抗TNFα类单克隆抗体的阳离子交换色谱纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种抗TNFα类单克隆抗体的阳离子交换色谱纯化方法。通过在CEX多步洗脱过程中添加尿素和甜菜碱类表面活性剂将包含抗体和污染物的混合物中的污染物去除，使多聚体与抗体分离。本发明专利技术所提供的方法污染物分离效果好；层析过程样品调节简单，避免了pH值的剧烈变化，最终纯化产物中多聚体含量显著降低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及单克隆抗体制备，具体涉及抗TNFα类单克隆抗体的阳离子交换色谱纯化方法。
技术介绍
抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)单克隆抗体(McAb)在临床治疗败血症休克、类风湿性关节炎等疾病中有广泛的应用前景,如英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)、Golimumab都是TNFα类抗体。其中阿达木单抗是全球首个被批准的抗肿瘤坏死因子α(TNFα)全人源单克隆抗体。阿达木单抗可阻止TNFα与其细胞表面受体结合，从而阻断TNFα的生物学活性，最终减轻炎症反应并减少破骨细胞激活，达到控制并缓解症状体征的目的。传统纯化方法如中国专利CN102257006A，公开了通过亲和层析捕获步骤分离和纯化抗体的方法，ProteinA柱由于选择性高和去污染物能力强，经常被首选进行抗体捕获，但其价格昂贵、洗脱的低pH易导致高分子聚合物形成、ProteinA配基掉落等缺点，使越来越多的研究开始关注用非ProteinA工艺来解决现有问题。中国专利CN103998469A公开了用阳离子交本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗TNFα类单克隆抗体的阳离子交换色谱纯化方法，包括对抗体进行阳离子交换色谱洗脱，其特征在于，上样平衡后，进行两次洗脱，其中第一次洗脱的洗脱液中含有0.1‑0.5mol/L尿素，第二次洗脱的洗脱液中含有质量分数0.1％‑1.0％的甜菜碱类表面活性剂。

【技术特征摘要】
2015.03.23 CN 20151012756311.抗TNFα类单克隆抗体的阳离子交换色谱纯化方法，包括对抗体进行阳离子交换色谱洗脱，其特征
在于，上样平衡后，进行两次洗脱，其中第一次洗脱的洗脱液中含有0.1-0.5mol/L尿素，第二次洗脱的洗
脱液中含有质量分数0.1％-1.0％的甜菜碱类表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的甜菜碱类表面活性剂选自十二烷基二羟乙基甜菜
碱、十八烷基二羟乙基甜菜碱或椰油酰胺丙基甜菜碱。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第一次洗脱的洗脱液为pH6.0的含0.2mol/L尿
素的20mmol/LPBS缓冲液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第二次洗脱的洗脱液为pH5.5-6.5、含有质量分数
0.1％-1.0％的甜菜碱类表面活性剂和150-200mmol/L氯化钠的20-60mmol/L柠檬酸盐缓冲液。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的柠檬酸盐缓冲液选自柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液、
磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、醋酸钠-醋酸缓冲液，或磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将CHO细胞发酵表达后菌液分离；
2)将发酵液用水稀释，调节pH至6.00±0.10；
3)过阳离子交换柱，用含有0.1-0.5mol/L尿素的缓冲液进行第一次洗脱；用含有质量分数0.1％-1.0％
的甜菜碱类表面活性剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪艳，杨彬，马旭通，林小鹊，李文佳，孙文正，
申请(专利权)人：广东东阳光药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44