一种重组抗TNF-α全人源单克隆抗体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：合成重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的核酸序列；利用所得重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的核酸序列构建载体，转染宿主细胞，筛选高表达的细胞克隆，建立细胞库；利用所得细胞株进行培养，分离纯化，获得重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体。本发明专利技术根据中国仓鼠偏爱密码子设计合成重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的轻链、重链，构建真核表达载体，转染宿主细胞CHO‑GS‑，并采用无血清培养技术培养，分离纯化，获得高纯度的重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体。本发明专利技术制备方法操作简单，生产周期短，适于工业化生产。 1

Preparation method of recombinant human anti TNF- alpha monoclonal antibody

The present invention discloses a preparation method for recombinant human monoclonal antibodies against TNF alpha all human source, including the following steps: synthesis of recombinant DNA sequence of recombinant anti TNF alpha human monoclonal antibody; construction of a vector by using the nucleic acid sequence of the recombinant human monoclonal antibody of recombinant TNF alpha human monoclonal antibody, transferring to the host cell and screening the highly expressed cells The cell bank was established by clone and cell culture. The recombinant human TNF monoclonal antibody was obtained by isolation and purification. According to the Chinese hamster preference codon, the light chain and heavy chain of recombinant anti TNF alpha human monoclonal antibody were designed and synthesized. The eukaryotic expression vector was constructed and transfected into the host cell CHO GS, and the high purity recombinant anti TNF alpha human monoclonal antibody was obtained by using the serum-free culture technology. The preparation method is simple in operation, short in production cycle and suitable for industrial production. One

【技术实现步骤摘要】
一种重组抗TNF-α全人源单克隆抗体的制备方法
本专利技术涉及单克隆抗体
，尤其涉及一种重组抗TNF-α全人源单克隆抗体的制备方法。
技术介绍
类风湿关节炎(RheumatoidRrthritis，RA)，是以关节滑膜的炎症为主要特征的一种慢性、侵蚀性、对称性、小关节、多关节为主的全身性自身免疫病，严重影响患者的生活质量。TNF-α是促使滑膜炎症发生的常见细胞因子，在发病机制的网络中居于重要位置。TNF-α是一种多效性前炎症因子，在炎症反应过程中出现最早、最重要的炎症介质之一：以自分泌和旁分泌方式激活单核巨噬细胞，使其产生大量IL-1、IL-6、IL-8等促炎症因子，引起级联反应，放大信号传导；还可以进一步激发体内细胞间黏附因子(ICAM)的高度表达，导致组织内抗原不能被及时遏制或清除；可联合其他类分湿因子与抗原形成较大的抗原-抗体复合物，并在关节腔内沉积，进一步难以清除。最终造成正常组织损伤，关节肿大，弯曲变形。阿达木单抗(Adalimumab)，商品名为修美乐(Humira)，是一种抗TNF-α的人源化抗体产品，于2002年被FDA批准用于治疗类风湿性关节炎(RA)和强直性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

【技术特征摘要】
1.一种重组抗TNF-α全人源单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：a)合成重组抗TNF-α全人源单克隆抗体的核酸序列；重组抗TNF-α全人源单克隆抗体具有轻链和重链，其中轻链的核酸序列如SEQIDNO.1所示，轻链的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；重链的可变区的核酸序列如SEQIDNO.2所示，重链的可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示；b)利用步骤a)所得重组抗TNF-α全人源单克隆抗体的核酸序列构建载体pHL101-GS/Neo，转染宿主细胞，筛选高表达的细胞克隆，建立细胞库；c)利用步骤b)所得细胞株进行培养，分离纯化，获得重组抗TNF-α全人源单克隆抗体。2.根据权利要求1所述重组抗TNF-α全人源单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤a)中，采用中国...

【专利技术属性】
技术研发人员：王强，
申请(专利权)人：安徽未名生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34