本发明专利技术公开了一种诊治椎间盘退行性病变的分子标志物-miR-1249。本发明专利技术利用测序和QPCR实验证明miR-1249在正常对照组织和椎间盘退行性病变组织中的表达存在差异，因此认为miR-1249是诊断椎间盘退行性病变的分子标志物。本发明专利技术通过体外培养的细胞实验证明干扰miR-1249表达可以抑制髓核细胞的增殖，并促进其衰老、凋亡，因此认为miR-1249是治疗椎间盘退行性病变的药物靶标。作为一种新的椎间盘退行性病变诊治分子标志物，该分子标志物在临床上具有广泛的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，涉及miR-1249在诊治椎间盘退行性病变中的用途。
技术介绍
-系列调查表明：在西方工业社会，12%_35%的人患有下腰痛，其中10%已丧失 劳动能力。美国最新统计显示，因下腰痛造成的直接医疗支出和间接损失保守估计为每年 196亿美元，给社会医疗带来沉重负担。椎间盘退行性变是引起下腰痛的主要原因，它与坐 骨神经痛和椎间盘突出、脱垂等疾病关系密切。 人微小核糖核酸，英文名为microRNA，是一类长约19至23个核苷酸的非编码单链 小核糖核酸分子。它们在进化上高度保守，并与动物的许多正常生理活动，如生物个体发 育、组织分化、细胞凋亡以及能量代谢等密切相关，同时也与许多疾病的发生及发展存在着 紧密的联系。最近的研究发现慢性淋巴细胞性白血病以及Burkitt淋巴瘤中的几种微小核 糖核酸的表达水平均有不同程度的下调（Lawrie CH，Gal S，Dunlop HM et al .Detection of elevated levels of tumor-associated microRNAs in serum of patients with diffuse large B-cell lymphoma.Br J Haematol 2008; 141:672-675);分析比较人肺癌、 乳腺癌组织中的微小核糖核酸表达时，发现有若干组织特异性微小核糖核酸的表达水平相 对于正常组织发生了变化（Garofalo M，Quintavalle C，Di Leva G etal.MicroRNA signatures of TRAIL resistance in human non-small cell lung cancer.Oncogene 2008) ^也有研究证明微小核糖核酸影响了心肌肥厚、心衰、动脉粥样硬化等心血管疾病的 发生和发展，并且与II型糖尿病等代谢性疾病有密切关联(Tryndyak VP，Ross SA，Beland FA，Pogribny IP.Down-regulationof the microRNAs miR-34a，miR_127，and miR_200b in rat liver during hepatocarcino genesis induced by a me thy 1-def icientdiet .Mol Carcinog. 2008 0ct21) 这些实验结果提示微小核糖核酸表达及特异 性变化与疾病发生和发展之间存在着必然联系。 由于微小核糖核酸在基因转录后的表达调控中起着超乎想象的重要作用，因此它 与疾病存在以下的关联性:首先，微小核糖核酸的变化可能是病因，这是因为疾病的抑制因 子以及促进因子都可能是微小核糖核酸的靶位点，当微小核糖核酸本身先发生了紊乱表 达，比如本来抑制疾病促进因子的微小核糖核酸表达量降低了，或者抑制疾病抑制因子的 微小核糖核酸表达量升高了，其最终结果都会导致下游一系列基因表达的变化以及某些通 路的整体紊乱，进而诱发疾病发生;其次，微小核糖核酸的变化也可能是疾病的结果，这是 因为当疾病发生时，会导致染色体片段的丢失、基因的突变或者染色体片段的剧烈扩增，若 微小核糖核酸正好位于这一变化区段内，那么其表达量将发生极其显著的变化。 因此，理论上微小核糖核酸分子完全可以作为一类新的疾病标记物，它的特异性 变化必然与疾病产生发展相关联。同时微小核糖核酸还可以作为潜在的药物作用靶点，通 过抑制疾病过程中上调的微小核糖核酸或过表达下调的微小核糖核酸，将有可能极大地缓 解疾病的发生和发展。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种可用于早期诊断椎间盘退行性病变的微小RNA标 记物。 本专利技术的目的之二在于提供上述微小RNA的用途。 为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案： 本专利技术提供了一种微小RNA在制备椎间盘退行性病变诊断工具中的应用，所述微 小RNA选自以下组:初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA;初始miRNA能在人细胞内被剪切并表 达成成熟miRNA;前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA;所述微小RNA是miR-1249〇应当知道，本专利技术的微小RNA包括组成型核酸分子的功能等同物，即变体，其显示 完整微小RNA核酸分子相同的功能，尽管它们通过核苷酸残基的缺失、置换或者插入而突 变。本领域人员应该了解，为了保证微小RNA的稳定性，可以在微小RNA的一端或者两 端增加保护性碱基，如TT，也可对微小RNA碱基进行修饰，但是上述修饰不影响微小RNA的功 能。因此，本领域技术人员熟知，在不影响miR-1249功能的条件下，对miR-1249进行碱基修 饰或者在两端增加碱基获得的序列同样包含在本专利技术的保护范围之内。 在本专利技术的一些具体的实施方式中，所述miR-1249是成熟miR-1249。 虽然在某些【具体实施方式】中所使用的是成熟miRNA，但是本领域技术人员可以预 期，初始miRNA、前体miRNA将可以获得与成熟miRNA同样的技术效果，因为细胞有能力进一 步将初始miRNA、前体miRNA加工为成熟miRNA。 本专利技术的微小RNA核酸分子可以以单链或双链的形式存在。成熟miRNA主要呈单链 形式，而前体miRNA是部分自互补的，以形成双链结构。本专利技术的核酸分子可以是RNA、DNA、 PNA、LNA的形式。 进一步，上述诊断工具包括但不限于，芯片、试剂盒、试纸、高通量测序平台。所述 诊断工具包括用于检测miR-1249的表达水平的试剂。 进一步，所述试剂盒包括针对miR-1249的引物和/或探针；所述芯片包括固相载 体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于 miR-1249的部分或全部序列;所述试纸包括针对miR-1249的引物和/或探针;所述高通量测 序平台包括针对miR-1249的引物和/或探针。 本专利技术提供了一种椎间盘退行性病变的诊断工具，所述诊断工具包括检测miR-1249 表达水平的 试剂。 进一步，所述诊断工具包括试剂盒、芯片、试纸、高通量测序平台。 进一步，所述试剂盒包括针对miR-1249的引物和/或探针；所述芯片包括固相载 体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于 miR-1249的部分或全部序列;所述试纸包括针对miR-1249的引物和/或探针;所述高通量测 序平台包括针对miR-1249的引物和/或探针。 进一步，所述试剂盒中的针对miR-1249的引物和/或探针还可包括针对现有技术 中已经报道的可用于检测前面所述的微小RNA表达水平的引物和/或探针。将多种微小RNA 的检测引物和/或探针放置在同一试剂盒中通过检测多种微小RNA指标联合诊断椎间盘退 行性病变的情况也包含在本专利技术的保护范围之内。 进一步，所述芯片上固定的所述寡核苷酸探针还可包括针对现有技术中已经报道 的可用于检测miR-1249的表达水平的寡核苷酸探针。将多种miRNA的检测探针放置在同一 芯片上通过检测多种miRNA指标联合诊断椎间盘退行性病变也包含在本专利技术的保护范围之 内。 进一步，所述固相载体包括所述固相载体可采本文档来自技高网...
【技术保护点】
微小RNA在制备椎间盘退行性病变诊断工具中的应用，其特征在于，所述微小RNA选自以下组：初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA；初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；所述微小RNA是miR‑1249。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，孙耀兰，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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