用于同时检测四种病原菌的试剂盒及其非诊断性检测方法技术

本发明专利技术公开了采用荧光定量PCR同时检测鼠疫耶尔森菌、土拉菌、类鼻疽伯克霍尔德菌和布鲁菌四种病原菌的试剂盒和非诊断性检测方法，试剂盒中包括对应四种病原菌的特异性引物和探针。本发明专利技术提供的试剂盒使用方便，所用的试剂少，成本低，检测的特异性强，灵敏度高；检测方法实现了对同一个样本，可进行四种病原菌的检测，大大简化了操作过程，减少了重复操作的步骤，节省时间，减轻重复操作消耗的劳动力，并有效节约成本，实现快速筛查。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术检测领域，具体涉及同时检测鼠疫耶尔森菌、土拉菌、类鼻疽伯克霍尔德菌和布鲁菌四种病原菌的试剂盒及其非诊断性检测方法。
技术介绍
鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)为革兰染色阴性短小杆菌，是鼠疫的病原菌，动物和人间鼠疫的传播主要以鼠蚤为媒介。当鼠蚤吸取含病菌的鼠血后，细菌在蚤胃大量繁殖，当蚤再吸入血时，又将病原菌带入动物或人体内。蚤粪也含有鼠疫杆菌，可因搔痒进入皮内。此种“鼠→蚤→人”的传播方式是鼠疫的主要传播方式，少数可因直接接触病人的污染物而受染，并且肺鼠疫患者可借飞沫传播，造成人间肺鼠疫大流行。鼠疫在临床上有腺型、肺型、败血型及轻型等四型，除轻型外，各型初期的全身中毒症状大致相同。其主要的检测肝脏、肺部、淋巴组织等器官。土拉菌(Francisella tularensis)是一种革兰氏染色阴性的球杆菌，能引起的土拉菌病(tularem ia，简称土拉热或野兔热)，是一种典型的人兽共患病，该病原菌因其传播途径多样，易扩散，毒性强，土拉菌在自然界的媒介主要为节肢类动物如多种蜱类，而宿主主要包括野兔及野鼠类等。在许多疫源地内，通过蜱叮咬而感染的病例非常本文档来自技高网...

【技术保护点】
一组用于多重PCR同时检测四种病原菌的核酸，其特征在于，包括鼠疫耶尔森菌、土拉菌、类鼻疽伯克霍尔德菌和布鲁菌四种病原菌的上、下游引物，其中，所述鼠疫耶尔森菌的上游引物序列如SEQ ID No.1所示，下游引物序列如SEQ ID No.2所示；所述土拉菌的上游引物序列如SEQ ID No.5所示，下游引物序列如SEQ ID No.6所示；所述类鼻疽伯克霍尔德菌的上游引物序列如SEQ ID No.9所示，下游引物序列如SEQ ID No.10所示；所述布鲁菌的上游引物序列如SEQ ID No.13所示，下游引物序列如SEQ ID No.14所示。

【技术特征摘要】
1.一组用于多重PCR同时检测四种病原菌的核酸，其特征在于，包括鼠疫耶尔森菌、土拉菌、类鼻疽伯克霍尔德菌和布鲁菌四种病原菌的上、下游引物，其中，所述鼠疫耶尔森菌的上游引物序列如SEQ ID No.1所示，下游引物序列如SEQ ID No.2所示；所述土拉菌的上游引物序列如SEQ ID No.5所示，下游引物序列如SEQ ID No.6所示；所述类鼻疽伯克霍尔德菌的上游引物序列如SEQ ID No.9所示，下游引物序列如SEQ ID No.10所示；所述布鲁菌的上游引物序列如SEQ ID No.13所示，下游引物序列如SEQ ID No.14所示。2.一组用于荧光定量PCR同时检测四种病原菌的核酸，其特征在于，包括如权利要求1所述鼠疫耶尔森菌、土拉菌、类鼻疽伯克霍尔德菌和布鲁菌四种病原菌的上、下游引物和各病原菌对应的探针，所述鼠疫耶尔森菌的探针序列如SEQ ID No.3所示；所述土拉菌的探针序列如SEQ ID No.7所示；所述类鼻疽伯克霍尔德菌的探针序列如SEQ ID No.11所示；所述布鲁菌的探针序列如SEQ ID No.15所示。3.如权利要求1或2所述的核酸，其特征在于，该组核酸还包括包含检测鼠疫耶尔森菌、土拉菌、类鼻疽伯克霍尔德菌和布鲁菌四种病原菌的阳性扩增产物序列，其中，所述检测鼠疫耶尔森菌的阳性扩增产物序列，包含如SEQ ID No.4所示的序列；所述检测土拉菌的阳性扩增产物序列，包含如SEQ ID No.8所示的序列；所述检测类鼻疽伯克霍尔德菌的阳性扩增产物序列，包含如SEQ ID No.12所示的序列；所述检测布鲁菌的阳性扩增产物序列，包含如SEQ ID No.16所示的序列。4.一种用于荧光定量PCR同时检测四种病原菌的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：如权利要求2所述的鼠疫耶尔森菌、土拉菌、类鼻疽伯克霍尔德菌和布鲁菌四种病原菌的上、下游引物和相应的探针，各条探针的5'端和3'端分别对应标记FAM-BHQ1、Texred-BHQ2、JOE-TAMRA和CY5-BHQ3。5.如权利要求4所述的试剂盒，优选地，还包括检测鼠疫耶尔森菌、土拉菌、类鼻疽伯克霍尔德菌和布鲁菌四种病原菌的阳性扩增产物序列，其中，所述检测鼠疫耶尔森菌的阳性扩增产物序列，包含如SEQ ID No.4所示的序列；所述检测土拉菌的阳性扩增产物序列，包含如SEQ ID No.8所示的序列；所述检测类鼻疽伯克霍尔德菌的阳性扩增产物序列，包含如SEQ ID No.12所示的序列；所述检测布鲁菌的阳性扩增产物序列，包含如SEQ ID No.16所示的序列。6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括Premix EX TaqTM×2。7.一种用于荧光定量PCR同时检测四种病原菌的非诊断性检测方法，其特征在于，该方法用于检测鼠疫耶尔森菌、土拉菌、类鼻疽伯克霍尔德菌和布鲁菌四种病原菌，具体包括以下步骤：(1)从样...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨宇，王静，张志华，吉尚志，赵婷婷，王建成，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11