MED6基因作为急性心肌梗死风险预测标记物中的用途制造技术

本发明专利技术提供了MED6基因作为急性心肌梗死风险预测标记物中的用途，以MED6基因和或基因的表达产物作为一种新的急性心肌梗死风险预测和诊断治疗靶点，利用MED6基因及其表达产物制备急性心肌梗死风险预测标记物和诊断制剂，具有重要的临床应用意义和开发价值。

Use of the MED6 gene as a marker for risk prediction of acute myocardial infarction

The present invention provides MED6 gene as acute myocardial infarction risk prediction markers in use, the expression product of MED6 gene and gene or as an acute myocardial infarction risk prediction and diagnosis of new therapeutic targets, and the expressed product was prepared by the acute myocardial infarction risk prediction markers and diagnostic agents using MED6 gene, has clinical application and development of important value.

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术提供一种预测和诊疗急性心肌梗死的标记物，进一步讲是提供了MED6基因作为标记物表达产物和生物制剂在制备急性心肌梗死预测和诊疗药物中用途，属于基因诊断和生物医药领域。
技术介绍
：冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称，冠心病CAD）是危害人类健康最常见的心血管疾病。尽管通过生活方式的改善，对高脂血症、高血压、糖尿病、代谢综合征、吸烟等主要危险因素的控制，冠心病的死亡率总体呈现下降趋势。但伴随着人口的增长和老龄化，预计到2030年冠心病仍将会是全球范围内巨大的健康和经济负担。因此，临床上需要有效的风险预测方法，对高危人群给予有效识别，从而更早的干预，来降低急性心血管事件的发生，改善病人预后。冠心病的发生和发展是在遗传因素和环境因素基础上，多重危险因素共同作用的结果。近年来随着遗传学技术的进步，基因表达分析被广泛应用于疾病的研究。基于外周血的冠心病差异基因表达分析为冠心病的早期预防、诊断和治疗提供了新的视角。基因表达分析不仅有助于探索冠心病的复杂性，并且可以充分提供每个个体的遗传风险信息，从而实现对高危人群的早期预防。外周血基因转录水平表达的变化可以在疾病过程中反应病人病理和生理状况的变化。然而，对于基因表达的调控是一个非常复杂的过程，转录调控的改变与许多疾病的发病相关。中介体复合物（MED）在真核生物的转录过程中起到至关重要的作用。尽管近期许多研究表明MED的结构和/或功能的改变与许多疾病相关，但主要研究领域为癌症和神经系统疾病等。MED6基因编码的中介体复合物亚基6蛋白是MED的重要组成部分，参与几乎所有的RNA聚合酶Ⅱ相关基因的转录调节，在现有研究中未见对MED6与心肌梗死的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种急性心肌梗死风险预测和诊断制剂，所述急性心肌梗死风险预测和诊断制剂检测MED6基因和或基因的表达产物。进一步的，所述的MED6基因和或基因的表达产物在急性心肌梗死外周血中低表达。进一步的，所述的MED6基因和或基因的表达产物的表达水平荧光定量检测方法。本专利技术的目的在于所述急性心肌梗死风险预测和诊断制剂检测MED6基因和或基因的表达产物进一步的，采用荧光定量试剂盒、基因芯片、酶联免疫、抗体杂交方法外周血中基因的表达检测方法和相关的生物制剂。本专利技术的目的在于所述急性心肌梗死风险预测和诊断制剂检测MED6基因和或基因的表达产物进一步的，包含本MED6基因和或表达产物用于急性心肌梗死风险预测和诊断的生物制剂。本专利技术中荧光定量PCR检测中使用的引物对P，其序列如下：上游引物序列：5’TGCAGAGGCTAACATTAGAACAC3’；下游引物序列：5’GCTGTTGCTTCCGAATGATGA3’。本专利技术中荧光定量PCR检测体系及反应条件：荧光定量PCR反应体系：20ul反应体系，每个反应包括:10ulSYBRPremixExTaqTM，上、下游引物各0.5ul(浓度为10umol/L)，无核酸酶的双蒸水8ul，cDNA模板1ul。权利要求3中所述的荧光定量PCR反应条件：应用实时荧光定量PCR系统扩增。反应条件为95℃预变性10分钟；40个循环：95℃变性15秒,60℃退火20秒,72℃20延伸秒；溶解曲线和扩增曲线95℃1分钟，55℃30秒,95℃30秒。以GAPDH基因为内参基因，所有样本至少重复测量三次，结果取均值。本专利技术进行的外周血急性心肌梗死差异基因表达谱分析结果显示：在急性心肌梗死病人的外周血白细胞中存在着大量差异表达的基因。其中，MED6基因在急性心肌梗死病人外周血中呈现显著低表达。在专利技术人前期研究成果的基础之上，通过扩大样本量，来进一步验证MED6基因在急性心肌梗死发病过程中的差异表达，并利用RNA干扰降低大鼠心肌细胞中MED6表达水平，进一步分析MED6基因对表达水平与急性心肌梗死发病的作用机制。本专利技术的积极效果在于：提供了以MED6基因和或基因的表达产物一种新的急性心肌梗死风险预测和诊断治疗靶点，利用MED6基因及其表达产物制备急性心肌梗死风险预测标记物和诊断制剂，具有重要的临床应用意义和开发价值。附图说明图1为MED6基因RT-PCR扩增目的片段电泳图及MED6基因mRNA相对表达量，A为MED6基因RT-PCR扩增目的片段电泳图，其中，泳道1是DL500DNAladdermarker，泳道2、3、4是RT-PCR产物；B为MED6基因mRNA相对表达量，其中**代表P<0.01，CAD代表冠心病组，Control代表对照组；图2为MED6基因相对表达量的ROC曲线；图3为大鼠心肌细胞干扰后MED6基因相对表达量，A是大鼠心肌细胞干扰后MED6基因mRNA相对表达量，其中**代表P<0.01；B是大鼠心肌细胞干扰后MED6蛋白表达水平WesternBlot检测结果，其中**代表P<0.01，样本编号为1、2为干扰组，样本编号为3、4为阴性对照组；图4为大鼠心肌细胞MED6干扰后各时间点细胞培养基中甘油三酯浓度随转染时间变化趋势。具体实施方式结合实例具体实例，进一步阐述本专利技术，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。本领域的普通技术人员可以理解，在不脱离本专利技术的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型。本专利技术主要采用荧光定量PCR筛选出急性心肌梗死相关基因，结合分子生物学实验和临床病例关联分析，另一方面，采用RNA干扰技术降低基因表达水平，进一步验证基因的生物学功能，证实了MED6是急性心肌梗死诊治标志物。病例的收集依据2012年公布的心肌梗死全球统一定义。选取2014年11月-2016年7月于吉林大学中日联谊医院心血管内科住院治疗，明确诊断为急性心肌梗死的病人106例为急性心肌梗死组。非冠状动脉粥样硬化性心脏病者105例为对照组。并根据冠状动脉造影结果，按照Gensini评分系统对研究对象的冠状动脉血管病变严重程度进行评分，分值越高病变越严重。通过以下试验表明本专利技术医疗效果一、本专利技术医疗效果的排除标准：1.因经皮冠状动脉介入治疗（PCI）或冠状动脉旁路移植术（CABG）引发的心肌梗死。2.继发于供需失衡相关的心肌损伤：如冠脉内皮功能障碍无明显冠脉疾病、冠脉痉挛、冠脉栓塞、快速／缓慢型心律失常、严重贫血、重症呼吸衰竭、主动脉夹层或严重主动脉瓣疾病、肥厚型心肌病等。3.非心肌缺血相关的心肌损伤：心脏挫伤、手术、消融、起搏、或除颤仪除颤、伴心脏受累的横纹肌溶解症、心肌炎、心脏毒性药物等。4.多因素或不确定的心肌损伤：严重心力衰竭、应激性心肌病、严重肺栓塞或肺动脉高压、败血症和危重病人、肾功能衰竭、严重的急性神经系统疾病，如卒中、蛛网膜下腔出血等。5.合并有严重感染性疾病、恶性肿瘤。6.正在患有的、慢性的或复发性的传染性疾病史。7.（活动性或潜伏性）结核感染史或证据。8.患有免疫系统疾病和（或）正在服用激素。怀疑或证实处于免疫缺陷状态的患者。9.临床资料或者冠脉造影资料不全者。详细记录临床资料，包括：用药史、血脂水平、空腹血糖水平、静息血压、体质指数（BMI）、冠状动脉造影资料、冠心病家族史、吸烟史，以及合并其它临床疾病情况（如高血压、糖尿病）等。二、急性心肌梗死患者组及对照组外周血中MED6基因表达情况：1．本文档来自技高网...

【技术保护点】
MED6基因及其表达产物在制备急性心肌梗死风险预测标记物和诊断制剂中的用途。

【技术特征摘要】
1.MED6基因及其表达产物在制备急性心肌梗死风险预测标记物和诊断制剂中的用途。2.由MED6基因及其表达产物制备的急性心肌梗死风险预测标记物和诊断制剂，其特征在于：所述急性心肌梗死风险预测标记物和诊断制剂采用常规PCR相对定量，荧光定量试剂盒、酶联免疫方法、蛋白杂交、基因芯片检测受试者或急性心肌梗死患者外周血中基因的表达水平。3.根据权利要求2所述的急性心肌梗死风险预测和诊断的检测方法，其特征在于：以受试者或急性心肌梗死患者外周血提取基因组DNA为模板，荧光定量检测MED6基因mRNA表达水平使用的特异性检测基因的引物对P序列，其序列如下所示：上游引物序列：5’TGCAGAGGCTAACATTAGAACAC3’；下游引物序列：5’GCTGTTGCTTCCGAATGATGA3’。4.根据权利要求1所述的急性心肌梗死风...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟繁波，杨丽萍，谭卜川，刘谦，张文，杨玉双，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22