【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术广泛地涉及细胞培养基组合物和细胞培养方法的
特别地，本发明是针对降低多肽，如糖蛋白的异质性。
技术介绍
在哺乳动物细胞的重组蛋白的生产过程中，蛋白质的多个修饰是发生在表达后(即翻译后)，且因此导致重组蛋白产物的异质性。由于翻译后修饰并不是由蛋白质核苷酸序列编码进行编码，而是主要依赖于几个环境酶的作用，从而在生产过程中它们是难以控制并保持在严格(期望)的规格范围。因此特别是在重组治疗性蛋白的制造过程中，最大的挑战是保持蛋白质产物恒定的特性和质量。在多肽的所有相关可能质量属性的综合列表内，C-末端α-酰胺化是归因于C-末端异质性的基团。重链上的C-末端赖氨酸(Lys)的处理是重组单克隆抗体(mAb)最常见的修饰之一。重链的C-末端Lys可以通过碱性羧肽酶(CP)的活性被完全地或部分地除去。通过128Da除去一个C-末端Lys残基降低了分子量，并通过1个单位增加了正电荷。部分地除去C-末端Lys残基导致(由于单克隆抗体(mAb)的四级结构)抗体的混合种群具有零个，一个或两个C-末端赖氨酸残基(Liu等人，2008)。在缺乏赖氨酸时，能够进一步去除第二氨基酸甘氨酸(Gly)，随后剩余的C-末端氨基酸脯氨酸(Pro)酶促地α-酰胺化。C-末端α-酰胺化是公知的，并在多肽和蛋白质的生物活性中具有重大意义。许多神经肽需要C-末端α-酰胺化步骤以使其成熟为活性的受体结合分子。例如，神经毒素非酰胺化类似物较包括C...
【技术保护点】
一种细胞培养基，用于控制在细胞培养物中的至少一种表达多肽的氨基酸残基的[α]‑酰胺化和/或C‑末端分裂，其特征在于，所述培养基包括至少一种必需的微量元素或包含所述元素的化合物，所述元素作用于肽酰甘氨酸[α]‑酰胺化单氧酶(PAM)或羧肽酶(CP)。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.08.20 EP 13181027.71.一种细胞培养基，用于控制在细胞培养物中的至少一种表达多肽的氨基酸残基的
[α]-酰胺化和/或C-末端分裂，其特征在于，所述培养基包括至少一种必需的微量元素或包
含所述元素的化合物，所述元素作用于肽酰甘氨酸[α]-酰胺化单氧酶(PAM)或羧肽酶(CP)。
2.一种细胞培养方法，用于控制至少一种表达多肽的氨基酸残基的[α]-酰胺化和/或
C-末端分裂，所述方法包括至少以下步骤：
i)加入至少一种必需的微量元素或包含所述元素的化合物至培养基中，所述培养基包
括生产多肽的宿主细胞；及
ii)发酵并回收所述多肽。
3.根据权利要求1所述的培养基或权利要求2所述的方法，其特征在于，所述必需的微
量元素或其加成物：
ⅰ)降低了所述C-末端[α]-酰胺化脯氨酸的量或增加了所述C-末端赖氨酸的量；
ⅱ)为离子或其所对应的盐或包括所述离子或其所对应的盐的化合物；和/或
ⅲ)选自如下一组物质：硒、锌和铜。
4.根据权利要求1至3任意一项所述的培养基或方法，包括：
i)至少有效量的硒或其加成物，优选地，所述硒用于控制[α]-酰胺化；
ⅱ)有效量的锌或其加成物，优选地，所述锌用于控制氨基酸残基的C-末端分裂和/或
用于控制[α]-酰胺化；和/或
ⅲ)有效量的铜或其加成物。
5.根据权利要求1至4任意一项所述的培养基或方法，其特征在于，所述培养基包括如
下所述的至少一种必需的微量元素或其组合：
ⅰ)浓度范围为0.175μM至2.98μM的硒，优选为1μM至2.4μM；
ⅱ)浓度范围为0.2μM至20μM的锌，优选为大于3μM至15μM，和/或
ⅲ)浓度范围为0.02μM至1μM的铜，优选为0.1μM至0.8μM。
6.根据权利要求5所述的培养基或方法，其特征在于：
ⅰ)与使用含有2.04μM的铜和0.173μM的硒的标准培养基相比，表达多肽的C-末端α-酰
胺化脯氨酸的量减少了，优选地，所述培养基含有2.3μM+0.6μM的硒，优选地，所述培养基还
包括0.4μM+0.5μM的铜...
【专利技术属性】
技术研发人员：塔尼亚·菲茨科·特里克，
申请(专利权)人：斯洛文尼亚莱柯制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：斯洛文尼亚;SI
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