一种单克隆抗体的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种单克隆抗体的纯化方法，包括低pH病毒孵育、层析前处理、层析过程，所述层析前处理采用两步回调pH的方法，包括如下步骤：将低pH病毒孵育后的单克隆抗体用pH调节液第一次调节pH，过滤，用pH调节液第二次调节pH，得到回调pH后的单克隆抗体。本发明专利技术具有减少内毒素、聚集物、宿主细胞蛋白等杂质的残留量，提高单克隆抗体的纯度及增加阴离子层析填料的使用寿命的优点，且工艺操作简单，可以投入工业化生产。根据试验可知，本发明专利技术层析后的单克隆抗体的峰面积百分数高达94.38％，因此，本发明专利技术具有很好的纯化效果，能够将单克隆抗体与杂质很好地分离。

【技术实现步骤摘要】
一种单克隆抗体的纯化方法
本专利技术涉及生物制药
，具体涉及一种单克隆抗体的纯化方法。
技术介绍
当代抗体药物的工艺研发是基于基因工程、细胞工程和发酵工程基础之上的，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞作为主要的哺乳动物细胞表达宿主细胞具有遗传背景清晰、具备翻译后加工能力等特点，成为了蛋白质生产的标准工业化细胞株，同样也适合于抗体蛋白的表达。随着细胞悬浮培养技术的发展，使得大规模培养成为可能，而无血清培养基的应用则使得蛋白纯化工艺更为简便，这一切都大大加速了抗体药物的产业化进程，为制备价廉质优的抗体药物奠定了基础。自首个单克隆抗体制备以来，在Koehler和Milstein的基础上经过近30年的蓬勃发展，单克隆抗体制备技术在生命科学研究以及医学实践方面做出了巨大的贡献，已成为了现代生物技术支柱产业之一。单克隆抗体药物因其靶向特异性，毒副作用低，治疗的高效性等明显优势在肿瘤自身免疫疾病、器官移植排斥及病毒感染等领域有重要的应用。抗体药物制造工艺从研发时期的细胞株构建、培养基优化、上游细胞培养、下游纯化到最后制剂这五个方面的任何一个环节都对抗体药物有很重要的影响，其中又以下游纯化工艺最为复杂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单克隆抗体的纯化方法，包括低pH病毒孵育、层析前处理、层析过程，其特征在于，所述层析前处理采用两步回调pH的方法，包括如下步骤：将低pH病毒孵育后的单克隆抗体用pH调节液第一次调节pH，过滤，用pH调节液第二次调节pH，得到回调pH后的单克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体的纯化方法，包括低pH病毒孵育、层析前处理、层析过程，其特征在于，所述层析前处理采用两步回调pH的方法，包括如下步骤：将低pH病毒孵育后的单克隆抗体用pH调节液第一次调节pH，过滤，用pH调节液第二次调节pH，得到回调pH后的单克隆抗体。2.根据权利要求1所述单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，所述第一次调节pH的值为4.00-7.00；优选地，所述第二次调节pH的值为8.00-9.50。3.根据权利要求1或2所述单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，所述过滤为用0.2-0.5μm孔径的纤维过滤膜进行过滤。4.根据权利要求1所述单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，所述pH调节液选自Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、氯化钠-氢氧化钠缓冲液中的一种；优选地，所述pH调节液选用Tris-HCl缓冲液。5.根据权利要求1或4所述单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，所述pH调节液的浓度为0.01-1.0mol/L，pH调节液的pH值为6.00-11.00。6.根据权利要求1所述单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，所述层析是将回调pH后的单克隆抗体进行阴离子交换层析，包括以下步骤：S1、用预平衡缓冲液对阴离子层析柱进行预平衡，然后用平衡缓冲液对阴离子层析柱进行平衡；S2、将回调pH后的单克隆抗体加入到平衡好的阴离子层析柱中，收集40mAU开始的流...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙俊，
申请(专利权)人：安徽未名生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34