舌鳞癌诊治标志物制造技术

本发明专利技术公开了PIGR基因可以作为舌鳞癌早期诊断的分子标志物。本发明专利技术的实验证明，与正常组织相比，舌鳞癌组织中的PIGR基因表达显著升高，且经过RNA干扰实验证明PIGR能够影响舌鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭和成瘤的能力。根据本发明专利技术的研究成果，可以研发能够抑制PIGR基因表达的药物，从而实现临床上对于舌鳞癌的预防和治疗。

【技术实现步骤摘要】
舌鳞癌诊治标志物
本专利技术涉及生物
，具体地涉及PIGR基因在舌鳞癌的诊断、治疗中的用途。
技术介绍
舌癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一，以鳞癌最为常见，居口腔癌之首。舌癌多发生于舌的中三分之一侧缘，恶性程度较高，局部浸润性强，常累及舌肌，使舌运动受限，影响讲话、进食以及吞咽功能。尽管在治疗方面取得了较大的进展，但是舌癌病人的存活率在过去近几十年内并没有明显的提高。目前研究表明，吸烟、饮酒等化学因素、人乳头(状)瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)以及遗传因素改变与舌癌的发生发展密切相关。虽然研究者们已陆续发现近几十个瘤基因或抑瘤基因参与了舌癌的发生和发展，但到目前为止，舌癌发病的分子机制还未能明确，可能还存在其它肿瘤相关基因参与了舌癌的发病过程。因此，如果能寻找到舌癌特异性相关基因，这将有助于阐明舌癌发病的分子机制，也将为舌癌的诊断、治疗和预后提供分子靶标。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种可用于舌鳞癌早期诊断的分子标志物。相比现有的舌鳞癌的诊断方法，使用基因标志物来诊断舌鳞癌的具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在疾病早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测PIGR基因表达的产品在制备诊断舌鳞癌的工具中的应用。进一步，所述检测PIGR基因表达的产品包括检测PIGR基因mRNA水平的产品、和/或检测PIGR蛋白水平的产品。进一步，所述检测PIGR基因表达的产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片检测PIGR基因表达以诊断舌鳞癌的产品。进一步，所述用RT-PCR诊断舌鳞癌的产品至少包括一对特异扩增PIGR基因的引物；所述用实时定量PCR诊断舌鳞癌的产品至少包括一对特异扩增PIGR基因的引物；所述用免疫检测诊断舌鳞癌的产品包括：与PIGR蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断舌鳞癌的产品包括：与PIGR基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断舌鳞癌的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与PIGR蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与PIGR基因的核酸序列杂交的探针。所述用实时定量PCR诊断舌鳞癌的产品至少包括的一对特异扩增PIGR基因的引物如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。所述检测PIGR基因表达的产品可以是检测PIGR基因表达的试剂、也可以是包含所述试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。所述诊断舌鳞癌的工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台；高通量测序平台是一种特殊的诊断舌鳞癌的工具，随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知PIGR基因的异常与舌鳞癌相关也属于PIGR基因的用途，同样在本专利技术的保护范围之内。本专利技术还提供了一种诊断舌鳞癌的工具，所述工具包括检测PIGR基因表达的试剂；所述试剂包括检测PIGR基因mRNA的引物和/或探针、检测PIGR蛋白的抗体。所述工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测PIGR基因转录水平的针对PIGR基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的PIGR蛋白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括PIGR基因在内的多个基因(例如，与舌鳞癌相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括PIGR蛋白在内的多个蛋白质(例如与舌鳞癌相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与舌鳞癌的标志物同时检测，可大大提高舌鳞癌诊断的准确率。其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测PIGR基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括PIGR蛋白的特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方法检测PIGR基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对PIGR基因的引物和/或探针。根据PIGR基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测PIGR基因表达水平的引物和探针。所述试纸包括检测PIGR基因表达的试剂。所述高通量测序平台包括检测PIGR基因表达的试剂。与PIGR基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。进一步，所述PIGR蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述PIGR蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如，，嵌合抗体、scFv、Fab、F(ab’)2、Fv等。只要所述片段能够保留与PIGR蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本专利技术可以使用任何方法来制备所述抗体。在本专利技术的具体实施方案中，所述检测PIGR基因mRNA的引物包括SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示的引物对。本专利技术还提供了PIGR基因和/或其表达产物的抑制剂在制备治疗舌鳞癌的药物中的应用。所述抑制剂包括抑制PIGR基因表达的试剂、和/或抑制PIGR基因表达产物的试剂。进一步，所述抑制PIGR基因表达的试剂包括抑制基因转录的试剂、抑制基因翻译的试剂；所述抑制PIGR基因表达产物的试剂包括抑制PIGR基因mRNA的试剂、抑制PIGR蛋白的试剂。所述抑制PIGR基因mRNA的试剂包括抑制mRNA稳定性的试剂、抑制mRNA翻译活性的试剂。所述抑制PIGR蛋白的试剂包括抑制PIGR蛋白稳定性的试剂、抑制PIGR蛋白活性的试剂、抑制PIGR蛋白功能的试剂。进一步，抑制PIGR基因mRNA的试剂包括针对PIGR基因mRNA的双链核糖核酸；抑制PIGR蛋白功能的试剂包括PIGR抗原蛋白的肿瘤疫苗、抑制PIGR蛋白功能的抗体。所述抗体可以是多克隆抗体，或是单克隆抗体。在本专利技术的具体实施方案中，所述针对PIGR基因mRNA的双链核糖核酸是siRNA。为了确保PIGR基因能够被高效剔除或沉默，根据PIGR基因的mRNA序列设计了siRNA特异性片段。siRNA的设计根据已发表的通用设计原则(Elbashiret.al2001，Schwarzet.al2003，Khvorovaet.al2003，Reynoldset.al2004，Hsiehet.al2004，Ui-Teiet.al2004)，通过在线工具完成设计，该在线工具为：siRNASelectionPr本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测PIGR基因表达的产品在制备诊断舌鳞癌的工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测PIGR基因表达的产品在制备诊断舌鳞癌的工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测PIGR基因表达以诊断舌鳞癌的产品；所述用RT-PCR诊断舌鳞癌的产品至少包括一对特异扩增PIGR基因的引物；所述用实时定量PCR诊断舌鳞癌的产品至少包括一对特异扩增PIGR基因的引物；所述用免疫检测诊断舌鳞癌的产品包括：与PIGR蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断舌鳞癌的产品包括：与PIGR基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断舌鳞癌的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与PIGR蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与PIGR基因的核酸序列杂交的探针。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用实时定量PCR诊断舌鳞癌的产品至少包括的一对特异扩增PIGR基因的引物如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。4.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，杜海威，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11