中和还有在其中该病毒不顾该疗法而持续存在的组织中存在有病毒储库。据估计，需要超过70年的连续治疗来根除病毒储库，这是不可能的，因为该疗法牵涉许多继发效应，和偶尔地，致命的代谢并发症例如乳酸酸中毒、糖尿病、脂肪营养不良、胰腺炎等(Iglesias E2009.Biotecnologia Aplicada 26:189-194)。对治疗的坚持是关于高活性抗逆转录病毒疗法(特别是关于蛋白酶抑制剂)的最具争论性的话题之一，这是由于如果不规律地服用药物或中断其施用而可能出现抗性的快速性。影响对治疗的不坚持的因素是各种各样的，其中包括对于药物不耐受、施用制度不方便、治疗失败、药物的相互作用、社会经济问题，等等。组合疗法延缓了 AIDS的进展,然而并没有治愈被感染的患者(Marsden MD, ZackJA 2009. J Antimicrob Chemoth 63:7-10)。虽然该疗法已实现将HIV感染转变为慢性问题，而不再是死亡问题，并且患者的寿命预期与普通人群的类似，但仍存在着严重的问题，由此必不可少的是寻求用于减少抗逆转录病毒药的使用的策略，和因此通过获得新的治疗变化方案而带来的益处。可得的抗逆转录病毒疗法的缺点支持了对于在其作用的机制和/或靶标方面不同的新的抗逆转录病毒药物的需要。本专利技术的一个目标是提供用于抑制HIV复制和/或感 染的方法。本专利技术的另外一个目标是提供用于抑制HIV复制和/或感染的方法，其具有与抑制HIV的聚合酶或抑制HIV的蛋白酶不同的机制。本专利技术的另一目标是提供用于以宿主细胞而非病毒作为靶标来抑制HIV复制和/或感染的方法。具体而言，本专利技术的目标是使用宿主细胞的细胞骨架，更特别地中间丝(IF)作为靶标。特别地，本专利技术的另一目标是使用宿主的波形蛋白和/或角蛋白-10作为靶标。通过使用宿主细胞作为靶标，据信对于HIV来说应当更难以产生逃逸突变体。波形蛋白和角蛋白-10对于IF的结构是重要的，并且本专利技术证明它们是用于抑制HIV的重要靶标。本专利技术的另一目标是提供扰乱细胞的IF或减少宿主细胞的波形蛋白和/或角蛋白-10的量的试剂和药物组合物。通过本专利技术实现了至少一个上面提及的目标。专利技术概述本专利技术涉及细胞骨架的扰乱，其作为用于抑制HIV复制和/或感染的方法。细胞骨架是有助于细胞的完整性并实现不同的细胞功能的三维网状物。其由三种类型的结构形成微管、微丝和中间丝(IF)。中间丝(IF)由一系列对于每种细胞类型特异的蛋白质形成，其中包括波形蛋白和角蛋白-10。波形蛋白是分子量(丽)为58kDa的蛋白质，其形成所谓的IF并且通常在血管内皮细胞中、在一些上皮细胞中和在间充质细胞中表达(Alberts B, Johnson A, LewisJ, Raff M, Roberts K, WalterP 2002. Molecular Biology of the Cell,第 4 版，GarlandPublishing, New York)。已知波形蛋白是HIV的蛋白酶(PR)的底物，并且已提出PR对于该蛋白质和对于其他组成成分的作用可以影响细胞骨架的结构(Blanco R, CarrascoL, Ventoso I 2003. J Biol Chem 278:1086-1093)。还已证明，通过波形蛋白的蛋白水解切割而获得的N-末端肽能够改造细胞核的构造，这正是在被HIV感染的细胞中所看到的现象(Shoeman RL, Hiittermann C, Hartig R, Traub P 2001. Mol Biol Cell 12:143-154)。先前的证据暗示，HIV在其生活周期中需要对波形蛋白进行分割。角蛋白是一组丽范围为10_68kDa的IF蛋白质(具有大约30个成员)。已基于其丽和其电泳行为将它们分类和编号为酸性的(pKi=4-6 ；1型)和中性-碱性的(pKi=6-8 ；II型)。角蛋白-10是大约60kDa的I型角蛋白，其主要存在于完全分化的表皮细胞的IF中(Zhou XM 1988. J Biol C本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：C·B·弗南德澳特加，A·C·拉米雷苏阿雷，D·卡斯拉斯卡桑诺瓦，T·E·帕奈克盖里洛，R·乌比塔戈麦斯，M·杜贝埃切瓦利亚，L·M·纳维雷瓦，L·R·卡斯特拉诺斯塞拉，C·A·杜阿特卡诺，V·法尔康卡马，O·雷伊斯阿考斯塔，
申请(专利权)人：遗传工程与生物技术中心，
类型：
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