PRRT1基因在制备冠心病诊断产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了PRRT1基因可以作为诊断冠心病的分子标志物。本发明专利技术研究证明与正常人相比，冠心病患者血液中PRRT1基因的mRNA表达水平显著下降。根据PRRT1基因与冠心病之间的存在的相关性，可以制备诊断冠心病的试剂盒，该试剂盒可以通过检测受试者血液中PRRT1基因的mRNA水平来判断是否发生冠心病，该试剂盒可在临床上广泛应用。

The application of PRRT1 gene in the diagnosis of coronary heart disease

The present invention discloses the PRRT1 gene as a molecular marker for diagnosing coronary heart disease. The present study has shown that compared with normal persons, the expression of PRRT1 gene in the blood of patients with coronary heart disease (mRNA) is significantly decreased. According to the correlation between PRRT1 gene and coronary heart disease, can prepare a reagent kit for the diagnosis of coronary heart disease, the kit can detect the subjects blood PRRT1 gene mRNA levels to determine whether the occurrence of coronary heart disease, the kit can be widely used in clinical practice.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子诊断领域，涉及一种用于冠心病诊断的分子标志物，具体涉及血液中的分子标志物-PRRT1基因在制备诊断冠心病的产品中的应用。
技术介绍
动脉粥样硬化性心脑血管病已成为世界范围关注的主要健康问题。2004年的世界卫生组织(WHO)报告显示，全世界每年心血管疾病以冠心病和脑卒中为主导致的死亡人数达高达1720万，占所有死亡人数的三分之一。预计2020年这一数字将进一步增加50％，高达2500万，心血管疾病是全球人类的“头号杀手”。在中国进行的一项大规模前瞻性研究也显示，心脏疾病已经成为中国人群的主要死亡原因，分列男、女性死亡原因的第2位和第1位。我国每年新发心肌梗死50万人，随着生活方式的改变以及动脉粥样硬化相关的危险因素持续增加，冠心病与心肌梗死发病也还将呈持续上升趋势。大量的研究资料表明，冠心病是一种复杂疾病，是由多个微效基因与环境因素长期相互作用所致。因此鉴定出与冠心病相关的易感基因或致病基因，在人群中进一步筛选增加疾病风险的易感基因确定易感个体，将有助于冠心病的发病风险预测、新药开发、诊断和个体化治疗。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可用于冠心病早期诊断的分子标志物。相比传统的冠心病的诊断方法，使用基因标志物来诊断冠心病具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在疾病早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测PRRT1基因表达的产品在制备诊断冠心病的工具中的应用。进一步，上面所提到的检测PRRT1基因表达的产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测PRRT1基因表达水平以诊断冠心病的产品。进一步，所述用RT-PCR诊断冠心病的产品至少包括一对特异扩增PRRT1基因的引物；所述用实时定量PCR诊断冠心病的产品至少包括一对特异扩增PRRT1基因的引物；所述用免疫检测诊断冠心病的产品包括：与PRRT1蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断冠心病的产品包括：与PRRT1基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断冠心病的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与PRRT1蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与PRRT1基因的核酸序列杂交的探针。在本专利技术的具体实施方案中，所述用实时定量PCR诊断冠心病的产品至少包括一对特异扩增PRRT1基因的引物的序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。优选地，所述诊断工具包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台。其中，高通量测序平台是一种特殊的诊断工具，检测PRRT1基因表达的产品可以应用于该平台实现对PRRT1基因的表达情况的检测。随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知PRRT1基因的异常与冠心病相关也属于PRRT1基因的用途，同样在本专利技术的保护范围之内。本专利技术还提供了一种诊断冠心病的工具，所述诊断工具包括芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测PRRT1基因转录水平的针对PRRT1基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的PRRT1蛋白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括PRRT1基因在内的多个基因(例如，与冠心病相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括PRRT1蛋白在内的多个蛋白质(例如与冠心病相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与冠心病的标志物同时检测，可大大提高冠心病诊断的准确率。其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测PRRT1基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括PRRT1蛋白的特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方法检测PRRT1基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对PRRT1基因的引物和/或探针。根据PRRT1基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测PRRT1基因表达水平的引物和探针。与PRRT1基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。所述高通量测序平台包括检测PRRT1基因表达水平的试剂。所述试纸包括试纸载体和固定在试纸载体上的寡核苷酸，所述寡核苷酸能够检测PRRT1基因的转录水平。进一步，所述PRRT1蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述PRRT1蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如，，嵌合抗体、scFv、Fab、F(ab’)2、Fv等。只要所述片段能够保留与PRRT1蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本专利技术可以使用任何方法来制备所述抗体。在本专利技术的具体实施方案中，所述针对PRRT1基因的引物序列如下：正向引物序列如SEQIDNO.3所示，反向引物如SEQIDNO.4所示。用于诊断冠心病的PRRT1基因及其表达产物的来源包括但不限于血液、组织液、尿液、唾液、脊髓液等可以获得基因组DNA的体液。在本专利技术的具体实施方案中，用于诊断冠心病的PRRT1基因及其表达产物的来源是血液。在本专利技术的上下文中，“PRRT1基因”包括PRRT1基因以及PRRT1基因的任何功能等同物的多核苷酸。PRRT1基因包括与目前国际公共核酸序列数据库GeneBank中PRRT1基因(NC_000006.12)DNA序列具有70％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列；优选地，PRRT1基因的编码序列包括以下任一一种DNA分子：(1)序列表中SEQIDNO.1所示的DNA序列；(2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列；(3)与(1)或(2)限定的DNA序列具有70％、优选地，90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。在本专利技术的具体实施方案中，所述PRRT1基因的编码序列是SEQIDNO.1所示的DNA序列。在本专利技术的上下文中，PRRT1基因表达产物包括PRRT1蛋白以及PRRT1蛋白的部分肽。所述PRRT1蛋白的部分肽含有与冠心病相关的功能域。“PRRT1蛋白”包括PRRT1蛋白以及PRRT1蛋白的任何功能等同物。所述功能等同物包括PRRT1蛋白保守性变异蛋白质、或其活性片段，或其活性衍生物，等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测PRRT1基因表达的产品在制备诊断冠心病的工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测PRRT1基因表达的产品在制备诊断冠心病的工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测PRRT1基因表达水平以诊断冠心病的产品。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用RT-PCR诊断冠心病的产品至少包括一对特异扩增PRRT1基因的引物；所述用实时定量PCR诊断冠心病的产品至少包括一对特异扩增PRRT1基因的引物；所述用免疫检测诊断冠心病的产品包括：与PRRT1蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断冠心病的产品包括：与PRRT1基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断冠心病的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与PRRT1蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与PRRT1基因的核酸序列杂交的探针。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述用实时定量PCR诊断冠心病的产品至少包括的一对特异扩增PRRT1基因的引物如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。5.一种用于诊断冠心病的工具，其特征在于，所述工具能够通过检测样本中PRRT1基因的表达来诊断冠心病。...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕茜，刘颖，高志康，陈碧，
申请(专利权)人：徐州市中心医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32