与椎间盘退行性病变相关的基因标志物制造技术

本发明专利技术公开了STX7基因可以作为椎间盘退行性病变诊断的分子标志物，本发明专利技术的实验证明：与正常人相比，STX7基因在椎间盘退行性病变患者中表达量高。本发明专利技术还公开了STX7基因可以用于制备治疗椎间盘退行性病变的药物，细胞凋亡实验证明STX7基因过表达能促进髓核细胞凋亡。本发明专利技术的研究成果提供了一种新的椎间盘退行性病变临床诊断方法，同时提供了一种治疗椎间盘退行性病变的药物新靶标。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体地涉及人STX7基因在椎间盘退行性病变的诊断、 治疗中的用途。
技术介绍
椎间盘是人体最早最易随年龄而发生退变的组织，其确切的发病原因目前还不清 楚，但与积累劳损、创伤有重大关系，与生活习惯、职业、营养、全身情况或内分泌也有一定 的关系，大体上形态表现为凝胶样髓核丧失，髓核与纤维环原有的清晰界限逐渐消失，纤维 环板层粗糙和进行性纤维化，最后出现裂隙及色素沉积，椎间盘的高度因水分减少而降低。 目前，治疗椎间盘的方法主要有保守治疗和手术治疗。保守治疗包括卧硬板床休息、推拿按 摩、牵引、针灸等，都是对症治疗;手术治疗包括髓核摘除术、脊柱融合术等，也均为对症治 疗，而且是以牺牲部分或整个椎间盘的结构与功能为代价;而异体椎间盘移植术、人工髓核 置换术及人工椎间盘假体置换术等都存在着明确弊端和缺陷，且有报道此类手术存在 15%_40%的失败率，而二次手术的成功率更是下降到50%，以及融合椎间盘将导致相邻 上、下正常节段椎间盘提早退行性变化。疾病的早期诊断能够显著提高病人摆脱该疾病的 概率，因此寻找椎间盘退行性病变早期诊断及预后相关的特异性分子标志物对实现椎间盘 退行性病变的早期诊断及个体化治疗具有深远意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可用于椎间盘退行性病变 早期诊断的分子标志物。相比传统的椎间盘退行性病变的诊断方法，使用基因标志物来诊 断椎间盘退行性病变的具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在疾病早期就能知晓疾 病风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施。 为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案： 本专利技术提供了检测STX7基因表达的产品在制备诊断椎间盘退行性病变的工具中 的应用。 进一步，所述检测STX7基因表达的产品包括检测STX7基因 mRNA水平的产品、和/或 检测STX7蛋白水平的产品。 进一步，所述检测STX7基因表达的产品包括:通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检 测、原位杂交或芯片检测STX7基因表达以诊断椎间盘退行性病变的产品。 进一步，所述用RT-PCR诊断椎间盘退行性病变的产品至少包括一对特异扩增STX7 基因的引物；所述用实时定量PCR诊断椎间盘退行性病变的产品至少包括一对特异扩增 STX7基因的引物;所述用免疫检测诊断椎间盘退行性病变的产品包括:与STX7蛋白特异性 结合的抗体;所述用原位杂交诊断椎间盘退行性病变的产品包括:与STX7基因的核酸序列 杂交的探针;所述用芯片诊断椎间盘退行性病变的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中， 蛋白芯片包括与STX7蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与STX7基因的核酸序列杂交的 探针。 所述用实时定量PCR诊断椎间盘退行性病变的产品至少包括的一对特异扩增STX7 基因的引物如SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.4所示。 所述检测STX7基因表达的产品可以是检测STX7基因表达的试剂、也可以是包含所 述试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。 所述诊断椎间盘退行性病变的工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测 序平台；高通量测序平台是一种特殊的诊断椎间盘退行性病变的工具，随着高通量测序技 术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正 常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知 STX7基因的异常与椎间盘退行性病变相关也属于STX7基因的用途，同样在本专利技术的保护范 围之内。 本专利技术还提供了一种诊断椎间盘退行性病变的工具，所述工具包括检测STX7基因 表达的试剂;所述试剂包括检测STX7基因 mRNA的引物和/或探针、和/或检测STX7蛋白的抗 体。 所述工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。 其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片;所述基因芯片包括固相载体以及固定 在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测STX7基因转录水平的针对 STX7基因的寡核苷酸探针;所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的STX7蛋白 的特异性抗体;所述基因芯片可用于检测包括STX7基因在内的多个基因（例如，与椎间盘退 行性病变相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括STX7蛋白在内的 多个蛋白质(例如与椎间盘退行性病变相关的多个蛋白质）的表达水平。通过将多个与椎间 盘退行性病变的标志物同时检测，可大大提高椎间盘退行性病变诊断的准确率。 其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒;所述基因检测试 剂盒包括用于检测STX7基因转录水平的试剂;所述蛋白免疫检测试剂盒包括STX7蛋白的特 异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方 法检测STX7基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对STX7基因的引物 和/或探针。根据STX7基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测STX7基因表达水平 的引物和探针。 所述试纸包括检测STX7基因表达的试剂。 所述高通量测序平台包括检测STX7基因表达的试剂。 与STX7基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍 生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任 何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长 度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交 效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过 30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列 最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。 进一步，所述STX7蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述STX7蛋白 的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如，，嵌合抗体、scFv、Fab、F (ab'）2、Fv等。只要所述片段能够保留与STX7蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体 的制备时本领域技术人员公知的，并且本专利技术可以使用任何方法来制备所述抗体。 在本专利技术的具体实施方案中，所述检测STX7基因 mRNA的引物包括SEQIDN0.3和 SEQ ID N0.4所示的引物对。 本专利技术还提供了 STX7基因和/或其表达产物的抑制剂在制备治疗椎间盘退行性病 变的药物中的应用。所述抑制剂包括抑制STX7基因表达的试剂、和/或抑制STX7基因表达产 物的试剂。 进一步，所述抑制STX7基因表达的试剂包括抑制基因转录的试剂、抑制基因翻译 的试剂;所述抑制STX7基因表达产物的试剂包括抑制STX7基因 mRNA的试剂、抑制STX7蛋白 的试剂。所述抑制STX7基因 mRNA的试剂包括抑制mRNA稳定性的试剂、抑制mRNA翻译活性的 试剂。所述抑制STX7蛋白的试剂包括抑制STX7蛋白稳定性的试剂、抑制STX7蛋白活性的试 剂、抑制STX7蛋白功能的试剂。 进一步，抑制STX7基因 mRNA的试剂包括针对STX本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测STX7基因表达的产品在制备诊断椎间盘退行性病变的工具中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，边洋，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11