抗体制造技术

已经证明某些化合物结合TNF并稳定与TNF受体结合的三聚体TNF的构象。公开了选择性结合这些化合物与TNF超家族成员的复合物的抗体。这些抗体可用于检测具有相同活性的其他化合物，以及作为靶接合生物标志物。

antibody

It has been shown that certain compounds bind to TNF and stabilize the conformation of trimer TNF bound to TNF receptor. Antibodies that selectively combine these compounds with members of the TNF superfamily members are disclosed. These antibodies can be used to detect other compounds with the same activity and serve as target binding biomarkers.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体专利
本专利技术涉及可用于筛选与TNF超家族成员形成复合物的TNF超家族的小分子调节剂的抗体。具体而言，本专利技术涉及选择性结合此类复合物的抗体，以及此类抗体的用途。本专利技术还涉及使用所述抗体鉴定TNF超家族的新调节剂的测定法。
技术介绍
肿瘤坏死因子(TNF)超家族是共有调节细胞存活和细胞死亡的主要功能的蛋白质家族。TNF超家族的成员共有共同的核心基序，其由两个反平行的β折叠片(具有反平行的β链)组成，形成“果冻卷(jellyroll)”β结构。TNF超家族成员共有的另一个共同特征是形成同源或异源三聚体复合物。TNF超家族成员的这些三聚体形式结合并激活特定的TNF超家族受体。TNFα是TNF超家族的原型成员。TNFα生产的失调牵涉到许多具有重大医学重要性的病理状况。例如，TNFα牵涉到类风湿性关节炎、炎性肠病(包括克罗恩氏病)、牛皮癣、阿尔茨海默氏病(AD)、帕金森病(PD)、疼痛、癫痫、骨质疏松症、哮喘、系统性红斑狼疮(SLE)和多发性硬化症(MS)。TNF超家族的其他成员也牵涉到病理状况，包括自身免疫性疾病。TNF超家族成员的常规拮抗剂是大分子的并且通过抑制TNF超家族成员与其受体的结合起作用。常规拮抗剂的实例包括抗-TNFα抗体，特别是单克隆抗体，例如英夫利昔单抗()，阿达木单抗()和赛妥珠单抗()，或可溶性TNFα受体融合蛋白，例如依那西普()。专利技术概述本专利技术人已经鉴定了调节TNFα的小分子实体(SME)的类别。这些化合物通过结合TNFα的同三聚体形式、诱导和/或稳定TNFα同源三聚体的构象变化而发挥作用。例如，TNFα与结合的化合物的同源三聚体可以与TNFα受体结合，但不太能或不能启动TNFα受体下游的信号传导。这些化合物可以用于治疗由TNFα介导的病症。本专利技术人开发了选择性结合包含这种化合物和TNF超家族成员的复合物的抗体。这些抗体可用于以这种方式鉴定能够抑制TNFα的其他化合物，并且还可以用作靶接合生物标志物(targetengagementbiomarker)。因此，本专利技术提供选择性结合包含(i)TNF超家族成员三聚体蛋白质和(ii)能够与TNF超家族成员三聚体蛋白质结合的化合物的复合物，其中化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节三聚体通过受体诱导的信号传导。本专利技术还提供选择性结合包含(i)人TNFα和(ii)选自化合物(1)-(6)的化合物或其盐或溶剂合物的复合物的抗体。本专利技术还提供了-与本专利技术的其他抗体竞争结合TNFα或与TNFα上的相同表位结合的抗体。-编码本专利技术抗体的分离的多核苷酸。-用于通过治疗法治疗人或动物体的方法中使用的本专利技术的抗体。-包含本专利技术的抗体和药学上可接受的佐剂和/或载体的药物组合物。-使用本专利技术的抗体作为靶接合生物标志物用于检测从受试者获得的样品中的化合物-三聚体复合物；其中所述抗体是可检测的，并且所述复合物包含TNF超家族成员三聚体蛋白质和能够与TNF超家族成员三聚体蛋白质结合的化合物，其中化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节三聚体通过受体诱导的信号传导。-检测化合物与三聚体TNF超家族成员的靶向接合的方法，其中所述化合物-三聚体复合物结合必需的受体并调节由三聚体通过受体诱导的信号传导，所述方法包括：(a)从施用所述化合物的受试者获得样品；(b)使本专利技术的抗体与所述样品和对照样品接触，其中所述抗体是可检测的；(c)确定所述可检测抗体与所述样品和所述对照样品的结合量，其中所述可检测抗体与所述样品的结合大于所述可检测抗体与所述对照样品的结合指示所述化合物与所述三聚体TNF超家族成员的靶接合。-本专利技术的抗体用于筛选在三聚体TNF超家族成员中引起构象变化的化合物的用途，其中所述构象变化在三聚体TNF超家族成员结合时调节必需的TNF超家族受体的信号传导。-包含TNF超家族成员三聚体蛋白质和与其结合的化合物的复合物，其中化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节由三聚体通过受体诱导的信号传导，其中所述复合物以1nM或更小的KD-ab结合本专利技术的抗体。-TNFα三聚体，所述TNFα三聚体能够结合TNFR1，但其中来自所述结合的TNFR1的信号传导被减弱或拮抗，其中所述TNFα三聚体以1nM或更小的KD-ab结合至以下抗体中的任一个或两个：(i)具有SEQIDNO：27的重链和SEQIDNO：26的轻链的抗体；或(ii)具有SEQIDNO：12的重链和SEQIDNO：11的轻链的抗体。-能够与TNF超家族成员三聚体蛋白质结合形成复合物的化合物，其中化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节三聚体通过受体诱导的信号传导，其中化合物-三聚体复合物以1nM或更小的KD-ab结合本专利技术的抗体。-如上定义的复合物，如上定义的三聚体或如上定义的化合物，用于在人体或动物体上实施的治疗方法中。-鉴定能够结合TNF超家族成员的三聚体蛋白并调节三聚体蛋白通过受体的信号传导的化合物的方法，包括以下步骤：(a)进行结合测定以测量包含TNF超家族成员三聚体蛋白和测试化合物的测试化合物-三聚体复合物与选择性结合所述复合物的抗体的结合亲和力；(b)将步骤(a)中测量的结合亲和力与已知以高亲和力与步骤(a)中提到的抗体结合的不同化合物-三聚体复合物的结合亲和力相比较；和(c)如果根据步骤(b)中提到的比较考虑时，其测量的结合亲和力是可接受的，则选择存在于步骤(a)的化合物-三聚体复合物中的化合物。附图的简要说明图1显示了人TNFα晶体结构上的残基N168，I194，F220和A221。图2显示了使用CA185_01974mFab和化合物(1)的HPLC实验的结果。对应于过量Fab的峰出现在1.5倍和2.0倍过量上。因此，化学计量确定为1Fab：1TNFα三聚体。图3显示了使用CA185_01979mFab和化合物(1)的HPLC实验的结果。同样，对应于过量Fab的峰出现在1.5倍和2.0倍过量上。化学计量因此也被确定为1Fab：1TNFα三聚体。图4表示使用市售抗TNFα多克隆抗体的化合物(3)、(4)和(5)的总TNFαELISA结果。图5显示了使用CA185_01974.0和化合物(3)、(4)和(5)的构象特异性TNFαELISA的结果。ApoTNFα在该测定中不提供信号，表明抗体CA185_01974与化合物结合的TNFα结合的特定性质。图6显示了在1和10μg/ml下用CA185_01974和CA185_01979染色的FACS直方图图。这些图表明抗体只识别已经与化合物(1)预温育的TNFα。DMSO对照没有染色图7显示了用CA185_01974对亲本NS0细胞系和过表达膜TNFα的工程化NS0细胞系进行染色的FACS直方图图。将细胞与化合物(1)或DMSO温育并用抗体Fab片段染色。同样，结果表明DMSO对照没有染色(对于亲本或工程化细胞系)。然而，在化合物(1)的存在下，观察到工程细胞系的染色。图8显示使用食蟹猴TNFα测定CA185_01974的亲和力值的传感图。对照(上图)含有食蟹猴TNFα和DMSO。然后底图显示与化合物(4)复合的食蟹猴TNFα的重复实验。图9显示了使用人TNFα测定CA185_01974的亲和力值的传感图。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.选择性结合复合物的抗体，所述复合物包含(i)TNF超家族成员三聚体蛋白质和(ii)能够结合TNF超家族成员三聚体蛋白质的化合物，其中化合物‑三聚体复合物与必需的TNF超家族受体结合并调节三聚体通过所述受体诱导的信号传导。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.18 GB 1510758.41.选择性结合复合物的抗体，所述复合物包含(i)TNF超家族成员三聚体蛋白质和(ii)能够结合TNF超家族成员三聚体蛋白质的化合物，其中化合物-三聚体复合物与必需的TNF超家族受体结合并调节三聚体通过所述受体诱导的信号传导。2.权利要求1的抗体，其中所述化合物拮抗由所述三聚体通过所述受体诱导的信号传导。3.权利要求2的抗体，其中与不存在所述化合物的情况下三聚体形式的TNF超家族成员的稳定性相比，所述化合物增加所述三聚体形式的TNF超家族成员的稳定性。4.权利要求3的抗体，其中所述稳定性的增加导致所述三聚体形式的TNF超家族成员的热转换中点(Tm)增加至少1℃。5.权利要求4的抗体，其中所述稳定性的增加导致所述三聚体形式的TNF超家族成员的热转换中点(Tm)增加至少10℃。6.权利要求5的抗体，其中三聚体形式的TNF超家族成员的Tm的增加为10℃至20℃。7.前述权利要求中任一项的抗体，其中与不存在所述化合物的情况下TNF超家族成员与其受体的结合亲和力相比，所述化合物增加所述TNF超家族成员与必需受体的结合亲和力。8.权利要求7的抗体，其中所述化合物通过相较于在不存在所述化合物的情况下TNF超家族成员与其受体结合的缔合速率(kon-r)和解离速率(koff-r)值增加缔合速率(kon-r)和/或降低解离速率(koff-r)来增加所述TNF超家族成员与必需受体的结合亲和力。9.权利要求8的抗体，其中所述化合物通过相较于在不存在所述化合物的情况下TNF超家族成员与其受体结合的缔合速率(kon-r)值增加缔合速率(kon-r)来增加所述TNF超家族成员与必需受体的结合亲和力。10.权利要求7至9中任一项的抗体，其中与不存在所述化合物的情况下TNF超家族成员对其受体的KD-r相比，所述化合物降低所述TNF超家族成员对必需受体的KD-r，其中：a)与不存在所述化合物的情况下所述TNF超家族成员的KD-r相比，所述化合物降低所述TNF超家族成员对必需受体的KD-r至少10倍；b)在所述化合物的存在下TNF超家族成员与必需受体结合的KD-r值小于10nM。11.权利要求7至9中任一项的抗体，其中与不存在所述化合物的情况下TNF超家族成员对其受体的KD-r相比，所述化合物降低所述TNF超家族成员对必需受体的KD-r，其中：a)与不存在所述化合物的情况下所述TNF超家族成员的KD-r相比，所述化合物降低所述TNF超家族成员对必需受体的KD-r至少4倍；b)在所述化合物的存在下TNF超家族成员与必需受体结合的KD-r值小于600pM。12.权利要求11的抗体，其中在所述化合物的存在下TNF超家族成员与必需受体结合的KD-r值小于200pM。13.前述权利要求中任一项的抗体，其中所述化合物具有500nM或更低的IC50值。14.前述权利要求中任一项的抗体，其中所述化合物选自化合物(1)-(6)或其盐或溶剂合物：15.前述权利要求中任一项的抗体，其中与不存在TNF超家族成员三聚体的情况下结合化合物和/或不存在所述化合物的情况下结合TNF超家族成员三聚体相比，所述抗体选择性结合三聚体-化合物复合物。16.权利要求15的抗体，其中所述抗体结合所述三聚体-化合物复合物的KD-ab是在不存在所述化合物的情况下结合三聚体TNF超家族成员和/或在不存在TNF超家族成员的情况下结合化合物的KD-ab的最多1/100。17.权利要求16的抗体，其中所述抗体结合所述三聚体-化合物复合物的KD-ab是在不存在所述化合物的情况下结合三聚体TNF超家族成员和/或在不存在TNF超家族成员的情况下结合化合物的KD-ab的最多1/200。18.前述权利要求中任一项的抗体，其中所述TNF超家族成员是TNFα，并且所述受体是TNF受体。19.权利要求18的抗体，其中所述受体是TNFR1。20.选择性结合复合物的抗体，所述复合物包含(i)人TNFα和(ii)选自化合物(1)-(6)或其盐或溶剂合物的化合物。21.权利要求20的抗体，其中所述TNFα是TNFαs。22.权利要求21的抗体，其中所述TNFαs包含SEQIDNO：35或SEQIDNO：36的序列或其变体。23.权利要求20至22中任一项的抗体，其中所述TNFα是三聚体。24.权利要求20至23中任一项的抗体，其中与不存在TNFα的情况下结合化合物和/或不存在所述化合物的情况下结合TNFα相比，所述抗体选择性结合TNFα-化合物复合物。25.权利要求24的抗体，其中所述抗体结合所述TNFα-化合物复合物的KD-ab是在不存在所述化合物的情况下结合TNFα和/或在不存在TNFα的情况下结合化合物的KD-ab的最多1/100。26.权利要求25的抗体，其中所述抗体结合所述TNFα-化合物复合物的KD-ab是在不存在所述化合物的情况下结合TNFα和/或在不存在TNFα的情况下结合化合物的KD-ab的最多1/200。27.前述权利要求中任一项的抗体，其包含选自SEQIDNO：4-6和19-21的至少一个重链互补决定区(HCDR)序列和/或选自SEQIDNO：1-3、17和18的至少一个轻链互补决定区(LCDR)序列。28.权利要求27的抗体，其包含SEQIDNO：6或SEQIDNO：21的HCDR3序列。29.权利要求27或28的抗体，其包含HCDR1、HCDR2和HCDR3序列和LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3序列和LCDR1、LCDR2和LCDR3序列包含在SEQIDNO：8/7或SEQIDNO：23/22的重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)对之内。30.权利要求29的抗体，其中所述HCDR1/HCDR2/HCDR3序列组合选自SEQIDNO：4/5/6和SEQIDNO：19/20/21，和/或所述LCDR1/LCDR2/LCDR3序列组合选自SEQIDNO：1/2/3和SEQIDNO：1/17/18。31.权利要求27至30中任一项的抗体，其包含SEQIDNO：4/5/6/1/2/3或SEQIDNO：19/20/21/1/17/18的HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3序列组合。32.权利要求27至31中任一项的抗体，其包含SEQIDNO：8或23的重链可变区(HCVR)序列和/或SEQIDNO：7或22的轻链可变区(LCVR)序列，或与其至少95％相同的序列。33.权利要求32的抗体，其包含SEQIDNO：8/7或SEQIDNO：23/22的HCVR和LCVR序列对，或与其至少95％相同的序列。34.权利要求33的抗体，其中：(a)HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3序列由SEQIDNO：4/5/6/1/2/3组成，并且HCVR和LCVR的其余部分包含分别与SEQIDNO：8和7至少95％相同的序列；或(b)HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3序列由SEQIDNO：19/20/21/1/17/18组成，并且HCVR和LCVR的其余部分包含分别与SEQIDNO：23和22至少95％相同的序列。35.权利要求32的抗体，其包含SEQIDNO：12、13、27或28的重链和/或SEQIDNO：11或26的轻链，或与其至少95％相同的序列。36.权利要求35的抗体，其包含SEQIDNO：12/11、13/11、27/26或28/26的重链和轻链对，或与其至少95％相同的序列。37.权利要求36的抗体，其中：(a)HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3序列由SEQIDNO：4/5/6/1/2/3组成，并且重链和轻链的其余部分包含分别与SEQIDNO：12和11至少95％相同的序列；(b)HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3序列由SEQIDNO：4/5/6/1/2/3组成，并且重链和轻链的其余部分包含分别与SEQIDNO：13和11至少95％相同的序列；(c)HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3序列由SEQIDNO：19/20/21/1/17/18组成，并且重链和轻链的其余部分包含分别与SEQIDNO：27和26至少95％相同的序列；或(d)HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3序列由SEQIDNO：19/20/21/1/17/18组成，并且重链和轻链的其余部分包含分别与SEQIDNO：28和26至少95％相同的序列。38...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·P·奥康奈尔，J·R·波特，A·劳森，D·J·莱特伍德，R·J·伍顿，
申请(专利权)人：UCB生物制药私人有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE