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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药,具体涉及一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法和应用。
技术介绍
1、唾液腺恶性肿瘤(salivary glandmalignant tumors)是口腔颌面部常见恶性肿瘤之一,组织病理类型复杂,不同类型的肿瘤在临床和影像表现、诊断、治疗以及预后方面均有不同。根据肿瘤的生物学行为,可将其分为三大类:
2、①高度恶性肿瘤:颈淋巴结及远处转移率较高,术后易复发,预后差,包括低分化黏液表皮样癌(mec)、腺样囊性癌(acc)。②低度恶性肿瘤:颈淋巴结转移率较低,术后可出现复发,预后相对较佳,包括腺泡细胞癌(acicc)、高分化黏液表皮样癌(mec)。③中度恶性肿瘤:介于上述两者之间。
3、发生在口腔颌面部的唾液腺恶性肿瘤治疗难度较大,目前临床上的一线治疗方案还是以手术为主,结合化学药物治疗与放射治疗的综合治疗方案。但根治性手术常并发解剖结构缺陷、颌面部功能障碍等,药物治疗也常常出现耐药现象,常规远距离放疗也有可能损害正常组织,精准性有待进一步优化。而且对于一些局部晚期、低分化及有大量淋巴结转移,或手术治疗意义不大的患者,确定除手术以外的更为精准的个性化的综合治疗方案,对降低患者术后肿瘤复发及转移,提高患者预后及生存质量具有十分重要的临床及社会意义。肿瘤治疗失败的主要原因之一是肿瘤的异质性,与肿瘤的复发转移以及耐药密切相关。目前研究唾液腺恶性肿瘤的体外模型建立中的主力军是肿瘤细胞系,但它并不能良好反映肿瘤的特征,而患者源性的肿瘤类器官(patient-derived tumor or
4、125i放射性粒子植入治疗作为一种高度适形的近距离放疗技术,是将放射源125i放射性粒子植入肿瘤内或者受累组织内,利用放射源持续发出的低能射线,进行肿瘤杀伤。其作为近距离放疗技术,拥有常规远距离放疗不具备的优点。有效距离较短,在生物体内仅为1-2cm(体内约为1.7cm),最大程度降低了对临近正常组织的放射性。近来已在治疗口腔颌面部唾液腺恶性肿瘤方面有了一定的进展。但相关放射学体外实验较少且研究集中在细胞系层面,个体最佳剂量预估、术前疗效评价研究都受到了较大限制。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题,本专利技术提供了一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型构建方法和应用。
2、一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法,包括以下步骤:
3、配制培养基:配制唾液腺恶性肿瘤类器官的培养基;
4、组织解离与消化:肿瘤标本组织利用解离酶1和解离酶2对组织进行解离与消化,获得单细胞;所述解离酶1和解离酶2成分不同、且均具有解离与消化的作用;
5、类器官培养:所述单细胞进行种板,传代,在所述培养基上实现类器官多代培养;
6、构建唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型:125i放射性粒子干预类器官。
7、优选的,所述培养基包括:基础培养基advance dmem/f12和相关功能组分;
8、所述相关功能组分为:hepes缓冲液,0.5-2x;glutamaxtm,0.5-2x;n2补充剂,0.5-2x;青霉素-链霉素-两性霉素溶液,0.5-2x;b27补充剂,0.5-2x;n-乙酰半胱氨酸,0.5-2.5mmol/l;烟酰胺,5-30mmol/l;rock抑制剂5-20μmol/l;重组human r-spodin-1蛋白,0.05-0.25μg/ml;重组human noggin蛋白,0.05-0.2μg/ml;重组human wnt-3a蛋白,0.05-0.2μg/ml;
9、prostaglandin e2,0.05-0.2μg/ml;a83-01,0.2-1μmol/l;humanfgf-10,5-20ng/ml;human egf,30-100ng/ml;butylatedhydroxyanisole,2-8ng/ml;gastrin i,0.01μmol/l。
10、优选的,相关功能组分在所述培养基中的优选浓度为:hepes缓冲液,1x;glutamaxtm,1x;n2补充剂,1x;青霉素-链霉素-两性霉素溶液,1x;b27补充剂,1x;n-乙酰半胱氨酸,1.25mmol/l;烟酰胺,10mmol/l;rock抑制剂,10μmol/l;重组human r-spodin-1蛋白,150ng/ml;重组human noggin蛋白,100ng/ml;重组human wnt-3a蛋白,100ng/ml;prostaglandin e2,1μmol/l;a83-01,0.5μmol/l;human fgf-10,10ng/ml;human egf,50ng/ml;butylated hydroxyanisole,5ng/ml;gastrin i,0.01μmol/l。
11、优选的,所述解离酶1为无血清的dmem、5mg/ml的ⅱ型胶原酶和10μg/ml的dnaseⅰ的混合物。
12、优选的,所述解离酶2为0.25%胰蛋白酶-edta(1x)和10μg/ml的dnaseⅰ的混合物。
13、优选的,解离与消化时,组织经所述解离酶1消化三次后,再使用所述解离酶2消化类器官培养时,所述单细胞与所述培养基的用量比为细胞总数(1.6-2.0)*105个:5000-6000μl。
14、优选的,125i放射性粒子干预类器官3-5天。
15、所述的构建方法构建得到的唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型。
16、所述的唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型在预测放射治疗对肿瘤的杀伤情况中的应用。
17、与现有技术相比,本专利技术的有益效果在于:
18、本专利技术实现了培养出能够高度保留患者来源唾液腺恶性肿瘤异质性的立体类器官、并在类器官平台上个体化建立粒子放射学模型,精准预测放射治疗对肿瘤的杀伤情况的目的。
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1.一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法,其特征在于,所述培养基包括:基础培养基Advance DMEM/F12和相关功能组分;
3.根据权利要求2所述的一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法,其特征在于,相关功能组分在所述培养基中的优选浓度为:HEPES缓冲液,1X;GlutaMAXTM,1X;N2补充剂,1X;青霉素-链霉素-两性霉素溶液,1X;B27补充剂,1X;N-乙酰半胱氨酸,1.25mmol/L;烟酰胺,10mmol/L;Rock抑制剂,10μmol/L;重组Human R-Spodin-1蛋白,
4.根据权利要求1所述一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法,其特征在于,所述解离酶1为无血清的DMEM、5mg/mL的Ⅱ型胶原酶和10μg/mL的DNaseⅠ的混合物。
5.根据权利要求1所述一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法,其特征在于,所述解离酶2为0.25%胰蛋白酶-EDTA(1X)和10μg
6.根据权利要求1所述一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法,其特征在于,解离与消化时,组织经所述解离酶1消化三次后,再使用所述解离酶2消化。
7.根据权利要求1所述一种唾液腺恶性肿瘤类器官的构建方法,其特征在于,类器官培养时,所述单细胞与所述培养基的用量比为细胞总数(1.6-2.0)*105个:5000-6000μL。
8.根据权利要求1所述一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法,其特征在于,125I放射性粒子干预类器官3-5天。
9.一种根据权利要求1所述的构建方法构建得到的唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型。
10.权利要求9所述的唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型在预测放射治疗对肿瘤的杀伤情况中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法,其特征在于,所述培养基包括:基础培养基advance dmem/f12和相关功能组分;
3.根据权利要求2所述的一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法,其特征在于,相关功能组分在所述培养基中的优选浓度为:hepes缓冲液,1x;glutamaxtm,1x;n2补充剂,1x;青霉素-链霉素-两性霉素溶液,1x;b27补充剂,1x;n-乙酰半胱氨酸,1.25mmol/l;烟酰胺,10mmol/l;rock抑制剂,10μmol/l;重组human r-spodin-1蛋白,
4.根据权利要求1所述一种唾液腺恶性肿瘤类器官放射学模型的构建方法,其特征在于,所述解离酶1为无血清的dmem、5mg/ml的ⅱ型胶原酶和10μg/ml的dnaseⅰ的混合物。
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【专利技术属性】
技术研发人员:孟箭,徐凤,陈霖,陈寅瑜,周霖,
申请(专利权)人:徐州市中心医院,
类型:发明
国别省市:
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