一种诊治舌鳞癌的分子标志物制造技术

本发明专利技术公开了一种舌鳞癌的诊治靶标‑AMTN基因。本发明专利技术通过检测受试者骨髓组织中AMTN基因及其表达产物的含量可以判断受试者是否患有舌鳞癌或者诊断受试者是否存在患有舌鳞癌的风险。另外，本发明专利技术通过研究体外培养的舌鳞癌细胞的增殖指标证明AMTN基因作为治疗舌鳞癌的药物靶点。

A molecular marker for the diagnosis and treatment of squamous cell carcinoma of tongue

The invention discloses a AMTN gene diagnosis and therapy of squamous cell carcinoma of the tongue. The present invention detects the risk of squamous cell carcinoma of the tongue by detecting the AMTN gene and its expression product in the bone marrow tissue of the subject, and whether the patient is suffering from squamous cell carcinoma of the tongue or whether the patient is diagnosed with squamous cell carcinoma of the tongue. In addition, the present invention demonstrates the AMTN gene as a drug target for the treatment of tongue squamous cell carcinoma by studying the proliferation index of the cultured tongue squamous cell carcinoma cells in vitro.

【技术实现步骤摘要】
一种诊治舌鳞癌的分子标志物
本专利技术涉及肿瘤诊断、治疗、预测预后领域，更具体地，本专利技术涉及以检测AMTN异常为手段的肿瘤诊断、预测预后方法；及激活AMTN基因或蛋白质的肿瘤治疗剂。
技术介绍
口腔鳞癌是头颈部肿瘤最常见的恶性肿瘤，约占全身肿瘤的3％，占口腔肿瘤的90％，而舌癌占口腔鳞癌发病率的首位。虽然近几年在发达国家口腔癌的发病率呈现缓慢下降趋势，但总的发病率却在增加。患者多数为40岁以上男性，好发部位多在舌、颊、牙龈等。舌鳞癌的发生是个多因素、多步骤、多阶段的复杂过程，病因学也复杂多样，涉及理化因素、微生物感染、遗传、种族等方面。虽然有关舌鳞癌病因学及相关机制一直是研究的热点，也取得一定成果，但舌鳞癌仍然具有较高的死亡率及预后差。而预后较差的原因往往是诊断和治疗的不及时，由于舌鳞癌早期一般无任何症状，患者往往因疼痛、难以愈合溃疡、不明原因的出血、口腔或者颈部肿块等临床症状就诊，这时病情较晚，生存率较低。有报道认为早期病例及时治疗，5年生存率可达到85％，而一旦出现症状，五年生存率在50％左右。另外病灶面积大，手术切除范围广，也将严重影响患者术后生活质量。研究舌鳞癌生物学行为、发生和发展机制，有助于疾病早诊断、预防和治疗；寻找有效的分子靶基因，降低舌癌的死亡率，是迫切需要解决的问题；同时具有广阔的临床医用前景及重大的科学价值。在分子水平上尤其是在基因水平上进行口腔癌的早期诊断已经成为了诊断口腔癌领域的发展趋势，申请号为：201611136247.1、201511009921.5、201511009794.9、201610245087.8、201610277716.5、201511009921.5、201610798012.2专利文献均披露了可以用于口腔癌或者舌鳞癌诊断的基因标志物。本申请是在现有技术的启示下寻找新的可以用于舌鳞癌诊断的生物标志物。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种通过检测AMTN基因或蛋白表达差异来诊断舌鳞癌的方法。本专利技术的目的之二在于提供一种通过检测AMTN基因或蛋白表达差异来预测舌鳞癌预后的方法。本专利技术的目的之三在于提供一种通过激活AMTN基因或AMTN蛋白来治疗舌鳞癌的方法。本专利技术的目的之四在于提供一种用于筛选治疗舌鳞癌的药物的方法。本专利技术的目的之五在于提供一种用于治疗舌鳞癌的药物。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了检测AMTN的产品在制备舌鳞癌诊断工具中的应用。进一步，所述检测AMTN的产品包括检测AMTN基因表达量的产品。更进一步，所述检测AMTN的产品包括能够定量AMTN基因mRNA的产品，和/或能够定量AMTN蛋白的产品。本专利技术的定量AMTN基因mRNA的产品可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该产品可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。包含在上述产品中的核酸可以通过化学合成来获得，或通过从生物材料制备含有期望核酸的基因，然后使用设计用于扩增期望核酸的引物扩增它来获得。进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(AmplificationRefractoryMutationSystem，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。所述能够定量AMTN基因mRNA的产品包括实时定量PCR中使用的特异扩增AMTN基因的引物，所述引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。产品中包括的引物可以通过通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。上面所述的核酸还可包括探针，所述探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。本专利技术的定量AMTN蛋白的产品可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。本专利技术的定量AMTN蛋白的产品包括特异性结合AMTN蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本专利技术的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本专利技术的定量AMTN蛋白的产品可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸，包含该核酸的载体，和携带该载体的细胞。抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如，制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后，从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的AMTN蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对AMTN蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体：用与上文相同的抗原免疫动物，从经过免疫的动物收集血液样品，从血液中分离出血清，然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如，可以如下荧光标记蛋白质或肽：用磷酸盐缓冲液清洗蛋白质或肽，添加用DMSO、缓冲剂、等准备的染料，然后混合溶液，再于室温放置10分钟。另外，标记可使用商品化的标记试剂盒，诸如生物素标记试剂盒，如生物素标记试剂盒-NH2、生物素标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；碱性磷酸酶标记试剂盒诸如碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2、碱性磷酸酶标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；过氧化物酶标记试剂盒诸如过氧化物酶标记试剂盒-NH2、过氧化物酶标记试剂盒-NH2(DojindoLaboratories)；藻胆蛋白标记试剂盒诸如藻胆蛋白标记试剂盒-NH2、藻胆蛋白标记试剂盒-SH、B-藻红蛋白标记试剂盒-NH2，B-藻红蛋白标记试剂盒-SH、R-藻红蛋白标记试剂盒-NH2、R-藻红蛋白标记试剂盒SH(DojindoLaboratories)；荧光标记试剂盒诸如荧光素标记试剂盒-NH2、HiLyteFluor(TM)555标记试剂盒-NH2、HiLyteFluor(TM)647标记试剂盒-NH2(DojindoLaboratories)；及DyLight547和DyLight647(TechnoChe本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测AMTN的产品在制备诊断舌鳞癌工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测AMTN的产品在制备诊断舌鳞癌工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测AMTN的产品包括检测AMTN基因表达量的产品。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述检测AMTN的产品包括能够定量AMTN基因mRNA的产品，和/或能够定量AMTN蛋白的产品。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述能够定量AMTN基因mRNA的试剂包括实时定量PCR中使用的特异扩增AMTN基因的引物，所述引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示；所述能够定量AMTN蛋白的试剂包括特异性结合AMTN蛋白的抗体。5.一种诊断舌鳞癌的工具，其特征在于，所述工具包括能够...

【专利技术属性】
技术研发人员：马翠，常鹏，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11