本发明专利技术涉及医学生物检测领域，具体是一种检测hUCMSCs增殖能力，判定其临床应用价值的标志物，及其在制备hUCMSCs增殖能力检测试剂或试剂盒中的应用。本发明专利技术还提供一种检测hUCMSCs增殖能力及其临床应用价值的方法。本发明专利技术首次发现了对增殖能力具有较高鉴定价值的生物标志物snoRA7A，通过细胞增殖能力检测试剂盒的研制和应用，可以更便捷、更准确评价hUCMSCs增殖能力及临床可用性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学生物检测领域，具体是一种适用于检测hUCMSCs增殖能力，并以此判定hUCMSCs是否具有临床应用价值的试剂盒和检测方法。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)来源于发育早期的中胚层和外胚层，是干细胞家族的重要成员。其中人脐带间充质干细胞(humanUmbilicalCordMesenchymalStemCells,hUCMSCs)是存在于脐带中的一种MSCs，引其具有取材方便，易于采集和运输，生物学特性稳定，免疫原性低，无异体排斥反应，避免了伦理争议，细胞数量多等优点。在干细胞治疗领域的应用中备受关注。研究人员发现，hUCMSCs可诱导为多种功能性组织细胞，可用于治疗脑瘫、脊髓损伤、老年痴呆、多发性硬化等神经系统疾病、I型糖尿病等疾病的治疗。目前，hUCMSCs在临床疾病治疗中的应用价值已被广泛认可，且已通过PAD认证。研究发现，早期hUCMSCs细胞生物学活性良好，临床应用价值高，晚期细胞增殖活性显著降低，临床应用价值明显降低。参阅文献发现，目前尚没有通过特定指标衡量hUCMSCs的可用性。小核仁RNA(smallnucleolusRNAs，snoRNAs)是一类发现较早且位于核仁内的小非编码RNA。snoRNAs对rRNA的化学修饰作用是其进本功能。另外，有研究表明snoRNAs与一些遗传疾病以及肿瘤性疾病的发生发展存在密切关联。研究发现，部分snoRNA对细胞的增殖具有调控作用，这里，本专利技术人在前期工作发现随hUCMSCs代数增加、细胞增殖减慢，活性降低，snoRA7A的表达量呈下降趋势，且在hUCMSCs培养值第7代后，snoRNA呈显著下降趋势。而此后hUCMSCs生物学活性差，临床应用价值低，不被选择应用于临床治疗。(参见文献(1)Pacilli,A.,Ceccarelli,C.,Trere,D.,&Montanaro,L..SnoRNAU50levelsareregulatedbycellproliferationandrRNAtranscription.IntJMolSci,2013，14(7)：14923-14935.)。目前尚无文献报道有关snoRA7A用于衡量hUCMSCs增殖能力以及评估hUCMSCs是否具有临床应用价值的报道。
技术实现思路
本专利技术的首要目的是解决上述技术问题和指标问题，提出一种检测hUCMSCs增殖能力，判定其临床应用价值的小分子RNA(snoRNA)标志物。为解决上述技术及指标问题，本专利技术对多批次培养的不同代数hUCMSCs增殖能力进行了详细研究，发现在所有培养批次的hUCMSCs细胞中，随hUCMSCs代数增加，snoRA7A表达量呈下降趋势，且第6代到第7代表达量下降明显。本专利技术的第一方面，提供了一种检测hUCMSCs增殖能力，判定其临床应用价值的小分子RNA(snoRNA)标志物：snoRA7A。所述的snoRA7A，GenBankaccessionnumber:AJ609430，具体序列如下：GACCTCCTGGGATCGCATCTGGAGAGTGCCTAGTATTCTGCCAGCTTCGGAAAGGGAGGGAAAGCAAGCCTGGCAGAGGCACCCATTCCATTCCCAGCTTGCTCCGTAGCTGGCGATTGGAAGACACTCTGCGACAGTG(SEQIDNO:1)。本专利技术的第二方面，提供了上述标志物snoRNA在制备hUCMSCs增殖能力检测试剂或试剂盒中的应用。所述的检测试剂或试剂盒检测hUCMSCs内snoRA7A的表达水平。所述的检测试剂或试剂盒包括：对snoRA7A具有检测特异性的探针、基因芯片，或PCR引物。优选的，所述的检测试剂或试剂盒为采用Real-timeRT-PCR(qPCR)方法检测snoRA7A表达量的试剂或试剂盒。优选的，所述的对snoRA7A具有检测特异性的PCR引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO:2、SEQIDNO:3所示。本专利技术的第三方面，提供一种检测hUCMSCs增殖能力及其临床应用价值的试剂盒，所述的试剂盒中包括用于检测snoRA7A表达量的试剂。优选的，所述的试剂为采用Real-timeRT-PCR(qPCR)方法检测snoRA7A表达量的试剂。优选的，所述的试剂盒中含有两组引物，分别为：snoRA7A的引物：P1:CATTCCCAGCTTGCTCCGTA(SEQIDNO:2)P2:ACTGTCGCAGAGTGTCTTCC(SEQIDNO:3)。GAPDH引物：P1:CTTGGGCTACACTGAGGACC(SEQIDNO:4)P2:CATACCAGGAAATGAGCTTGAC(SEQIDNO:5)本专利技术的第四方面，提供一种检测hUCMSCs增殖能力及其临床应用价值的方法，通过检测hUCMSCs内snoRA7A的表达水平鉴定hUCMSCs增殖能力，判定hUCMSCs临床应用价值。本专利技术还提供了用于衡量hUCMSCs增殖能力及临床可用性的snoRA7A表达量的参考值ΔCT-snoRA7A：ΔCt-snoRA7A＝Ct-snoRA7A–Ct-GAPDH本专利技术通过检测ΔCt-snoRA7A的水平，用以鉴定hUCMSCs增殖能力，判定hUCMSCs实际应用价值：若ΔCt-snoRA7A为8以下则表示细胞活性高，临床可用价值高。本专利技术的第五方面，提供检测snoRA7A表达水平的试剂在制备hUCMSCs增殖能力检测试剂或试剂盒中的应用。本专利技术的第六方面，提供序列SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、NO.4、NO.5所示引物的用途，用于制备hUCMSCs增殖能力检测试剂或试剂盒。本专利技术的有益效果在于：1、首次发现了对增殖能力具有较高鉴定价值的生物标志物snoRA7A，通过细胞增殖能力检测试剂盒的研制和应用，可以更便捷、更准确评价hUCMSCs增殖能力及临床可用性；2、本专利技术将人脐带间充质干细中snoRA7A的表达量进行了量化，通过多次检测证实了该检测指标可用于检测细胞增殖能力从而判定其临床应用价值。该发现为huMSC体外培养传代过程中细胞增殖能力的检测及其细胞临床可用性评定提供了方便快捷的检测方法。附图说明图1为不同代数hUCMSCs倍增时间。图2为不同代数hUCMSCs中snoRA7A表达量变化。图3为不同代数hUCMSCs中snoRA7A的具体本文档来自技高网...
【技术保护点】
snoRNA在制备hUCMSCs增殖能力检测试剂或试剂盒中的应用。
【技术特征摘要】
1.snoRNA在制备hUCMSCs增殖能力检测试剂或试剂盒中的应用。
2.根据权利要求1所述的snoRNA在制备hUCMSCs增殖能力检测试剂或
试剂盒中的应用，其特征在于，所述的检测试剂或试剂盒检测hUCMSCs内
snoRA7A的表达水平。
3.根据权利要求1所述的snoRNA在制备hUCMSCs增殖能力检测试剂或
试剂盒中的应用，其特征在于，所述的检测试剂或试剂盒包括：对snoRA7A
具有检测特异性的探针、基因芯片，或PCR引物。
4.根据权利要求1所述的snoRNA在制备hUCMSCs增殖能力检测试剂或
试剂盒中的应用，其特征在于，所述的检测试剂或试剂盒为采用Real-time
RT-PCR方法检测snoRA7A表达量的试剂或试剂盒。
5.根据权利要求3所述的snoRNA在制备hUCMSCs增殖能力检测试剂或
试剂盒中的应用，其特征在于，所述的对snoRA7A具有检测特异性的PCR引
物的核苷酸序列分别如SEQIDNO:2和SEQIDNO:...
【专利技术属性】
技术研发人员：张燕，徐辰，鲁娟，李银娇，张浩，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。