提供释放细胞的方法和试剂盒。所述方法包括：将培养细胞提供在包括固定在基底上的多层聚电解质涂层的细胞培养载体上，和通过包含DMSO的释放溶液从所述细胞培养载体上释放所述培养细胞。所述试剂盒包括细胞培养载体和释放溶液。所述细胞培养载体包括基底和固定在所述基底上的多层聚电解质涂层且所述释放溶液包含DMSO。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞释放的方法和试剂盒领域本专利技术涉及细胞释放的方法。更详细地讲，本专利技术涉及从基于聚合物的细胞培养载体释放细胞的方法。背景黏附细胞通常在玻璃表面或聚合物基底上生长。常将用于细胞培养的表面预处理以增强细胞黏附和繁殖。在生物医学和生物应用中长期需要允许按需细胞脱离或细胞释放的用于黏附细胞的基质。培养的细胞可通过多种方法从细胞培养载体中脱离或释放。常用的细胞释放方法包括机械方法(诸如，刮削)、用蛋白水解酶(诸如，胰蛋白酶)处理、使用钙螯合剂(诸如，EDTA)或这类方法的组合。然而，这些常规细胞释放方法中的许多可对培养的细胞产生不利影响，且可改变其固有的结构和功能。例如，用胰蛋白酶处理细胞(即，胰酶消化)是一种生硬的方法，且由于其对细胞表型的潜在影响而使得对诸如干细胞的脆弱细胞不合需要。此外，胰蛋白酶通常来源于动物，且可含有杂质，如同时分级分离的蛋白质或生物制剂 (诸如，病毒或支原体)。动物源杂质可限制释放的细胞用于诸如细胞疗法的严苛应用的用途。释放细胞的机械方法为劳动密集型的且对于工业规模细胞培养应用来说常常不实用。其他非酶促法包括使用超声波或冲击波的物理方法，其产生促进细胞脱离的气泡。自包含热响应型聚合物如聚-N-异丙基丙烯酰胺(POTPAAm)的细胞培养载体培养的细胞可通过冷却细胞培养载体到在约4-20°C范围内的温度来释放。有效细胞释放对于工业规模细胞培养方法中的高产率特别重要。因此，存在对研发在不影响细胞形态和细胞活力的情况下快速有效细胞脱离的更好细胞释放技术的新兴需求。专利技术简述本专利技术通常包括用于从细胞培养载体中释放细胞的方法和试剂盒。从细胞培养载体中释放细胞的方法的实例包括将培养细胞提供在细胞培养载体上且通过加入释放溶液从所述细胞培养载体释放所述培养细胞。所述释放溶液包含二甲亚砜(DMSO)。所述细胞培养载体包括在基底上的多层基于聚电解质的涂层。用于培养细胞的试剂盒的实例通常包括细胞培养载体和用于细胞释放的释放溶液。所述释放溶液包含DMS0。所述细胞培养载体包括基底和在所述基底上的多层基于聚电解质的涂层。用于释放细胞的方法的另一实例包括以下步骤在细胞培养载体(包括在基底上的多层基于聚电解质的涂层)上提供培养的人间充质干细胞，和在室温下通过用释放溶液培育细胞而从所述细胞培养载体释放培养细胞。所述释放溶液包含在PBS中的约0. 01% DMSO0附图在参考附图阅读以下详述时将更加透彻地理解本专利技术的这些和其他特征、方面和优势，在附图中相同的符号表示相同元件，其中图IA为在加入包含DMSO的释放溶液之后未涂布载玻片的图像。图IB为在使用包含DMSO的释放溶液释放细胞之后具有多层基于聚电解质的涂层的载玻片的图像。图2代表WST-I细胞测定的图示，说明当与释放的细胞混合并在450nm下测量时 WST-I试剂的光学密度的变化。在450nm下的光学密度与测定系统中存在的细胞数目相关。 细胞使用包含在PBS中的DMSO的释放溶液而从未涂布或多层聚电解质涂布的载玻片释放。专利技术详述为了更清楚且简明地描述本专利技术的专利技术主题，对于各专业术语提供以下定义，其用于以下描述和随附权利要求书中。在整个说明书，专业术语的范例应该视为非限制性实例。本文所提到的“细胞培养载体”为用于黏附并培养细胞的载体。所述细胞培养载体可包括基底。所述基底可用用于细胞黏附和繁殖的合适涂料涂布或层化。合适的涂料可包括但不限于聚电解质。本文所提到的“基底”为对涂层提供载体的基础或支持物。涂布的基底可用作细胞培养载体。本文所提到的“释放溶液”为帮助细胞从细胞培养载体中释放或脱离的溶液。所述释放溶液包含一种或多种极性非质子溶剂，例如二甲亚砜(DMSO)。例如，DMSO属于极性非质子溶剂家族，其为水可混溶的。其他极性非质子溶剂包括但不限于四氢呋喃、丙酮、N， N-二甲基甲酰胺。那些溶剂与诸如聚电解质的聚合物强烈相互作用且能够妨碍氢键以及静电相互作用，这影响聚合物聚集和细胞黏附。所述释放溶液包含在磷酸盐缓冲盐水(PBS) 中的DMSO。本文所提到的“聚电解质”为如下聚合物，其中该聚合物的重复单元带有电解质基团。在这些基团在水溶液(例如，水)中解离时，所述聚合物会带电。聚电解质性质因此类似于电解质(盐)和聚合物(高分子化合物)二者，且往往称为聚合盐。聚电解质溶液像盐一样导电且常像聚合物一样粘稠。许多生物分子为聚电解质。聚电解质的实例包括但不限于多肽(或蛋白质)、DNA和聚合物。对于诸如药物筛选和细胞疗法的应用需要高产率的健康活细胞。工业规模的细胞制造单元或细胞生物反应器常使用合适的细胞培养载体来培养细胞。如果培养的细胞将用于治疗应用中，用于从细胞培养载体中释放细胞的有效非酶促法则会特别有用。用于从细胞培养载体中释放细胞的本专利技术的方法和试剂盒可用于诸如干细胞的脆弱细胞。正常细胞或脆弱细胞的有效释放可使用本专利技术的用于释放细胞的方法和试剂盒达成。用于释放培养细胞的方法的一个实例包括以下步骤将培养细胞提供在细胞培养载体上，和通过加入包含DMSO的释放溶液从所述细胞培养载体上释放所述培养细胞。所述细胞培养载体可包括固定在基底上的多层聚电解质。所述细胞使用包含DMSO的释放溶液释放。所述释放溶液中DMSO的浓度(ν/ ν)可为约0.01% -1.0%。在一些实施方案中，所述释放溶液中DMSO的浓度可为约 0. 02% -0. 5%，以及0. -0. 5%。细胞释放效率可通过改变释放溶液中DMSO的浓度来增强。细胞释放效率可随DMSO浓度增加而增加。所述释放溶液还可包含在磷酸盐缓冲盐水 (PBS)中的DMS0，其中所述溶液的ρΗ为约7. 5。培养细胞的释放可通过在室温下或在约15 °C -37°C、约20 °C -35 °C或约 20°C -30°C的范围内用释放溶液培育细胞培养载体来进一步优化。细胞可通过在室温下在细胞培养载体上培育诸如约1小时-2小时、约30分钟-1 小时或约10分钟-30分钟的多种时间段而从细胞培养载体释放。在一些实施方案中，细胞释放效率可通过改变在加入释放溶液之后用于细胞释放的培育时间来改变。例如，细胞释放效率可随培育时间增加而增加。释放细胞的方法包括将培养细胞提供在细胞培养载体上的步骤。所述方法可包括在细胞培养载体上培养细胞。所述细胞可根据例如细胞类型在约20°C _37°C、约30°C -37°C 和约35°C -37. 5°C范围的各种温度下培养。所述细胞可在培养瓶中生长且可加到细胞培养载体以便进一步生长。细胞可在从诸如但不限于血液、骨髓或组织切片的生物源中提取之后在细胞培养载体上生长。在一些其他实施方案中，所述细胞培养载体可引入旋转瓶、叠层式培养瓶、搅拌釜反应器或任何其他体外细胞培养系统中。所述方法还可用以释放脆性细胞，一旦它们在细胞培养载体上培养。所述脆性细胞可包括但不限于胚胎干细胞、成人干细胞、诱导多能干细胞、树状细胞、造血细胞、间充质基质细胞、神经细胞、再编程细胞或去分化细胞。例如，培养的干细胞通过用包含0.01 % (v/v)DMSO的释放溶液培育细胞培养载体约10分钟的时间而从细胞培养载体释放。用于干细胞培养的有效方法对于以高产率产生用于临床或研究应用的具有高纯度的干细胞来说是关键的。干细胞的培养常需要专用技术，因为干细胞可能本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·鲁宾茨塔恩，R·D·史密斯，E·R·洛格欣，P·苏萨拉，
申请(专利权)人：通用电气公司，
类型：发明
国别省市：
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