一种接枝视黄醇聚合物及采用其作为载体的喜树碱化合物制造技术

本发明专利技术公开了一种接枝视黄醇聚合物及采用其作为载体的喜树碱化合物，喜树碱化合物可特异性降低纤维化肝组织中活化肝星状细胞的蛋白缺氧因子HIF‑1‑α、糖酵解途径限速酶基因和肌成纤维母细胞性标记基因的表达，抑制了肝纤维化的发生发展，降低了喜树碱对肝脏细胞的毒副作用，采用视黄醇修饰的载体，利用配体受体间特异性识别和结合实现对HSC的主动靶向作用。

Graft retinol polymer and camptothecin compound using the same as carrier

The invention discloses a graft polymer used as retinol and camptothecin compounds as carrier, camptothecin compounds can specifically reduce the activation of hepatic stellate cells in liver fibrosis protein factor HIF 1 hypoxia alpha, glycolysis rate limiting enzyme gene and expression of myogenic fibroblastic marker gene, inhibition the development of liver fibrosis, reduce toxic side effects on the liver cells by camptothecin, carrier retinol modified by ligand receptor, the specific recognition and binding of HSC to realize the active target function.

【技术实现步骤摘要】
一种接枝视黄醇聚合物及采用其作为载体的喜树碱化合物
本专利技术涉及药物领域，具体涉及一种接枝视黄醇聚合物及采用其作为载体的喜树碱化合物、制备方法及其应用。
技术介绍
肝星状细胞(hepaticstellatecell，HSC)的激活和大量扩增在肝纤维化发生过程中占有非常重要的地位；通过抑制炎症反应、对抗氧化应激、调节相关细胞因子的活性、干扰细胞因子信号传导等途径抑制HSC的增殖、活化和诱导其凋亡已经成为治疗肝纤维化的重要手段；目前相继有人尝试使用紫杉醇、姜黄素、NO类等药物来抑制活化态HSC的增殖和ECM的沉积；HSC的激活和活化表型的维持需要旺盛的糖酵解代谢活动，抑制糖酵解代谢活动可以促使活化态HSC从肌成纤维母细胞(Myofibroblastic,MF)表型向静息态表型逆转；因此，本专利技术使用我国特有药物喜树碱来抑制糖酵解途径关键调控蛋白缺氧因子(hypoxia-inducible-factor1-alpha,HIF-1-α)的蛋白水平和活性、从而抑制其下游糖酵解途径相关基因的表达和MF表型相关蛋白的表达；但是喜树碱难溶于水、毒副作用大；若制成盐则活性降低，进入体内又易为体循环系统清除；因此它在临床中的应用受到很大限制。
技术实现思路
本专利技术提供一种对HSC具有特异性靶向作用，并可以减轻喜树碱对肝细胞等其它肝脏细胞和组织器官的非特异性毒副作用的采用接枝视黄醇聚合物纳米载体的喜树碱胶束、制备方法及其应用。本专利技术采用的技术方案是：一种接枝视黄醇聚合物，化学结构式如下：式中，n＝20，m＝40-44。采用接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物为接枝视黄醇聚合物物理包裹喜树碱组成。采用接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物的制备方法，包括以下步骤：(1)将喜树碱与接枝视黄醇聚合物按质量比为1:5、1:10或1:20的比例溶于二甲基亚砜；(2)将步骤(1)中得到的溶液放入透析袋中，透析48h后，将收集得到的胶束溶液冷冻干燥后得到所需要的化合物；其中透析袋截留分子量为3500。接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物可以降低纤维化肝组织中蛋白缺氧因子HIF-1-α的表达。接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物可以降低纤维化肝组织中糖酵解途径限速酶基因的表达。接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物可以降低纤维化肝组织中肌成纤维母细胞性标记基因的表达。接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物能够作为促使活化态肝星状细胞向静息态表型的逆转的靶向性药物。接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物能够作为抑制肝纤维化的发生发展的靶向性药物。本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术采用的载体由双亲性嵌段聚合物形成，可以降低喜树碱对肝脏细胞的毒副作用；(2)本专利技术采用视黄醇修饰的载体，利用配体受体间特异性识别和结合实现对HSC的主动靶向作用；(3)本专利技术的接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物能延长其体循环时间、提高其在纤维化肝脏中的富集和对HSC的特异性靶向作用和降低使用剂量，并减少毒副作用；通过促使活化态HSC向静息态表型的逆转，具有温和安全而有效的效果。附图说明图1本专利技术中PEG-PCL核磁1H-NMR图谱。图2为本专利技术中VA-PEG-PCL核磁1H-NMR图谱。图3为本专利技术中PEG-PCL和VA-PEG-PCL的TEM和粒径表征。图4为大鼠原代活化态HSC细胞对本专利技术中PEG-PCL和VA-PEG-PCL装载尼罗红摄取行为荧光照片。图5为大鼠原代活化态HC细胞对本专利技术中PEG-PCL和VA-PEG-PCL装载尼罗红摄取行为荧光照片。图6为本专利技术中PEG-PCL和VA-PEG-PCL载尼罗红胶束的组织分布。图7为本专利技术中慢性纤维化小鼠血清中ALT和AST水平变化。图8为本专利技术中慢性纤维化小鼠肝组织切片HE染色结果。图9为本专利技术对慢性纤维化小鼠肝组织切片SiriusRed染色结果。图10为本专利技术对慢性纤维化小鼠肝组织中基因水平影响。图11为本专利技术对慢性纤维化小鼠肝组织中蛋白表达影响。图12为WesternBlot结果定量分析。图13为本专利技术对慢性肝纤维化小鼠肝组织切片免疫组化(PKM2)。图14为本专利技术对慢性肝纤维化小鼠肝组织切片免疫组化(α-SMA)。图15为本专利技术中VA-PEG-PCL制备流程图。具体实施方式一种接枝视黄醇聚合物，化学结构式如下：式中，n＝20，m＝40-44。作为载体使用时，需制备成纳米胶束，纳米胶束颗粒为球形，粒径的平均值为102nm；上述载体中亲水段材料为聚乙二醇，其分子量为1800～2200，疏水段材料为聚已内脂，其分子量为3921～4570；接枝视黄醇聚合物为双亲性嵌段聚合物，本专利技术中采用聚乙二醇和聚已内脂，不限于上述两种物质；可以是任何可药用的两嵌段聚合物胶束材料，这些载体材料包括但不限于，PEG、PEO、PVP、PEI和PLA。采用接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物，所述化合物为接枝视黄醇聚合物物理包裹喜树碱组成。一种采用接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物的制备方法，包括以下步骤：(1)将喜树碱与接枝视黄醇聚合物按质量比为1:5、1:10或1:20的比例溶于二甲基亚砜；(2)将步骤(1)中得到的溶液放入透析袋中，透析48h后，将收集得到的胶束溶液冷冻干燥后得到所需要的化合物；其中透析袋截留分子量为3500。一种接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物的应用，所述胶束可以降低纤维化肝组织中蛋白缺氧因子HIF-1-α的表达。一种接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物的应用，所述胶束可以降低纤维化肝组织中糖酵解途径限速酶基因的表达。一种接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物的应用，所述胶束可以降低纤维化肝组织中肌成纤维母细胞性标记基因的表达。一种接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物的应用，所述胶束能够作为促使活化态肝星状细胞向静息态表型的逆转的靶向性药物。一种接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物的应用，所述化合物能够作为有效抑制肝纤维化的靶向性药物。试验中用到的纳米胶束载体材料VA-PEG-PCL和PEG-PCL制备方法如下：(1)双端羧基化的聚乙二醇(COOH-PEG-COOH)的制备将聚乙二醇PEG2000、丁二酸酐、氯仿混合，油浴加热至60度反应12h。得到双端羧基化的聚乙二醇(COOH-PEG-COOH)，保存至真空干燥箱；(2)单端接枝视黄醇VA的聚乙二醇(VA-PEG-COOH)的制备将视黄醇，双羧基化的COOH-PEG-COOH按投料比1:1称量，COOH-PEG-COOH加入适量4-二甲氨基吡啶DMAP及1-(3-二甲基胺丙基)-3-乙基碳二亚胺EDC，溶于二甲基亚砜DMSO，视黄醇VA充分溶于DMSO，在氩气保护下避光反应。反应结束后将反应物转移至MW3500的透析袋中透析，每2h换水一次，透析48h后进行冻干；(3)二碳酸二叔丁酯保护的聚己内酯(Boc-PCL)的制备称取N-叔丁氧羰基乙二胺、蒸馏纯化的己内酯单体、氯化亚锡置于单颈瓶中，置于40度水浴锅中加热搅拌并抽真空7h,达到真空度后置于140度烘箱反应7h；反应结束后向反应液中加入冰乙醇沉淀、搅拌、过滤、旋干，真空干燥得到N-叔丁氧羰基乙二胺聚己内酯(Boc-PCL)；(4)单端氨基化聚己内酯(NH2-PCL)的制备称本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种接枝视黄醇聚合物，其特征在于，化学结构式如下：

【技术特征摘要】
1.一种接枝视黄醇聚合物，其特征在于，化学结构式如下：式中，n＝20，m＝40-44。2.采用如权利要求1所述的接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物，其特征在于，所述胶束为接枝视黄醇聚合物物理包裹喜树碱组成。3.如权利要求2所述的一种采用接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将喜树碱与接枝视黄醇聚合物按质量比为1:5、1:10或1:20的比例溶于二甲基亚砜；(2)将步骤(1)中得到的溶液放入透析袋中，透析48h后，将收集得到的胶束溶液冷冻干燥后得到所需要的化合物；其中透析袋截留分子量为3500。4.根据权利要求2所述的一种接枝视黄醇聚合物作为载体的喜树碱化合物的应用，其特征在于，所述化合物可以降低纤维化肝组织中活化...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈渝萍，汪辛，程江，张艳军，
申请(专利权)人：西南交通大学，
类型：发明
国别省市：四川,51