与子宫肌瘤相关的基因标志物制造技术

本发明专利技术公开了一种用于子宫肌瘤诊断的分子标志物。本发明专利技术利用QPCR和Western blot方法证明TLR3基因在子宫肌瘤组织较正常组织中的表达显著下调，由于TLR3基因与子宫肌瘤存在上述相关性，可以通过TLR3基因表达的检测来诊断受试者是否患有子宫肌瘤。另外，本发明专利技术的实验证明增加TLR3基因表达可以抑制子宫肌瘤细胞的增殖同时存进细胞凋亡，因此TLR3基因及其表达产物可以用于制备治疗子宫肌瘤的药物，广泛在临床上应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及生物
，具体地设及化R3基因在子宫肌瘤的诊断、治疗中的用 途。
技术介绍
子宫肌瘤（别名：子宫良性肿瘤英文:myoma of uterus),是女性生殖器最常见的 一种良性肿瘤。多无症状，少数表现为阴道出血，腹部触及肿物W及压迫症状等。W多发性 子宫肌瘤常见，本病确切病因不明，现代西医学采取性激素或手术治疗，尚无其他理想疗 法，好发于卵巢功能较旺盛的30~45岁的妇女，待到患者50岁W后，由于卵巢功能明显衰 退，肌瘤大多自行缩小。 子宫肌瘤诊断可W通过一些子宫肌瘤的症状而进行初步的判断，然后在做进一步 的检查，但是不能仅靠妇科检查进行确诊。首先，患有子宫肌瘤会感觉到腹痛，其次女性的 月经也会发生改变，甚至会引发不孕或多次流产。目前国内B超检查较为普遍，也是常见的 子宫肌瘤的诊断方法，可W较明确显示肌瘤大小及部位。腹腔镜、宫腔镜、诊断性刮宫有助 于子宫肌瘤的诊断。但是上述物理方法存在灵敏性差或者使患者感觉不适的缺陷，因此期 待新的诊断方法的出现。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可用于子宫肌瘤早期诊断 的分子标志物。使用基因标志物来诊断子宫肌瘤具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者 在疾病早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施。 为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案： 本专利技术提供了检测TLR3基因表达的产品在制备诊断子宫肌瘤的工具中的应用。 进一步，所述检测化R3基因表达的产品包括检测化R3基因 mRNA水平的产品、和/或 检测TLR3蛋白水平的产品。[000引进一步，所述检测化R3基因表达的产品包括:通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检 巧。、原位杂交或忍片检测TLR3基因及其表达产物的表达水平W诊断子宫肌瘤的产品。 进一步，所述用RT-PCR诊断子宫肌瘤的产品至少包括一对特异扩增化R3基因的引 物;所述用实时定量PCR诊断子宫肌瘤的产品至少包括一对特异扩增TLR3基因的引物;所述 用免疫检测诊断子宫肌瘤的产品包括:与TLR3蛋白特异性结合的抗体;所述用原位杂交诊 断子宫肌瘤的产品包括:与TLR3基因的核酸序列杂交的探针;所述用忍片诊断子宫肌瘤的 产品包括：蛋白忍片和基因忍片；其中，蛋白忍片包括与化R3蛋白特异性结合的抗体，基因 忍片包括与TLR3基因的核酸序列杂交的探针。 所述用实时定量PCR诊断子宫肌瘤的产品至少包括的一对特异扩增化R3基因的引 物如沈Q ID NO.3和沈Q ID NO.4所示。 所述检测化R3基因表达的产品可W是检测化R3基因表达的试剂、也可W是包含所 述试剂的试剂盒、忍片、试纸等，也可w是使用所述试剂的高通量测序平台。 所述诊断子宫肌瘤的工具包括但不限于忍片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台； 高通量测序平台是一种特殊的诊断子宫肌瘤的工具，随着高通量测序技术的发展，对一个 人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达 谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知化R3基因的异常与 子宫肌瘤相关也属于TLR3基因的用途，同样在本专利技术的保护范围之内。 本专利技术还提供了一种诊断子宫肌瘤的工具，所述工具包括检测化R3基因表达的试 剂;所述试剂包括检测TLR3基因 mRNA的引物和/或探针、检测TLR3蛋白的抗体。 所述工具包括但不限于忍片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。 其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白质忍片;所述基因忍片包括固相载体W及固定 在固相载体的寡核巧酸探针，所述寡核巧酸探针包括用于检测化R3基因转录水平的针对 化R3基因的寡核巧酸探针;所述蛋白质忍片包括固相载体W及固定在固相载体的TLR3蛋白 的特异性抗体;所述基因忍片可用于检测包括化R3基因在内的多个基因（例如，与子宫肌瘤 相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质忍片可用于检测包括化R3蛋白在内的多个蛋白 质(例如与子宫肌瘤相关的多个蛋白质）的表达水平。通过将多个与子宫肌瘤的标志物同时 检测，可大大提高子宫肌瘤诊断的准确率。 其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒;所述基因检测试 剂盒包括用于检测化R3基因转录水平的试剂;所述蛋白免疫检测试剂盒包括化R3蛋白的特 异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或忍片方 法检测化R3基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对化R3基因的引物 和/或探针。根据化R3基因的核巧酸序列信息容易设计出可W用于检测化R3基因表达水平 的引物和探针。 所述试纸包括检测TLR3基因表达的试剂。[001引所述高通量测序平台包括检测TLR3基因表达的试剂。 与TLR3基因的核酸序列杂交的探针可W是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍 生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核巧酸序列特异性结合，任 何长度都可W。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长 度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交 效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过 30个碱基对，与目的核巧酸序列互补的长度W15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列 最好少于4个碱基对，W免影响杂交效率。 进一步，所述化R3蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述化R3蛋白 的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如，，嵌合抗体、scFvJab、F (ab'）2、Fv等。只要所述片段能够保留与TLR3蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体 的制备时本领域技术人员公知的，并且本专利技术可W使用任何方法来制备所述抗体。 在本专利技术的具体实施方案中，所述检测化R3基因 mRNA的引物包括SEQ ID NO.3和 SEQ ID NO.4所示的引物对。 本专利技术还提供了化R3基因和/或其表达产物的促进剂在制备治疗子宫肌瘤的药物 中的应用。 所述促进剂包括促进化R3基因表达的试剂和促进化R3基因表达产物的试剂;所述 促进化R3基因表达的试剂包括促进基因转录的试剂、促进基因翻译的试剂、促进化R3蛋白 含量的试剂；所述促进化R3基因表达产物的试剂包括促进化R3基因表达产物稳定性的试 剂、促进TLR3基因表达产物活性的试剂、促进TLR3基因表达产物功能的试剂。 具体地，所述促进化R3基因表达的试剂包括:含有化R3基因的试剂、携带化R3基因 的载体或宿主细胞所形成的试剂、含有TLR3蛋白质的试剂。 本专利技术的促进剂一方面可W用于补充内源性的化R3蛋白的缺失或不足，通过提高 化R3蛋白的表达，从而治疗因化R3蛋白缺乏导致的子宫肌瘤。另一方面可W用于促进化R3 蛋白的活性或者功能，从而治疗子宫肌瘤。 本专利技术所述携带基因的载体是本领域已知的各种载体，如市售的载体、包括质粒、 粘粒、隧菌体、病毒等。 在本专利技术中，术语"宿主细胞"包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的 例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物 细胞。较佳地本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测TLR3基因表达的产品在制备诊断子宫肌瘤的工具中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，宋宏涛，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11