作用机制制造技术

本发明专利技术涉及作用机制，属于TNF信号传导领域。已经鉴定出能够调节TNF三聚体通过受体的信号传导的化合物。因此提供了鉴定这种化合物的方法。这些化合物本身在治疗中具有效用。

【技术实现步骤摘要】
作用机制本申请是申请号为201580080984.1的分案申请。专利
本专利技术涉及鉴定调节TNF超家族成员三聚体通过TNF受体的信号传导的化合物的方法。特别地，本专利技术涉及鉴定新的小分子调节剂。本专利技术还涉及通过这样的方法鉴定的化合物以及化合物与三聚体的复合物。化合物和复合物可以用于治疗。
技术介绍
肿瘤坏死因子(TNF)超家族是共有调节细胞存活和细胞死亡的主要功能的蛋白质家族。TNF超家族的成员共有共同的核心基序，其由两个反平行的β折叠片(具有反平行的β链)组成，形成“果冻卷(jellyroll)”β结构。TNF超家族成员共有的另一个共同特征是形成同源或异源三聚体复合物。TNF超家族成员的这些三聚体形式结合并激活特定的TNF超家族受体。TNFα是TNF超家族的原型成员。TNFα生产的失调牵涉到许多具有重大医学重要性的病理状况。例如，TNFα牵涉到类风湿性关节炎、炎性肠病(包括克罗恩氏病)、牛皮癣、阿尔茨海默氏病(AD)、帕金森病(PD)、疼痛、癫痫、骨质疏松症、哮喘、系统性红斑狼疮(SLE)和多发性硬化症(MS)。TNF超家族的其他成员也牵涉到病理状况，包括自身免疫性疾病。TNF超家族成员的常规拮抗剂是大分子的并且通过抑制TNF超家族成员与其受体的结合起作用。常规拮抗剂的实例包括抗-TNFα抗体，特别是单克隆抗体，例如英夫利昔单抗阿达木单抗和赛妥珠单抗或可溶性TNFα受体融合蛋白，例如依那西普专利技术概述当受体以与TNF单体相当或过量的浓度存在(即摩尔(浓度)比为至少1：1(受体：单体)；至少3：1(受体：三聚体))时，TNF三聚体通常会结合三个受体。本专利技术人已经鉴定了调节TNF信号传导的小分子实体(SME)。这些SME化合物通过结合三聚体形式的TNF、诱导和/或稳定三聚体中的构象变化而发挥作用。结合有化合物的三聚体对必需的受体具有改变的亲和力，尤其是对第二和第三受体的亲和力降低，这减少了每个三聚体-化合物复合物结合的受体的数量。相应地，通过受体的下游信号传导减少。因此这些化合物可用于治疗由TNF介导的病症。本专利技术人还开发了鉴定能够以这种方式调节TNF信号传导的化合物的方法。本专利技术因此提供了鉴定能够结合TNF超家族成员三聚体蛋白质并调节三聚体蛋白质的通过必需的TNF超家族受体的信号传导的化合物的方法，所述方法包括确定每个三聚体-化合物复合物结合的受体的平均数量，从而鉴定化合物是否能够调节通过受体的信号传导。本专利技术还提供了：-能够与TNF超家族成员三聚体蛋白质结合并且调节TNF超家族成员的通过必需的受体的信号传导的化合物，其中所述化合物导致与对照相比相等的每个三聚体-化合物复合物结合的受体的平均数量，或导致与对照相比每个三聚体-化合物复合物结合的受体的平均数量变化；-式(5)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物；-包含TNF超家族成员三聚体蛋白质和如上定义的化合物的复合物；-如上定义的化合物或复合物，其用于治疗人体或动物体的方法；和-包含如上定义的化合物或复合物和药学上可接受的载体的药物组合物。附图简述图1显示在不存在化合物的情况下TNFα/TNF-R1信号传导中牵涉的相互作用。TNFα三聚体以93pM的KD结合前两个受体，并以约1μM的KD结合第三受体。这些三聚体和受体复合物(与三个受体结合)然后通过受体的二聚化形成筏(raft)结构，其导致下游信号传导。图2显示了仅两个受体二聚体与化合物稳定的TNFα三聚体相互作用的晶体结构。图3显示了两种类型的化合物(A和B)对TNFα/TNF-R1信号传导的影响。两种化合物对受体二聚体的形成都没有影响，但是诱导和/或稳定了具有畸变构象的三聚体的形成。具有第一类化合物(A)的三聚体结合第一和第二受体，但对第三受体具有降低的亲和力。因此，形成仅结合两个受体的三聚体。具有第二化合物(B)的三聚体结合第一受体，但对第二和第三受体具有降低的亲和力。因此形成仅结合一个受体的三聚体。每个三聚体结合的受体数量的减少干扰了筏形成。图4显示了能够调节TNF超家族成员三聚体通过TNF受体的信号传导的化合物的结构。图4A显示了式(1)的化合物的结构，图4B显示了式(2)的化合物的结构，图4C显示了式(3)的化合物的结构，图4D显示了式(4)的化合物的结构，图4E显示了式(5)的化合物的结构。图5显示使用化合物(2)、TNFα和TNFR1(相对于三聚体-化合物复合物3.2倍过量)的尺寸排阻色谱(SEC)实验的结果。在低浓度的化合物(90μM)下，主要峰对应于每个三聚体-化合物复合物结合三个受体。这个峰有一个轻微的肩部，表明一些三聚体-化合物复合物与两个受体结合。当化合物的浓度增加并相对于TNF三聚体的浓度过量(690μM)时，主要峰对应于每个三聚体-化合物复合物结合两个受体。峰上的轻微的肩部表明一些三聚体仍然结合所有三个受体。在该图中，还呈现了包含单独的TNFα以及TNFα和TNFR1(不存在化合物时的阴性对照)的对照的结果。在TNFα和TNFR1阴性对照中，三个受体结合每个三聚体-化合物复合物。这是通过预先孵育相对于TNFα三聚体3.2倍过量的TNFR1来实现的。更多的数据如图6所示。图6显示了图5中描述的SEC实验的对照。将TNFα与不同浓度的TNFR1(范围为1.2-5倍过量的受体：三聚体)孵育。随着TNFR1浓度的增加，TNFα复合物的分子量增加(左移)。与TNFα三聚体浓度相比，添加5倍过量的TNFR1不会使复合物的分子量增加超过使用3.2倍过量的分子量。这表明TNFα在3个TNFR1与3个TNFα单体(每个三聚体3个TNFR1)的摩尔比下饱和。图7显示了使用化合物(5)、TNFα和TNFR1(相对于三聚体-化合物复合物的浓度3.5倍过量)的SEC实验的结果。对于对照也给出了结果，其中第一个是在没有化合物的情况下的TNFα和受体。第二和第三个对照仍然是在没有化合物的情况下的TNFα和受体，但是TNFα被突变以破坏第三、第三和第二受体结合位点处的相互作用。其是TNFα和受体的对照显示指示每个三聚体结合三个受体的峰。在一个受体结合位点具有突变的对照显示对应于每个三聚体结合两个受体的峰，并且在两个位点具有突变的对照显示对应于每个三聚体结合一个受体的峰。在化合物(5)存在下获得的峰位于第二和第三对照之间的中间位置，因此表示三聚体分别结合一个受体和两个受体的混合物。图8A-8D显示结晶学实验的结果，其显示在化合物(1)存在下每个三聚体-化合物复合物结合两个受体。部分(A)-(D)是相同晶体结构的替代视图。图9显示了用浓度渐增的化合物(3)进行FRET实验的结果。如用封闭抗体会观察到的完全抑制作用将导致没有受体与TNFα结合，即完全抑制FRET信号。在这种情况下，FRET信号被部分抑制。在化合物的最高浓度下，最大抑制率为29％，表明三个受体中的一个被抑制结合TNF三聚体。图10显示了用浓度渐增的化合物(4)进行FRET实验的结果。同样，FRET信本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.式(5)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：/n

【技术特征摘要】
20150618 GB 1510758.41.式(5)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：





2.一种复合物，其包含TNF超家族成员三聚体蛋白质和权利要求1所定义的化合物。


3.权利要求1所定义的化合物或权利要求2所定义的复合物在制备用于治疗人体或动物体的药物中的用途。


4.权利要求3的用途，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·P·奥康奈尔，J·R·波特，A·劳森，B·克勒普林，S·E·拉佩基，T·J·诺曼，D·J·麦克米伦，G·J·沃尔洛，D·C·布鲁金斯，R·P·亚历山大，
申请(专利权)人：UCB生物制药私人有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE