用于治疗与有害细胞增殖相关的疾病的治疗剂制造技术

本发明专利技术基于下述研究，即LIF能够激活癌症、尤其是神经胶质瘤中的肿瘤干细胞的自我更新，这表明可采用对LIF、通常是IL‑6型细胞因子的抑制来作为治疗与有害细胞增殖相关的疾病的治疗成分。本发明专利技术还涉及一种能够阻断/抑制干细胞增殖的化合物的鉴定方法，以及在体外对主体罹患与有害细胞增殖相关的疾病进行诊断，或对主体罹患与有害细胞增殖相关的疾病的倾向进行判断，或者对患有所述癌症的主体的平均期望寿命进行预测的方法。

Therapeutic agents for the treatment of diseases associated with harmful cell proliferation

The present invention is based on the following study that LIF can activate the self renewal of cancer stem cells in cancer, especially in glioma, which indicates that the inhibition of LIF, usually IL type 6 cytokines can be used as a therapeutic ingredient for the treatment of diseases associated with the proliferation of harmful cells. The invention also relates to a method for identifying compounds that can block / inhibit the proliferation of stem cells, and to diagnose in vitro a disease associated with the proliferation of harmful cells in the body, or to judge the tendency of the body to suffer from diseases associated with the proliferation of harmful cells, or to the average expectation of the subject with the cancer. A method of predicting life.

【技术实现步骤摘要】
用于治疗与有害细胞增殖相关的疾病的治疗剂本申请为2010年4月6日提交的申请号为201080024673.0的同名中国专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术大体上涉及用于治疗与有害细胞增殖相关的疾病的、更具体的说是癌症和肿瘤干细胞的IL-6型细胞因子的表达和/或活性的抑制剂。同样，本专利技术还描述了一种诊断所述疾病和预测患者的平均期望寿命的方法。
技术介绍
最近在癌症中已经发现了具有干细胞样性质的肿瘤细胞亚群。称为癌症干细胞的这种细胞群据认为是肿瘤的发病、扩散和复发的原因，这说明最有效的疗法是针对肿瘤干细胞进行分区化的治疗。关于这种肿瘤干细胞的分子特征和控制其生物学的调节机制鲜为人知。肿瘤干细胞在其中起显著作用的肿瘤之一是神经胶质瘤，即所谓的神经胶质瘤干细胞或神经胶质瘤起始细胞(GIC)。GIC的特征在于其高致癌潜力，即他们的自我更新能力和分化成多发性细胞系的能力。肿瘤中的干细胞样细胞的数量受其自我再生能力的调节。GIC和癌症干细胞(在一般情况下)会经历对称和不对称的分裂，借此一个干细胞生成两个完全相同的副本，或者一个干细胞副本和一个更加不同的细胞(不对称分裂)。癌干细胞的自我再生能力由对称和非对称分裂之间的平衡来调节，而控制所述自我更新的机制的失调最有可能关系到肿瘤的发病。神经胶质瘤是大脑中最常见的原发肿瘤，根据其组织学和预后可分为四个临床等级。IV级神经胶质瘤(多形性胶质母细胞瘤)具有高度侵略性以及放疗和化疗抗性。尽管在理解与神经胶质瘤的发生和发展有关的分子机制方面取得了进展，但对这类肿瘤的预后和治疗仍然是无效的。神经胶质瘤的治疗选择是手术干预。然而，手术治疗通常伴随着药物的辅助治疗或放射治疗手段。治疗神经胶质瘤的药物选择包括称为PCV的组合物，其包括甲基苄肼、CCNU(洛莫司汀)和长春新碱，以及替莫唑胺联合放疗。GIC据认为是肿瘤的发病、扩散和复发的原因，这说明最有效的疗法是针对神经胶质瘤干细胞进行分区化的治疗。如果不消除GIC，肿瘤将不会被根除。因此，需要有一种能有效消除GIC、防止本领域的现有技术中存在的治疗弊端的替代疗法。
技术实现思路
在第一方面，本专利技术涉及一种用于治疗与有害细胞增殖相关的疾病的IL-6型细胞因子的表达和/或活性的抑制剂。在另一方面，根据本专利技术，本专利技术涉及一种药品组合物，其包括治疗有效剂量的用于治疗与有害细胞增殖相关的疾病的根据本专利技术所述的抑制剂，以及药学上可接受的载体。在另一方面，本专利技术涉及一种在体外确定能够阻断/抑制由IL-6型细胞因子或与其同等功能的变异体所诱导的肿瘤细胞的细胞增殖的化合物的方法，包括以下步骤：(i)将表达IL-6型细胞因子的受体的细胞与IL-6型细胞因子和候选化合物接触，并且(ii)确定阻断所述细胞进行细胞增殖的那些化合物。在另一方面，本专利技术涉及一种在体外对主体内与有害细胞增殖相关的疾病进行诊断、或对主体患所述与有害细胞增殖相关的疾病的倾向进行判定、或对主体内的所述与有害细胞增殖相关的疾病的阶段或严重性进行判定、或者对患有所述与有害细胞增殖有关的疾病的主体所进行的治疗的效果进行监控的方法，包括对源自所述主体的生物样本中的编码IL-6型细胞因子的基因或被所述基因编码的蛋白质或与所述蛋白质同等功能的变异体的表达水平进行量化，其中，与对照样本中编码IL-6型细胞因子的基因或被所述基因编码的蛋白质或与所述蛋白质同等功能的变异体的表达相比，编码IL-6型细胞因子的基因或被所述基因编码的蛋白质或与所述蛋白质同等功能的变异体的表达水平的提高，表示了与有害细胞增殖相关的疾病，或者所述主体具有罹患与有害细胞增殖相关疾病的较大倾向，或者对所述主体进行的治疗没有效果。在另一方面，本专利技术涉及使用包括试剂的试剂盒来对编码IL-6型细胞因子的基因或用所述基因编码的蛋白质或与所述蛋白质具有同等功能的变异体的表达水平进行量化，用于诊断主体内的癌症，或者确定主体患所述癌症的倾向，或者判断主体内所述癌症的阶段或严重程度，或者预测患有所述癌症的主体的存活率和/或平均期望寿命，或者监控对患有所述癌症的主体所进行的治疗的效果，其中，如果试剂检测出所述基因或所述蛋白质或具有同等功能的变异体的表达相对于对照样本增加了，则所述主体可能患有与有害细胞增殖相关的疾病，或者呈现出患有与有害细胞增殖相关的疾病的较大倾向，或者呈现出所述疾病比较严重，或者所进行的治疗无效。附图说明图1TGF-β对源自患者的GIC的自我更新的影响。(A)由患有GBM(GBM1,GBM2,GBM3)的三个不同的患者样本产生的PCTC和GBM神经球的代表性图像。(B)通过对人类GBM的三个样本中的PCTC和神经球进行RT-PCR分析的方式来测定Musashi-1(MSi-1)、Sox2、巢蛋白(Nestin)和β-肌动蛋白(β-actin)。(C)将从GBM1、GBM2和GBM3肿瘤样本中获得的100000个神经球(nsph.)或PCTC细胞每种在三个Balbcnu/nu小鼠颅内接种。对每个小鼠在30～40天时进行磁共振成像(MRI)研究。该图像表示采用从GBM1中获得的神经球或PCTC细胞接种的小鼠的例子。对小鼠称重，每周两次。该图表示用源自GBM1的细胞接种的小鼠的一个例子。(D和E)所示GBM的神经球细胞在无生长因子的条件下用100pMTGFβ1和/或2μMTβRI抑制剂孵育7天，测定新形成的神经球数量(D)以及细胞总数(E)。(F)采用如D和E所示的方式处理的GBM1神经球的代表性图像。图2源自GBM1神经球中以及源自GBM1的在血清中分化的神经球中的所示标志物的免疫细胞化学。图3TGFβ诱导PCTC和GBM神经球内的LIF的表达。(A)在无血清或保持不处理的培养基中，所示的GBM(GBM1-11)的11个样本的PCTC细胞用100pM的TGFβ1处理3小时，LIF的表达水平采用qRT-PCR的方式测定。测定β-actin作为内标归一法对照。(B)依照A的方法处理GBM神经球细胞，并依照A的方法通过qRT-PCR的方式测定LIF的表达水平。(C)在无血清的培养基中，GBM神经球用100pM的TGFβ1和/或2μM的TβRI抑制剂孵育3小时，并依照A采用qRT-PCR的方式测定LIF的mRNA水平。(D)在无血清的培养基中，GBM1神经球用100pM的TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3孵育3小时，并依照A采用qRT-PCR分析的方式测定LIF的mRNA水平。(E)在用100pM的TGFβ1处理48小时后，GBM1神经球内所分泌的LIF蛋白的水平采用ELISA的方式测定。图4TGFβ通过激活型Smad复合物诱导LIF的转录。(A)荧光素酶LIF的指示剂构建体的示意图。(B)A172神经胶质瘤细胞用荧光素酶LIF(-634/+32)、(-276/+32)、(-276/+32)mutSBE或(-73/+32)指示剂构建体转染。转染16小时后，细胞用100pM的TGFβ1处理20小时并分析荧光素酶的活性。(C)U373MG细胞用100pM的TGFβ1处理3小时，用所示抗体和所示PCR引物进行ChIP分析。(D，E)在沉默由所示Smad族中的所示成员的siRNA介导后，通过用100pM的TGFβ1处理3小时的U373MG(D)或GB本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗‑LIF抗体在制备用于治疗神经胶质瘤的药物中的应用，其特征在于：所述神经胶质瘤的特征是呈现出比对照样本中所出现的至少高150％的LIF蛋白浓度，其中所述抗‑LIF抗体通过抑制肿瘤干细胞的自我再生来起作用。

【技术特征摘要】
2009.04.03 ES 2009009281.抗-LIF抗体在制备用于治疗神经胶质瘤的药物中的应用，其特征在于：所述神经胶质瘤的特征是呈现出比对照样本中所出现的至少高150％的LIF蛋白浓度，其中所述抗-LIF抗体通过抑制肿瘤干细胞的自我再生来起作用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述神经胶质瘤是由JAK-STAT信号通路的高活性造成的。3.抗-LIF抗体在制备用于在体外对患有神经胶质瘤的患者进行选择以使用抗-LIF抗体进行治疗的组合物中的应用，包括：(a)对所述患者中的LIF蛋白的表达水平进行量化，以及(b)将所述表达水平与对照水平进行比较，其中当所述患者中的LIF的表达水平大于对照值至少150％时，则选择所述患者以接受用抗-LIF抗体进行的治疗。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述神经胶质瘤是由JAK-STAT信号通路的高活性造成的。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：蛋白质水平的量化通过蛋白质印迹、免疫组织化学法或酶联免疫吸附测定的方式。6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗-LIF...

【专利技术属性】
技术研发人员：琼·塞瓦内·苏亚雷斯，西尔维娅·佩纽拉斯·普列托，若泽·巴塞尔加·托里斯，
申请(专利权)人：加泰罗尼亚研究和深造学院，瓦尔德希伯伦肿瘤研究所，瓦尔德希伯伦大学医院研究所，
类型：发明
国别省市：西班牙,ES